Documento hecho por:

Patricia Lagos - Tutora bioquímica de Obstetricia.

Interna de Enfermería.
Tutor Integral Par - Universidad de Chile.

Trabajo práctico 1: Determinación de la Glucosa.

Indicadores de desempeño: Aplicar contenidos teóricos de la regulación de la glicemia a la

determinación de sus niveles de manera práctica.

Tips para la realización del trabajo práctico

1. La muestra a utilizar en el trabajo práctico para determinación de la glicemia

(concentración de glucosa plasmática) se realiza en una muestra de suero o de
plasma, es decir, una porción del agua presente en la sangre sin los factores de
coagulación.
2. Requiere ayuno (idealmente 10 horas).
3. Posee valor clínico en el diagnóstico de enfermedades como la diabetes mellitus, la
diabetes gestacional y el síndrome metabólico.
4. Es importante que la muestra se procese previo a una hora de ser tomada ya que de
otra manera se consume y sus valores son subestimados
5. Se realiza por glucosa oxidasa donde también se analiza muestras que sean
comparables y validen la calidad del laboratorio.

Nota: Los valores de referencia de glucosa plasmática normal en ayuno fluctúan entre los 70
y 99 mg/dL.

Explicación del método: En la guía de trabajo práctico se encuentra la ecuación donde la

glucosa gracias a la Glucosa Oxidasa (GOD) se transforma en un compuesto que a su vez,
gracias a la peroxidasa se transforma en quinonimina roja. Este último compuesto, posee
una coloración rojiza o rosada característica, la cual será cuantificada en el espectofotómetro.
Nota: Video de explicación del funcionamiento del espectofotómetro

https://www.youtube.com/watch?v=fXjP10sdmQU

A. Determinación de la Glicemia

Notas:

1. Los tubos se nombran y enumeran de la siguiente forma:

a. Tubo 1: Blanco, es aquel tuvo que contiene sólo el agua y permite restar su
interferencia.
b. Tubo 2: Estándar, muestra con una concentración conocida que sirve de
referencia.
c. Tubo 3: Control, muestra real mezclada.
d. Tubo 4: Muestra a analizar.
2. En todos los tubos se debe depositar reactivo.
3. Se realiza en duplicado para poder evaluar en caso que haya existido alguna diferencia
entre los resultados de ambas muestras, permite un análisis crítico más detallado.
4. Procure depositar los 10 micro litros (primero el volumen pequeño y luego el volumen
mayor) y los 1000 micro litros según lo descrito en el protocolo. En caso que el tubo
tenga tres guiones (---) no lleva ese reactivo.
5. La temperatura es fundamental para permitir las condiciones en las que se debe dar
la reacción.
6. El tiempo debe ser como mínimo 5 minutos para que se produzca la reacción pero no
mayor a 20 por subestimación del resultado.
7. Los resultados se calculan con la siguiente ecuación que se resuelve con regla de tres
simple:
𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 ( )
𝑑𝐿 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
𝑚𝑔 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 ( )
𝑑𝐿

Nota: Recuerde que la absorbancia no posee unidad de medida

𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 ( )=
𝑑𝐿

𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 ( ) 𝑥 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑑𝐿 𝑥
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟

8. A los resultados obtenidos se debe restar el tubo 1, ya que este contiene el blanco y
por lo tanto de esta manera se resta la interferencia que posee el agua.
 B. Hemoglobina glicosilada.

Tips para la realización:

1. El control del paciente diabético evita las complicaciones como la retinopatía,

neuropatía y nefropatía.
2. La glucosa se une a la hemoglobina del eritrocito formando un complejo
irreversible llamado Ac1. La vida media de un eritrocito es 120 días, por lo tanto
el porcentaje de HbAc1 da cuenta del tiempo al que el eritrocito estuvo expuesto a
eventos de hiperglucemia
3. Se realiza con un dispositivo denominado A1cNow+ (Bayer) que se basa en una
técnica inmunológica más una técnica química, lo que permite conocer el porcentaje
de HbAc1 de la muestra.

C. Determinación de la glicemia mediante la utilización de un glucómetro

(demostrativo).

Un glucómetro es un dispositivo electrónico diseñado para analizar los niveles de glucosa

en sangre capilar a través de la tecnología llamada química seca. Se obtiene una muestra de
sangre que se recolecta en una tira reactiva y luego se analiza el resultado en un dispositivo
que al instante mostrará los valores de glucosa sanguínea. El mecanismo de determinación
más utilizado es a través de la reacción de la enzima glucosa oxidasa que está en las tiras
reactivas provocando la oxidación de la glucosa y generando un cambio de color que es
cuantificado por el dispositivo, la intensidad del color es directamente proporcional a la
concentración final de glucosa sanguínea.
Para la utilización diagnóstica de esta medición, es necesario realizarla en ayuno, sin
embargo, la medición de la glucosa postprandial (después de comer) también tiene
aplicaciones clínicas, pues le suma sensibilidad a la detección.