IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA DE M.O.

PATÓGENOS QUE CRECIERON

EN AGAR SANGRE, MacCONKEY, MANITOL SALADO, CPESE Y SIEMBRA
EN AGAR EMB DE E.coli.
Chavez Guerrero Oscar F.; Espinoza Salinas Brandon L.; Saldivar Lechuga Brenda K.
Ingeniería en Biotecnología, Universidad Politécnica del Valle de México

Resumen
Los microorganismos por lo general pueden vivir y multiplicarse sobre substratos nutritivos preparados en el laboratorio,
denominados medios de cultivo. Los Medios de Cultivo son preparados estériles que contienen sustancias necesarias para el
desarrollo de los microorganismos. Todos los microorganismos requieren agua, carbono, nitrógeno, hidrógeno, calcio, fósforo
y hierro como elementos vitales. Los microorganismos exigentes requieren además factores de crecimiento como aminoácidos,
vitaminas, purinas y otras sustancias que no son capaces de sintetizar. Este artículo trata las bacterias patógenas en el ser
humano. Las colonias de cepas patógenas encontradas en este artículo fueron Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853,
Staphylococcus aureus ATCC BAA 977, Stanieria cyanosphaera ATCC 29371, Streptomyces avermitilis ATCC 29395,
Schistosoma mansoni ATCC 29390, Gemella morbillorum ATCC 29391, Pleurocapsa ATCC 29396, E.coli y los medios de
cultivo utilizados fueron agar sangre, agar MacConkey, agar manitol salado, agar CPESE y agar EMB.
Palabras Clave: medio de cultivo, microorganismos patógenos, nutrientes, colonias, morfología, cepas,

Abstract
.Microorganisms can usually live and multiply on nutritious substrates prepared in the laboratory, called culture media. The
Culture Media are prepared items that are necessary for the development of microorganisms. All microorganisms require water,
carbon, nitrogen, hydrogen, calcium, phosphorus and iron as vital elements. The demanding microorganisms and other growth
factors such as amino acids, vitamins, purines and other substances that do not have the capacity to synthesize. This article
deals with pathogenic bacteria in humans. The colonies of pathogenic strains found in this article were Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC BAA 977, Stanieria cyanosphaera ATCC 29371, Streptomyces
avermitilis ATCC 29395, Schistosoma mansoni ATCC 29390, Gemella morbillorum ATCC 29391, Pleurocapsa ATCC 29396,
E.coli and the culture media used were blood agar, MacConkey agar, salted mannitol agar, CPESE agar and EMB agar.
Key words: culture medium, pathogenic microorganisms, nutrients, colonies, morphology, strains

Objetivo
Ampliar el conocimiento de lo que son las cepas patógenas y reconocer morfológicamente las colonia de los microorganismos
patógenos que crecieron en los diferentes agares como agar sangre, agar MacConkey, agar manitol salado y agar CPESE.
Introducción ligeramente alcalino (7.0 – 7.4), en cambio las levaduras y
Uno de los sistemas más importantes para la identificación hongos requieren un pH ácido (5.0).
de microorganismos es observar su crecimiento en
3.Estar previamente esterilizados o preparados en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
condiciones asépticas.
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo. 4. Estar protegidos de la contaminación ambiental por
tapones de algodón cardé, tapones de goma, tapas
Las condiciones de los medios de cultivo son las metálicas o roscas.
siguientes.
Agar sangre
1.Contener sustancias nutritivas necesarias para el
Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los
desarrollo de los microorganismos (tales como
microorganismos con importancia clínica excepto el de los
aminoácidos, carbohidratos, polialcoholes, vitaminas,
más exigentes.
minerales).
En este medio, las colonias suelen ser más grandes y el
2. Tener un pH que permita un desarrollo óptimo, por lo
crecimiento más profuso que en otros que contienen
general las bacterias patógenos necesitan un pH neutro o
diferentes bases de agar sangre. para propiciar el
crecimiento se derivan de la combinación de dos peptonas
Streptococcus Crecimiento bueno o excelente,
y del extracto de levadura como fuente de vitaminas del
pyogenes débil o adecuada hemólisis beta
complejo B. Se incluye almidón de maíz para absorber los
derivados tóxicos contenidos en la muestra y sirve como Streptococcus Crecimiento bueno o excelente,
fuente de energía para los microorganismos que poseen pneumoniae hemólisis alfa
alfa-amilasas. La sangre de carnero permite detectar las
reacciones hemolíticas y aporta el factor X (hemo) Staphylococcus Crecimiento bueno o excelente;
necesario para el crecimiento de numerosas especies aureus puede ser o no beta hemolítico
patogénicas.
Escherichia coli Crecimiento bueno o excelente;
Fórmula* por litro de agua destilada (pH 7,3 ± 0,2) puede ser o no beta hemolítico

Digerido pancreático de caseína 12.0g Sin inocular Rojo (color sangre)

Digerido péptico de tejido animal 5.0g *Tabla 2

Agar MacCONKEY
Extracto de levadura 3.0g
Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la
Extracto de carne bovina 3.0g recuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos
entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal
Almidón de maíz 1.0g violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram
positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La
Cloruro sódico 5.0g
lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el
Agar 13.5g rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas
colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores
Sangre de carnero, desfibrinada 5% fuertes de lactosa pueden provocar la precipitación de las
sales biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo
*Tabla 1 que se observa fácilmente en el medio por la aparición de
Se utiliza también para ver la capacidad hemolítica de los zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que
microorganismos patógenos, por lo que se considera un no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o
medio diferencial. Ciertas bacterias producen enzimas transparentes.
extracelulares que actúan sobre los glóbulos rojos. Fórmula* por litro de agua purificada (pH 7,1 ± 0,2)
Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias
se determina el tipo de hemólisis que poseen: alfa, beta o Digerido pancreático de gelatina 17.0g
gamma. Para leer con exactitud la hemólisis producida, se
debe levantar la placa de agar sangre y observarla contra la Digerido pancreático de caseína 1.5g
luz.
Digerido péptico de tejido animal 1.5g
La hemólisis de tipo alfa es una hemólisis incompleta,
caracterizada por la destrucción parcial de la membrana de Lactosa 10.0g
los eritrocitos y pérdida de algo de hemoglobina en el agar.
A simple vista este tipo de hemólisis se detecta por la Sales biliares 1.5g
aparición de una coloración verdosa alrededor de la
colonia. La beta-hemólisis se caracteriza por la destrucción Cloruro sódico 5.0g
total de la membrana por lo que se detecta por la aparición
Rojo neutro 0.03g
de un halo transparente alrededor de la colonia. Cuando los
microorganismos no producen ningún tipo de hemólisis se Cristal violeta 0.001g
dice que son gamma-hemolíticos.
A continuación, se muestra una tabla de los tipos de M.O. Agar 13.5g
que crecen en el agar sangre
*Tabla 3

Cepas Tipo de crecimiento La fórmula del agar MacConkey II se diseñó para mejorar
la inhibición del agrupamiento dinámico de la especie
Proteus, lograr una diferenciación más definitiva de los
Digerido pancreático de caseína 5.0g
organismos fermentadores y no fermentadores de lactosa y
alcanzar un crecimiento superior de las bacterias entéricas. Digerido péptico de tejido animal 5.0g
En BD MacConkey II Agar, las peptonas proporcionan los
nutrientes. Cristal violeta inhiben las bacterias gram Cloruro sódico 75.0g
positivas, en especial los enterococos y estafilococos. La
diferenciación de los microorganismos entéricos se logra D-manitol 10.0g
mediante la combinación de lactosa y el indicador de pH
rojo neutro. Se producen colonias incoloras o de color de Rojo fenol 0.025g
rosa a rojo según la capacidad del aislado para fermentar
Agar 15.0g
carbohidratos.
*Tabla 5
A continuación, la tabla de los tipos de M.O. que crecen en El agar sal manitol contiene peptonas y extractos de carne
el agar MacConkey. bovina, que suministran los nutrientes esenciales. Una
concentración de cloruro sódico de 7,5% tiene como
Cepas Tipo de crecimiento resultado una inhibición parcial o completa de los
organismos bacterianos diferentes de los estafilococos. La
Escherichia coli Crecimiento; colonias de
color rosa fermentación de manitol, indicada por el cambio del
indicador de rojo fenol, facilita la diferenciación de la
Proteus mirabilis Crecimiento; colonias de especie de estafilococos.
incoloras a color beige,
A continuación, la tabla de los tipos de M.O. que crecen en
agrupamiento dinámico
el agar Manitol Salado.
inhibido

Salmonella Typhimurium Crecimiento; colonias de Cepas Tipo de crecimiento

incoloras a color beige
Staphylococcus Colonias amarillas de tamaño
Salmonella Abony Crecimiento; colonias de aureus mediano, amarillo medio.
incoloras a color beige
Staphylococcus Colonias blancas de tamaño
Shigella flexneri Crecimiento; colonias epidermidis pequeño a mediano, rojo
incoloras mediano.

Enterococcus faecalis Inhibición de parcial a Proteus mirabilis Inhibición parcial (a

completa completa); colonias incoloras,
agrupación activa inhibida.
Staphylococcus aureus Inhibición de parcial a
completa Escherichia coli Inhibición completa

Sin inocular Rosa claro, ligeramente Sin inocular Rojo

opalescente *Tabla 6

*Tabla 4 Agar CPESE

Agar Manitol Salado
Es un medio de cultivo que se utiliza normalmente en
microbiología. Permite el crecimiento de un determinado
grupo de bacterias mientras que inhibe el crecimiento de
otras. Este medio es importante en el laboratorio clínico
debido a que es capaz de distinguir los microorganismo
patogénicos en un corto periodo de tiempo.
Fórmula* por litro de agua purificada (pH 7,4 ± 0,2)
Extracto de carne bovina 1.0g
Medio (cromogénico que permite el aislamiento, recuento
e identificación directa)
El medio CPS contiene reactivos que consiguen colorear
las colonias y así podemos identificar si existe E. Coli,
Proteus o Enterococo.
Las colonias de E. Coli son rosáceas tirando a burdeos (ß-
glucuronidasa + y ß-glucosidasa -) y dan positivo a la
prueba del indol.
Las colonias de Proteus son incoloras (ß-glucuronidasa –
y ß-glucosidasa -) y dan positivo al TDA (triptófano
desaminasa).
El Enterococo da colonias azul-verde (ß-glucuronidasa – y
ATCC 14028 bueno a excelente;
ß-glucosidasa +) y si se observan cocos al microscopio, se
colonias de gris
confirma la identificación. claro a ámbar
En nuestro caso son colonias de Proteus.
Shigella flexneri ATCC Crecimiento de
Eosina Azul de Metileno (EMB) 12022 adecuado a
excelente; colonias
EMB (fórmula de Holt-Harris y Teague) es un medio desde incoloras
ligeramente selectivo y de diferenciación para el hasta ámbar claro
aislamiento.
Fórmula por litro de agua destilada (pH 7,2 +/- 0,2) Enterococcus faecalis Inhibición parcial;
ATCC 29212 colonias incoloras
Digerido pancreático de gelatina 10.0g
Sin inocular Púrpura con un tinte
Lactosa 5.0g verdoso anaranjado,
ligeramente
Sacarosa 5.0g opalescente
*Tabla 8
Fosfato dipotásico 2.0g

Agar 13.5g Morfología de las colonias

Las colonias son masas visibles de células que se forman
Eosina Y 0.4g por división de una o varias células. El desarrollo de
colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo
Azul de metileno 0.065g identificar las bacterias porque las especies forman a
*Tabla 7 menudo colonias con una forma y aspecto característico. El
El agar EMB contiene colorantes de azul de metileno tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de
y eosina Y, que inhiben las bacterias gram-positivas cada organismo. La morfología de la colonia de una
en cierto grado. Los colorantes también actúan como bacteria puede variar según el medio en que crezca la
indicadores diferenciales en respuesta a la bacteria.
fermentación de la lactosa o la sacarosa por parte de
los microorganismos.
El conjunto de medios de aislamiento de baja
selectividad para Salmonella en muestras fecales y
de otros tipos incluye el EMB Agar (con y sin
sacarosa). Este medio puede inhibir el crecimiento de
las bacterias gram-positivas como los estreptococos
fecales, estafilococos y levaduras, o bien favorecer
su crecimiento con formación de colonias
puntiformes. *Figura 1. Morfología de las colonias según su elevación,
A continuación, se muestra una tabla con los M.O. borde y forma.
que pueden crecer en el agar EMB. Materiales
Cepas patógenas en cajas petri con diferentes agares:
Cepas de M.O Tipos de Agar Sangre
crecimiento
Agar MacConkey
Escherichia coli ATCC Crecimiento de Agar Manitol Salado
25922 bueno a excelente; Agar CPESE
colonias de color Agar Emb
negro azulado con Mecheros
brillo verde metálico 2 tubos de ensaye
Asa bacteriológica
Salmonella Typhimurium Crecimiento de Guantes y cubrebocas
 ( equipo 7 carne de res con pO2) y se hace el estriado.
Metodología Resultados
Colocarse los guantes y cubrebocas para evitar algún
contagio.
Hacer una zona de asepsia con ayuda de los mecheros.
Identificar las colonias formadas en los agares sangres.
Identificar la morfología de las colonias de los agares
MacConkey.
Identificar la forma, elevación, margen y color de las
colonias de las cepas patógenas del agar Manitol Salado.
Identificar la morfología de las colonias por su tamaño,
textura y color.

*Figura 4: Agar Sangre

Cepa ATCC 27853, visto a contraluz se ve el hemólisis β,
las colonias presentan color blanco, elevado y margen liso
en algunas partes del medio se ven colonias puntiformes
y/o fusiformes.

*Figura 2: Agar EMB

Se abre el primer tubo de ensaye dentro del área aséptica,
se esteriliza el asa bacteriológica y se toma una alícuota de
la caja petri del equipo 7 (carne de res con pO 2), que
contiene agar EMB con crecimiento de E.coli y se estría
por picadura.

*Figura 5: Agar Sangre

Cepa ATCC BAA 977, presenta una hemólisis β, colonias
blancas, puntiformes y planas.

*Figura 3: Medio agar sangre con colonias de E.coli

Para el segundo tubo de ensaye se vuelve a pasar el asa
bacteriológica por el mechero para esterilizarla, se toma
una vez mas una alicuota de E. coli en el agar EMB *Figura 6: Agar sangre (atrás) y Agar MacConkey (al frente)
Cepa ATCC 29371, Sin hemólisis, hongo filamentoso,
color gris oscuro, de margen igualmente filamentoso, con
partes en el medio puntiformes color gris/blanco. (agar
sangre)
Cepa ATCC 29395, puntiforme, elevada de color naranja
con tonos rosados

*Figura 9: Agar CPESE

Cepa ATCC 29390, colonias en la mitad del medio de
color azul metalico, puntiforme de borde liso.
Cepa ATCC 29391, colonia en la otra mitad del medio de
color morado metalico, puntiforme de borde liso.

*Figura 7: Agar MacConkey

Cepa ATCC 29390, puntiforme de color marrón
Cepa ATCC 29391, colonias rosadas cremosas, elevadas,
granular y margen ondulado.

*Figura 10: Agar sangre

Cepa ATCC, cuadrante 1 puntiforme, color blanco
cremoso elevado. Cuadrante 2 Color marrón elevado y
puntiforme. Cuadrante 3 blanco cremoso, granular.
Cuadrante 4 puntiforme cremoso de color blanco.
Cuadrante 5 no se evidencia dentro del medio. Cuadrante 6
puntiforme color blanco cremoso. Cuadrante 7 color
blanco cremoso y puntiforme. Cuadrante 8 no se evidencia
dentro del medio.

*Figura 8: Agar Manitol Salado

Cepa ATCC 29396, puntiforme, color blanco cremoso, con
borde liso.

*Figura 11: Agar EMB con siembra por picadura (derecha)
y estriado (izquierda) de E.coli
Análisis de resultados
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 crece con una
coloración gris-plata en la superficie del crecimiento
bacteriano.
Staphylococcus aureus ATCC BAA 977 Colonias grandes,
de color entre blanco y gris o entre crema y amarillo, con o
sin hemólisis.
Stanieria cyanosphaera ATCC 29371 no se encontró una
morfología definida de este microorganismo.
Streptomyces avermitilis ATCC 29395 Los micelios del
sustrato son color marrón luminoso. Los micelios aéreos
blancos. La masa de esporas es abundante y de color gris
verdoso luminoso. Se produce pigmento melanoide. Las
colonias son opacas, elevadas y tienen bordes enteros, de
consistencia elástica con una textura superficial acolchada.
Schistosoma mansoni ATCC 29390 Al igual que el resto
de los trematodos, tiene un cuerpo aplanado, no
segmentado, revestido por una estructura incicial llamada
tegumento, el cual es metabólicamente activo en la
absorción de nutrientes. Tienen un aparato digestivo
incompleto, sin ano.
Gemella morbillorum ATCC 29391 Micrografía
electrónica de barrido de color (SEM) de Gemella
morbillorum, Gram-positiva, procariota de coco (división)
que es parte de la microflora de la cavidad oral. Prefiere
entornos capnofílicos o microaerofílicos. Es importante en
la fermentación de lactato y acetato. Con poca frecuencia
puede causar infecciones endovasculares y endocarditis.
Aumento: x 4.125 cuando el eje más corto está impreso a
25 milímetros.
Pleurocapsa ATCC 29396 crecimiento asimétrico de
baeocitos, agregados celulares con apéndices filamentosos.
En el primer tubo de ensaye por picadura hubo presencia
de microorganismos desarrollado, a causa de mala técnica
de inoculación.
Mientras que en el segundo tubo de ensaye realizado por
estriado se noto una presencia de microorganismos
puntiformes, de color blanco opaco, de borde liso,
elevación convexa. con un cambio de coloración en el
medio utilizado, de color rosa a color amarillo- rojo en la
parte superior del tubo de ensaye.
Lo cual indica una presencia del crecimiento de alguno de
los dos microorganismos nombrados a continuación:
Salmonella Colonias grandes, desde incoloras hasta color
ámbar
Shigella Colonias grandes, desde incoloras hasta color
ámbar
Conclusiones
Se logró hacer una identificación de las cepas patógenas
con ayuda de la morfología (tamaño, borde, elevación,
color) de cada una de las colonias crecidas en los agares
sangre, MacConkey, manitol salado, CPESE y EMB.
Las bacterias patógenas son aquellas que causan
enfermedades infecciosas. Aunque la gran mayoría de las
bacterias son inofensivas o benéficas, pocas bacterias son
patógenas. Las bacterias patógenas se oponen a las
bacterias llamadas saprofitas que están presentes en los
organismos vivos y que se alimentan de materia orgánica
muerta sin que el organismo desarrolle mecanismos de
defensa contra ellas.
Las bacterias patógenas penetran en el organismo y pueden
causar problemas más o menos severos desarrollándose en
detrimento de este organismo. Pueden ser eliminadas de
forma natural por las células inmunitarias que las
reconocen como extrañas.
En caso de respuesta insuficiente del organismo o de
resistencia de estas bacterias, el tratamiento con
antibióticos es necesario para combatir su proliferación.
Las personas con el sistema inmunitario debilitado son más
susceptibles a las bacterias patógenas.
Bibliografía
MICROBIOLOGÍA CLÍNICA MEDIOS DE CULTIVO
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-
de-cultivo.pdf
BD INSTRUCCIONES DE USO – MEDIO EN PLACAS
LISTO (AGAR SANGRE)
http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8760
BD INSTRUCCIONES DE USO – MEDIO EN PLACAS
LISTO (AGAR MacConkey)

http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8760

BD INSTRUCCIONES DE USO – MEDIO EN PLACAS

LISTO (AGAR MANITOL SALADO)

http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8760

MICROBIOLOGÍA Urocultivo

https://pipetealo.wordpress.com/2017/03/11/urocultivo/

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biomerieux

http://www.biomerieux-culturemedia.com/product/23-
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microbitos blog

http://microbitosblog.com/2015/04/28/pseudomonas-
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cultivo-enfermedades-y-mas/

ScienciePhotoLibrary

http://www.sciencephoto.com/media/799445/view/gemella
-morbillorum-coccus-prokaryote-sem

MICROBEWIKI

https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Pleurocapsa