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Crescimento microbiano
Biologia IV
Profa. Ilana Camargo
Crescimento microbiano
Pedúnculo
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11/10/2016
Fissão Binária
Crescimento populacional
O aumento do número de células também pode ser medido pelo aumento da
massa microbiana
Tempo de geração: tempo necessário para que uma população dobre de número
(Tempo de duplicação);
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Crescimento populacional
Tempo de geração
•Tempo de Geração: intervalo de tempo em que uma célula origina duas novas células ou
tempo necessário para uma população dobrar de número.
Muitas das bactérias estudadas apresentam tg de 1 a 3 h (pode variar de 10 min a >24h).
• Tg de E. coli = 20 min
• 20 gerações (~7 horas), 1 célula torna-se em > 1 milhão de células!
•Tg pode ser influenciado pelas condições de cultivo (tipo de meio, temperatura, etc.).
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Fases do crescimento
LAG
• Pouca ou ausência de divisão celular.
• Síntese enzimática e de moléculas variadas.
• Pode ser curta ou longa, dependendo das
condições fisiológicas do inóculo.
• Aumento na quantidade de proteínas, no peso
seco e no tamanho celular
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Fases do crescimento
EXPONENCIAL OU Log
• Crescimento exponencial das células – Tempo de Geração
constante – linha reta no gráfico.
• Fase que as células estão mais “saudáveis” – utilizadas
para estudos enzimáticos e de outros componentes
celulares.
• Taxa de crescimento exponencial (número de gerações
por unidade de tempo) de uma população pode ser
influenciada pelas condições de cultivo, por exemplo.
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Fases do crescimento
ESTACIONÁRIA
• Não há crescimento líquido da população, ou seja, o número de células que
se divide é equivalente ao número de células que morrem (crescimento
críptico).
• Síntese de vários metabólitos secundários (antibióticos e algumas enzimas).
Também pode ocorrer a esporulação das bactérias.
• Alterações de fenótipo por quorum sensing (processo de comunicação
celular mediado pela densidade populacional).
• Causas: esgotamento de nutrientes essenciais, acúmulo de produtos de
excreção em concentrações inibitórias, alterações no pH.
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Fases do crescimento
MORTE OU DECLÍNIO
• Número de células mortas excede o de células vivas.
• Na maioria dos casos, a taxa de morte é inferior à taxa de
crescimento exponencial.
• A contagem total permanece relativamente constante,
enquanto a de viáveis cai lentamente. Em alguns casos há
a lise celular.
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Temperatura
• Temperatura de crescimento pode ser mínima, ótima e máxima. Maioria cresce em um intervalo de
30oC entre mínima e máxima.
• Psicrófilos: profundezas de oceanos e regiões polares (algas clorofíceas e diatomáceas).
• Mesófilos: Temperatura ótima entre 25 e 40oC. Maioria das bactérias.
• Termófilos Temperatura entre 45 e 80oC. Fontes termais, camadas superiores de solos que sofrem
intensa radiação solar, esterco e silo em fermentação.
• Hipertermófilos: Temperatura ótima superior à 80oC. Fontes termais, como as do Parque
Yellowstone. Principalmente membros de Archaea.
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pH
pH ótimo de crescimento refere-se ao pH do meio externo; o pH intracelular deve
permanecer próximo à neutralidade.
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Pressão osmótica
Os microrganismos que tem necessidades específicas de NaCl para seu
crescimento ótimo podem ser :
• halófilos discretos: [ ] baixas – 1 a 6%
• halófilos moderados: [ ] moderadas – 6 a 15%
• halófilos extremos: [ ] altas – 15 a 30%
Pressão osmótica
plasmólise
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Aeróbios Microaerófilos
Aeróbios facultativos
Obrigatórios
Anaeróbios
Aerotolerantes
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- Microaerófilos
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- Aeróbios facultativos
Podem utilizar o O2 quando disponível, mas na sua ausência, são capazes de continuar
seu crescimento através da respiração anaeróbia ou da fermentação.
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Obrigatórios Aerotolerantes
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- Anaeróbios aerotolerantes
Toleram a presença do oxigênio, mas não podem utilizá-lo para seu crescimento.
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Oxigênio
Relações dos microrganismos com o oxigênio
Tipo de
Grupo Relação com o O2 Exemplo Habitat típico
metabolismo
Aeróbios
Não exigido,
Resp.
mas com
aeróbia, Intestino grosso de
Facultativos melhor Escherichia coli
anaeróbia, humanos
crescimento
fermentação
em O2
Exigido, mas
em níveis
Microaerofilos Resp. aeróbia Spirillum volutans Água de lagos
inferiores ao
atmosférico
Anaeróbios
Não exigido,
sem melhor Streptococcus Trato respiratório
Aerotolerantes Fermentação
crescimento na pyogenes superior
presença de O2
Lodo de digestores
Fermentação
Methanobacterium de esgoto,
Obrigatórios Nocivo ou letal ou resp.
formicicum sedimentos de lagos
anaeróbia
anóxicos
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Adaptado de Madigan et al., 2004.
Oxigênio
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Controle do
crescimento microbiano
Termos importantes
Controle antimicrobiano por agentes físicos
Controle antimicrobiano por agentes químicos
Agentes antimicrobianos utilizados in vivo
Resistência a antimicrobianos
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Termos importantes
• Esterilização: destruição de todas as formas de vida microbiana
(incluindo os endósporos e vírus).
*atenção para este termo no livro do Tortora, 8ª. edição português , que em
alguns trechos está definido erroneamente como “destruição dos patógenos de
vegetais”.
Termos importantes
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Termos importantes
Efeito bactericida
Efeito bacteriolítico
Tempo
(Tortora, Funke e Case)
• O número de microrganismos:
quanto maior o número, mais tempo
se leva para eliminar toda a
população.
• Características microbianas: se a
bactéria é Gram-positivo ou -
negativo, micobactérias, vírus, cistos
de protozoários.
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Físicos
Agentes
Químicos
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Pontes dissulfeto
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Úmido Desnaturação
de enzimas
Calor
Seco
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Autoclave
Autoclave
Autoclave
(Tortora, Funke e Case)
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Autoclave
Controle de qualidade do
processo
Indicadores de temperatura
Controle de esterilização:
Temperatura - OK
Tempo - ???
Indicadores biológicos
Controle de esterilização:
Temperatura - OK
Tempo - OK
Filtração
Poros de 0,22 µm
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ionizante
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Radiação não-ionizante: UV
Luz Ultra-violeta danifica o DNA das células
expostas produzindo ligações entre timinas
adjacentes na cadeia de DNA
Desvantagem
Luz não muito penetrante
microrganismos devem estar expostos, se
estiverem protegidos por uma superfície não
serão atingidos
Câmara de Biossegurança
-Ligue o fluxo laminar (filtração do ar)
-Limpe a superfície interna com álcool 70%
-Ligue a luz UV por 15 minutos antes de usar
Filtros HEPA
Luz Ultra-violeta
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Tecidos vivos
Objetos inanimados
http://www.answersingenesis.org/assets/images/articles/aid/v4/antiseptic-surgery.jpg
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Clorexidina
CB-30 T.A. tem como principal composto o cloreto de alquil dimetil benzil
amônio, que é um agente catiônico de atividade em superfície, com poderosa
ação germicida. Usado corretamente nas diluições recomendadas é altamente
eficaz contra bactérias, fungos e esporos.
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Mata as bactérias e
fungos, mas não tem
ação em endósporo e
vírus não-envelopados
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Ação de íons do metal pesado se combinam com grupos sulfidrila nas proteínas
celulares desnaturação
http://www.sjtresidencia.com.br/invivo/?p=5913
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membrane cracks,
leakage of cytoplasmic contents, membrane
potential disruption, and eventually the
disintegration of the membrane
(Pouny et al., 1992)
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Ácido para-aminobenzóico
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Drogas sintéticas
• Análogos de fatores de crescimento:
sulfas, isoniazida.
• Quinolonas: classe de drogas sintéticas que interage com a DNA girase bacteriana,
impedindo o superenovelamento do DNA bacteriano. Amplo espectro. Quinolona
protótipo é o ácido nalidíxico. Fluoroquinonas são utilizadas em avícolas, na prevenção
de doenças respiratórias.
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Tipos de resistência
aos antimicrobianos
Tipos de resistência
Resistência natural ou constitutiva ou intrínseca:
- Gene de resistência no cromossomo, característica da espécie bacteriana.
- Não apresenta o sítio-alvo ou é impermeável ao antibiótico.
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Tipos de resistência
• Adquirida
– Plasmídeos
– Transposons
– Genes cassetes
Trazem genes que expressam proteínas que irão alterar a estrutura do
sítio alvo, ou com menos afinidade pela droga
•Alteração genética
- Mutação em genes que irão resultar em proteína alterada com
baixa afinidade pela droga
Mecanismos de resistência
Conjugação
Transformação
Transdução
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Bactérias resistentes
são selecionadas no
organismo ou
ambiente!!!
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Bibliografia
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