Universidad de La Sabana
Facultad de Ingeniería
Chía-Cundinamarca, 12 de febrero de 2019
Observación de células al microscopio
Paula Andrea Zamora Castro 0000087290
Jhonier Stiven Gomez Guerrero 0000144812
1. INTRODUCCION
La caracterización de las células que se
encuentran dispersas por nuestro planeta han
sido un estudio biológico que lleva décadas
operando en las grandes ramas científicas de
todo el mundo. Esta caracterización requiere de
un estudio preciso de los componentes mas
básicos de todos los tejidos vivos, las células.
Este estudio ha requerido el uso de
instrumentos que permitan aumentar a gran
escala la imagen de estas estructuras. El primer
instrumento usado para tal tarea fue el
microscopio. Este instrumento ha permitido la
visualización de objetos que no son visibles al
ojo humano. Esto se logra mediante un
complejo óptico basado en lentes, que
constituyen y amplían la imagen del objeto que
se desea observar [1].
Aunque a través del tiempo este instrumento ha
sufrido grandes cambios en avances
tecnológicos, su objetivo principal siempre ha
sido el mismo, pero es gracias a estos avances
la biología molecular ha podido avanzar a lo
largo de la historia y se han podido estudiar,
analizar y caracterizar millones de
microorganismos que hoy en día conocemos.
La identificación de microorganismos se basa
en el conjunto de procedimientos cuya técnica
es específica para ciertos microrganismos, su
función se basa en identificación de nuevos
organismos o clasificación de los ya existentes.
Laboratorio de Biotecnología
Existen varios métodos para identificación, por
ejemplo: La identificación de bacterias najo
criterios morfológicos, tinción diferencial,
pruebas químicas y serológicas [2].
Los métodos descritos en el presente informe se
basan en métodos colorimétricos comúnmente
conocidos como tinciones. Existen varios tipos
de tinciones dependientes del tipo de organismo
que se quiera estudiar y las características que
se deseen obtener de éste:
El primero de ellos se denomina tinción de
Gram, llamado así en honor al bacteriólogo
Christian Gram. Este método permite
diferenciar entre algunos tipos de
microorganismos y, además, clasificar
bacterias en base a su morfología celular. Se
basa en la reacción de Gram, en donde un
complejo químico (cristal violeta), penetra las
células bacterianas a través de la membrana
celular y junto con Lugol (otro colorante
orgánico), generan un complejo de color
morado sobre la membrana bacteriana. Sin
embargo, cuando una solución de alcohol-
acetona es agregada sobre el complejo
coloreado, solo algunas bacterias pierden el
color morado obtenido por la tinción y otros lo
mantienen. Esta diferencia es la que permite
caracterizar dos tipos de bacterias: Las bacterias
que retienen el color morado son llamadas
bacterias grampositivas, mientras que las que
son decoloradas reciben el nombre de bacterias
gramnegativas. La pérdida o no del colorante de
la membrana bacteriana está relacionada con la Tinción de Gram
estructura celular de la membrana celular de
cada bacteria [3], esta diferencia es explicada a
mayor profundidad a lo largo del escrito.

Otras metodologías son implementadas para la

coloración de las células de los tejidos con el fin
de se facilite su observación bajo el
microscopio. Más no son usadas para
determinar estructuras morfológicas de las
células estudiadas, muchas de estas se basan en
el uso de colorantes como el azul de metileno,
Lugol o azul de lactofenol sobre células
eucariotas [4], las cuales colorean algún
compuesto bioquímico de la célula y permiten
su visualización bajo el microscopio.

Se utilizará un microscopio compuesto o

lumínico, en el que la luz atraviesa la muestra
con el material a observar y, a través de un
juego de lentes, llega al ojo del observador una
imagen aumentada debido al lente focal y el
lente ocular.

El presente escrito tiene como objetivo la Visualización de hongos filamentosos y no

observación, diferenciación y caracterización filamentosos
de las células de E. Coli, Rhodotorula
Mucilaginosa, Rhizopus, S. Tuberosum y de la
mucosa bucal humana por medio de métodos
colorimétricos y su visualización en el
microscopio.

2. METODOLOGÍA

Preparación de materiales e inmovilización

de los microorganismos
Visualización de células de la papa
Todos los materiales a estudiar se colocan en
una lámina de vidrio llamada portaobjetos. Este
material se cubre con una laminilla llamada
cubreobjetos. Para inmovilizar los
microorganismos disponga de una fuente de
ignición y movilice suavemente el portaobjetos Visualización de células epiteliales de la
con la muestra sobre la llama por mucosa bucal
aproximadamente 1 minuto.
 3. RESULTADOS

Escherichia Coli
La Escherichia coli (e. coli) es un grupo de
bacterias que se encuentran en el medio
ambiente habitualmente en el intestino del ser
humano y algunos animales de sangre caliente.
Esta bacteria fue descrita por primera vez en
1885 por el bacteriólogo alemán Theodore von
Escherich, la cual la denominó Bacterium Coli
[5]. La figura muestra posibles regiones de
concentración celular que son las manchas de
Figura No 1. Observación al microscopio de la color azul oscuro, estas manchas de azul oscuro
bacteria Escherichia Coli. parecen estar envueltas por una burbuja de
color más claro. Hay regiones en donde también
se observan unas estructuras circulares
pequeñas, compactas y semejantes que se
diferencian del medio por que el borde de la
segmentación es de color azul oscuro, sin
embargo, no tienen alguna otra coloración.
Rhizopus
Figura No 3. Visualización al microscopio del
hongo Rhizopus.
El resultado de la observación en el
microscopio para este organismo se muestra en
la Figura No 1.
Las células parecen tener una microestructura
organizada, en algunas regiones es posible
observar que tienen una forma un poco alargada
en forma de cilindros pequeños cuando no se
encuentran aglomerados, además se denota un
tono rosa claro sobre el borde de algunas de
estas células.
En la Figura No 1 se observa el color azul
debido a la inversión de colores en el La matriz celular de este tejido se encontraba en
microscopio que fue tomada la foto, en el un medio abundante de esporas, este medio era
momento de la observación se presenció una de color gris, mientras que el hongo (depositado
tonalidad roja-rosada. sobre el fondo del cultivo) era de color negro
oscuro, no se apreciaba generación de capas y
el medio era inodoro.
Rhodotorula Mucilaginosa En la imagen se aprecia una parte coloreada de
Figura No 2. Observación al microscopio de la azul más oscura en forma de cabeza del cual se
levadura Rhodotorula desprende una especie de “tallo” con algunas
ramificaciones tanto en el cuerpo como en la
punta de éste, además se aprecian estas mismas
ramificaciones en la cabeza de la célula con
algunas figuras circulares pequeñas alrededor
de ella. El conjunto celular y el medio en donde
se encuentra son diferenciables donde ambos
presentas un color azulado claro siendo el color
de la célula un poco más oscura.
S. Tuberosum
Figura No 4. Visualización al microscopio de
las células de la papa.
Primero, el tejido analizado era de color blanco,
se tenía una capa fina del tejido de la papa que
carecía que algún tipo de agujeros, colores
diferentes al descrito y carecía de algún olor
característico.
La imagen del microscopio permite observar
células de forma ovalada, todas aparentemente
tienen la misma forma, el mismo tamaño y no
se encuentran lo suficientemente juntas unas de
otras. Todos los óvalos observados son de color
azul oscuro bajo el microscopio
La imagen permite observar dos puntos clave
sobre la superficie de la célula: Primero, una
circunferencia azul oscura y segundo, una
especie de membrana o capa que se colorea de
un tono más claro alrededor de la célula. El
tinte usado permite diferenciar las células tanto
del medio en donde se encuentran como de las
demás células, pero no se pueden observar
algún organelo en concreto dentro de éstas.
Células epiteliales de la mucosa bucal
Figura No 5. Visualización al microscopio de
las células epiteliales de la mucosa bucal.
En la imagen se pueden observar tres puntos
sobre la célula: Un óvalo azul oscuro, una
especie de membrana que se colorea de un tono
más oscuro alrededor de la célula y otro óvalo,
pero de color azul más claro cerca a la
membrana mencionada.
El tinte permite diferenciar la célula del medio
en donde se encuentra, pero no se pueden
observar algunos organelos importantes de la
célula.
4. DISCUSION DE RESULTADOS
Escherichia Coli
Para poder identificar las colonias de esta
bacteria se deben tener en cuenta las siguientes
características:
Según la Imagen No 1. La bacteria se clasifica
como una bacteria gramnegativa: Esto quiere
decir que, al aplicar la metodología de tinción
de Gram, el color al final de la secuencia de
coloraciones debería ser un rosado. Las
bacterias gramnegativas son caracterizadas por
la presencia de un espacio periplásmico, el cual
es un de una delgada capa de peptidoglucano
entre la membrana citoplásmica y la membrana
exterior. Esto es porque durante la tinción, la
membrana exterior de las bacterias
gramnegativas deteriora el alcohol adicional a
la muestra y la capa delgada de peptidoglucano
no puede conservar la mancha de óxido del
cristal violeta, por esta razón su color debe ser
de tonalidad rosa suave [6].
Por otra parte, tienen forma de bastón, forma
que concuerda con la de la bacteria descrita, son
bacilos rectos generalmente flagelados
periticos y por tanto móviles. Pueden crecer en
condiciones tanto aeróbicas como anaeróbicas
y no producen enterotoxinas y tienen un rango
de crecimiento se sitúa entre 4 y 46ºC [7]. Esto
permite afirmar que el cultivo se encontraba en
condiciones favorables dentro del laboratorio
para su análisis.
Aunque no es posible diferenciar los organelos
más importantes de esta bacteria, esta bacteria
procariota está compuesta por: Membrana
plasmática, pared celular, citoplasma,
nucleoide y ribosomas. La observación en el
microscopio se dificulta debido a la falta de
contraste ya que en la Figura No 1 se evidencia
la presencia de una pared celular rígida
característica de una célula procariota, ya que
su función es mantener la forma de la célula y
proteger su interior. Por debajo de la pared
celular se encuentra la membrana plasmática la
cual contiene los organelos, los puntos más
oscuros de la Figura No. 1 podrían representar
el cromosoma circular de la mayoría de los
procariontes, ubicado en el nucleoide ya que
carecen de un núcleo delimitado por la
membrana [8].
Rhodotorula Mucilaginosa
Luego de la observación en el microscopio
(Figura No 2.) se debe tener en cuenta que las
colonias de Rhodotorula Mucilaginosa se
caracterizan por presentar colonias mucoides
con un aspecto cremoso en diferentes
tonalidades como salmón y rosa [9], que son
exactamente las mismas tonalidades del cultivo
observado antes de analizarlo al microscopio.
En la Figura No 2 se observa la forma de esta
levadura, blastoconidos ovales y elongados; Al
ser organismos eucariotas, la mayoría de los
organelos que la componen son comunes a
otros organismos eucariotas: protistas, plantas y
animales [10]. También se puede denotar la
pared celular de estas células como el borde
coloreado azul oscuro dentro de la Figura No 2,
esta pared está compuesta por una combinación
de glucanos y quitina, en su interior los demás
organelos, como el núcleo, el retículo
endoplasmático, el aparato de Golgi, las
mitocondrias, ribosomas y vacuolas [10]. Se
puede observar que en la imagen no se
visualizan los organelos más importantes, se
puede inferir que los puntos de tonalidad más
alta posiblemente son los núcleos de cada célula
rodeados del citoplasma el fluido acuoso que
constituye la mayor parte del volumen celular y
el cual no tiene color, así que toma la tonalidad
del azul de metileno.
Rhizopus
Para lo observado en la Figura No 3 se pueden
apreciar varias estructuras morfológicas
características de un espécimen Rhizopus.
Primero, la parte azulada oscura a la que se
hacía referencia como “cabeza” puede hacer
referencia al esporangio, órgano celular
encargado del almacenamiento y producción de
esporas del hongo. Este esporangio cambia en
tamaño dependiendo del tipo de hongo y del
medio en donde éste se encuentre [11]. Además,
es posible afirmar que esta parte de la célula
corresponde al esporangio pues a su alrededor
se pueden denotar las esporas que se
encontraban en la matriz celular del tejido.
Además, la ramificación central que desprende
del esporangio puede hacer alusión a una parte
de la célula llamada esporangióforo, este
organelo cumple la función de soporte del
esporangio y de servir como medio de
crecimiento y aglomeración de las hifas de la
célula [11].
Así también, se observan dos tipos de hifas en
la estructura celular del hongo: Una hifa
estolón, que es un centro de unión entre el
esporangióforo y las ramificaciones que se
observan en la Figura No 3, su nombre hace
referencia a su función, que es de unir las
ramificaciones, llamadas hifas rizoides, con el
esporangióforo [11]. Del mismo modo, las
ramificaciones que se observan son los rizoides
del hongo, los cuales permiten la fijación del
hongo a una superficie y luego funcionan como
receptor de los nutrientes esenciales que el
hongo necesite para poder desarrollarse de
manera satisfactoria [11].
Por último, es posible corroborar la presencia
de la pared celular en el hongo gracias a la
tinción usada en la metodología. La pared
celular de los hongos está compuesta
principalmente por quitina [12], un carbohidrato
que genera un complejo azulado con el azul de
lactofenol usado en la metodología mostrada,
esta coloración puede verse en la Figura No 3.
S. Tuberosum
Para entender la clasificación estructural de la
célula se mostrará un fragmento de la
taxonomía de ésta:
Tabla No 1. Taxonomía de la célula de la papa
[13].
TAXONOMIA
Reino: Plantae
Género: Solamum
Especie: Solanum tuberosum
Primero, el reino de la célula afirma que se trata
de un organismo eucariota de carácter vegetal;
esto quiere decir que la estructura celular tiende
a ser rígida por la presencia de una pared celular
que recubre todo el interior de la célula. Esta
pared celular vegetal tiende a estar compuesta
esencialmente por celulosa y pectina [14], sin
embargo, la tinción de la celulosa con el
complejo de yodo formado por el Lugol tiende
a mostrarse de color marrón-rojizo dentro de la
matriz celular [15], color que no se observó en
ningún momento de la metodología. La
carencia de este color no quiere decir que la
célula no es de carácter vegetal, pues este color
puede opacarse por otros factores como la
presencia de almidón dentro de la misma célula,
el almidón es un compuesto que presenta una
gran afinidad por el Lugol, es por esto que, si la
célula contiene almidón dentro de su estructura,
el complejo tenderá a formarse
mayoritariamente sobre el almidón dejando el
resto de compuestos bioquímicos libres de tinte
[16]. La coloración del complejo formado
depende de que parte del yodo del Lugol es
unido al almidón; si el yodo es acomplejado con
las cadenas de amilosa se obtendrá una
coloración azulada, tal cual como se observa en
la Figura No 4. Si el yodo es acomplejado con
las ramificaciones de amilopectina la solución
tendrá una coloración rojiza, en caso de que el
yodo pueda acomplejarse con ambas partes del
almidón la solución se teñirá de morado. Para
que la solución se tiña de morado, ambos
componentes deben estar separados puesto que,
si se encuentran unidos, el yodo solo podrá
acomplejarse con la amilosa por la organización
estructural de las cadenas de este biopolímero.
Esta separación puede lograrse calentando un
poco la muestra de tejido, pero al no haberse
sometido a dicha metodología, el almidón de la
muestra debía contener la amilosa recubriendo
la amilopectina, mostrando únicamente un
color azulado tal cual como se muestra en la
Figura No 4 confirmando la presencia de
almidón dentro de la matriz celular de la papa.
Además, el género y la especie de la célula hace
referencia al tipo de tejido en específico, este
grupo habla más de la forma de la célula
estudiada: se reportan formas ovaladas,
compactas y definidas [13]. Para el tejido del
laboratorio se puede hablar de que comparten
estas características, comparten la misma forma
y son definidas, sin embargo, estas no son
compactas pues no se encuentran contenidas en
algún tipo de red celular, por el contrario, se
encuentran alejadas unas de otras. Esta red
podría verse con el aislamiento de una capa del
tejido más delgada para ser observada en el
microscopio.
Células epiteliales de la mucosa bucal
Primero, la circunferencia negra ubicada dentro
de la célula puede hacer referencia al núcleo de
la misma, pues éste tiende a ser diferenciado del
resto de los organelos como un punto negro
dentro de la imagen del microscopio. Aunque
no es posible verlo, todo el interior de la célula,
también coloreado de color azul hace parte del
citoplasma, así este no sea distinguible dentro
de la imagen, pues este desde su definición es
el medio en donde se encuentran todos los
organelos de la célula.
Además, la capa externa más oscura puede
hacer referencia a la membrana celular de la
misma, reteniendo todo el citoplasma de la
célula E inmovilizando todo el material
genético de ella.
No se puede asegurar alguna geometría
específica de la célula; tiene una forma irregular
y no se sabe si la célula es plana o no. La forma
irregular de la célula también depende del lugar
en donde se encuentre la célula, es posible
encontrar células epiteliales bucales de formas
y tamaños diferentes si estas son recolectadas
de órganos diferentes, como es obtenerla de las
mejillas o labios y compararla con la obtenida
directamente de la saliva de la lengua.
No es posible diferenciar otro organelo
importante de la eucariota pues la metodología
usada no permite la caracterización de otras
partes importantes de la célula. Sin embargo, al
lograr diferenciar el núcleo y la membrana
celular podemos encaminar la diferenciación de
células y llegar a caracterizar los organelos
presentes.
Usando un microscopio, se observa que están
empaquetadas estrechamente unas al lado de las
otras. Esto ayuda a formar una barrera
protectora para el cuerpo. También existen
conexiones especiales llamadas uniones gap
que funcionan como puertas, que permiten el
intercambio de nutrientes [17].
En la Figura No 5. se observan las células del
epitelio bucal las cuales son células eucariotas,
en las células animales no existe pared celular
ni cloroplastos, esto evidencia que la
morfología de la célula animal sea más irregular
que una vegetal [18]. Además, otros organelos
que pueden presentar en la imagen son vacuolas
las cuales podrían ser el otro organelo de color
azul claro cerca a la membrana, pero se ve
escaso y pequeñas.
5. CONCLUSIONES
• La reacción de Gram es una excelente
metodología para la caracterizar la
morfología bacteriana permitiendo
clasificar a la E. Coli como una bacteria
gram negativa con forma de bacilo.
• Se determinó gran parte de la estructura
celular de las células tanto del hongo
filamentoso Rhizpus como del no
filamentoso Rhodotorula diferenciando
la mayoría de organelos.
• Fue posible encontrar y contrastar
algunos complejos bioquímicos
presentes en la célula de la papa como
el almidón y la celulosa.
• La caracterización de los organelos
celulares fue incompleta en los
organismos eucariotas debido a los
sistemas de tinción y complejidad de las
matrices celulares encontradas.
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