OBJETIVOS.

 Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema

mediante la prueba de molish.

 Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su

comportamiento frente al reactivo de Benedict.

 Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos

específicos.
 FUNDAMENTO TEORICO.
La Prueba De Molish: Todos los glúcidos por acción del ácido sulfúrico
concentrado se deshidratan formando compuestos furfúricos (las pentosas dan
furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos furfural es reaccionan
positivamente con el reactivo de Molish (solución alcohólica de alfa-naftol) dando
un producto coloreado.
Reactivo De Benedict: Una de las reacciones más comunes en la identificación
de carbohidratos es la reacción de Benedict. Esta reacción es específica para
azúcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los monosacáridos poseen un
grupo reductor libre. Los disacáridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores
libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de
sus componentes cuando ésta es formada.
Reactivo De Barfoed: Sirve para distinguir monosacáridos reductores de
disacáridos reductores, basándose en la velocidad de reacción; en los
monosacáridos la formación del óxido cuproso es más rápido que en los
disacáridos. La reacción consiste en utilizar acetato cúprico y ácido acético en
solución ácida con lo que los monosacáridos son capaces de reducir al cobre de
manera más rápida y en condiciones menos drásticas.
Prueba Bial: Esta reacción permita reconocer pentosas (glúcidos de 5 carbonos)
y sustancias que las contengan. Se basa en la formación de un compuesto
furfúrico que se condensa con el orcinol del reactivo.
Prueba Salliwanoff: Los glúcidos que se clasifican como cetosas tienen en el
carbono 2 una función cetona, en presencia de un ácido fuerte producen
rápidamente derivados furfúricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina.
La sacarosa (un disacárido formado por glucosa y fructosa) y la inulina (un
polisacárido de la fructosa) dan positiva la reacción, ya que el HCI del reactivo
provoca en caliente la hidrólisis del compuesto liberando fructosa (responsable de
la reacción positiva).
Prueba Sacarosa: La sacarosa no es un agente reductor, no forma osazonas
Esto es porque el enlace involucra el primer carbono de la glucosa y el segundo
carbono de la fructosa, y no queda grupos reductores disponibles. Cuando la
sacarosa es hidrolizada, los productos tienen una acción reductora.

Prueba Polisacárido: la prueba del yodo es una reacción química usada para
determinar la presencia o alteración de almidón u otros polisacáridos.
 MATERIALES Y REACTIVOS.

Estufa o calentador
Reactivo de Molish
Pipetas de 5 y de 10ml.
Ácido sulfúrico concentrado
Beakers de 100 y 400ml.
Reactivo de Benedict
10 tubos de ensayo.
Reactivo de Barfoed.
Pinza para tubos de ensayo
Reactivo de Bial.
Gradilla
Alcohol Amílico.
Gotero
Reactivo de Selliwanoff.
Papel tornasol
Ácido clorhídrico concentrado.
Soluciones de: glucosa, galactosa, ribosa, arabinosa,
Hidróxido de sodio 1M.
Sacarosa, lactosa, fructosa, almidón, leche (traer de la casa)
Solución de yodo.
Leche (traer)

PROCEDIMIENTO

Prueba de Molish: Agregue 5 gotas del reactivo de Molish a 1 ml de una muestra

que contenga carbohidratos (Leche). Añada cuidadosamente por las paredes del
tubo 1ml de Ácido sulfúrico concentrado, hasta que se formen dos capas. Observe
cualquier cambio de color en la interface de los dos líquidos.
Prueba de Benedict: Tome 3 tubos de ensayo; agregue al primero 0.5 ml de
solución de lactosa, al segundo 0.5 ml de solución de glucosa y al tercero 0.5 ml
de solución n de sacarosa. Adicione 0.5 ml del reactivo de Benedict a cada tubo y
colóquelos en un baso de agua hirviendo por 3 min. La formación de un
precipitado de color rojo ladrillo indica la presencia de azúcar reductor.

Prueba de Barfoed: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5 ml de

solución de galactosa, al segundo 0.5 ml de solución de ribosa y al tercero 0.5 ml
solución de almidón. Adicione 1 ml del reactivo de Barfoed a cada tubo, hierva por
2 min y deje reposar. La formación de un precipitado de color rojo ladrillo indica la
presencia de monosacáridos.
Prueba Bial: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5ml de solución de
ribosa, al segundo 0.5ml de solución de arabinosa y al tercero 0.5ml de solución
de almidón.
Adicione 0.5 ml del reactivo de Bial a cada tubo y caliente hasta que empiece a
hervir, dejar enfriar y luego agregue 1 ml de alcohol amílico y agite, la aparición de
una coloración azul verdosa es prueba positiva es prueba positiva para pentosas.

Prueba de Salliwanoff: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5ml de

solución de fructosa, al segundo 0.5ml de solución de arabinosa y al tercero 0.5ml
de solución de glucosa. Adicione 1ml del reactivo de Selliwanoff a cada tubo.
Caliente durante 1 min en un baso de agua hirviendo, la aparición de un color rojo
o rosado es prueba positiva para cetosas.
Prueba para sacarosa: A 2.5 ml de una solución de sacarosa agregue 3 gotas de
Ácido clorhídrico concentrado, caliente durante 5 minutos en un vaso de agua
hirviendo, enfrió y agregue Hidróxido de Sodio 1M hasta que la solución sea
neutra o ligeramente alcalina (prueba con papel tornasol), divida la solución
hidrolizada en dos porciones y realice por separado las pruebas de Benedict y
Selliwanoff.
1. Prueba para polisacáridos: Coloque 1ml de solución de almidón, añada 1
gotas de solución de yodo. Observe la producción de un color azul.
Caliente el tubo ¿Que observa? Deje enfriar y observe nuevamente, ¿Que
ocurre? Explique sus observaciones.

ANALISIS DE RESULTADOS.

 PRUEBA DE MOLISH: En esta prueba obtuvimos que: en el tubo de

ensayo se formaron dos capas en las cuales su parte superior era granulosa y
en la parte inferior de la capa se formó un concentrado grueso de color blanco.

 PRUEBA DE BENEDICT: En esta prueba obtuvimos los siguientes

resultados:

En el primer tubo el cual contenía lactosa, se pudo observar la formación de un

precipitado de color rojo, lo cual indica que hay presencia de azúcar reductor.

En el segundo tubo el cual contenía Glucosa, se pudo observar la formación de un

precipitado de color rojo, lo cual indica que hay presencia de azúcar reductor.

En el tercer tubo el cual contenía sacarosa, no se observó precipitado.

 PRUEBA DE BARFOED: En esta prueba obtuvimos los siguientes

resultados:

En el primer tubo el cual contenía galactosa se observó la formación de un

precipitado de color rojo ladrillo, lo cual indica la presencia de monosacáridos.
En el segundo tubo el cual contenía ribosa se observó la formación de un
precipitado de color rojo ladrillo, lo cual indica la presencia de monosacáridos.

En el tercer tubo el cual contenía almidón no se observó precipitado.

 PRUEBA DE BIAL: En esta prueba obtuvimos los siguientes resultados:

En el primer tubo el cual contenía ribosa se observó la aparición de una coloración

azul verdosa lo que indica que esta prueba es positiva para pentosas.
En el segundo tubo el cual contenía arabinosa se observó la aparición de una
coloración azul verdosa lo que indica que esta prueba es positiva para pentosas.

En el tercer tubo el cual contenía almidón no se observó pentosa.

 PRUEBA DE SELLIWANOFF: En esta prueba obtuvimos los

siguientes resultados:

En el primer tubo el cual contenía fructosa se observó la aparición de una

coloración rosada lo que indica que esta prueba es positiva para cetosas.

En el segundo tubo el cual contenía arabinosa no se presentó cetosas.

En el tercer tubo el cual contenía glucosa no se presentó cetosas.

 PRUEBA SE SACAROSA: En esta prueba obtuvimos los siguientes

resultados:

En la prueba de Benedict observamos en la parte de abajo un precipitado de color

azul fuerte y arriba un color azul más claro.

En la prueba de Selliwanoff observamos un color rojizo denso.

 PRUEBA PARA POLISACÁRIDOS: observamos que al calentarse

pierde el color y al enfriarse vuelve el color azul.
 CUESTIONARIO.

1. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para

carbohidratos.

2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas?

3. Explique estructuralmente, porque la maltosa es un azúcar reductor y

porque el almidón no lo sus observaciones

4. Consulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de los

carbohidratos.

5. Por qué la celulosa a pesar de estar formada por moléculas de glucosa es

insoluble en agua.

6. ¿por qué la sacarosa es un azúcar no reductor? Consulte las posibles

estructuras de las muestras problemas.

7. Consulte el fundamento de otras técnicas usadas para la determinación de

la glucosa en el laboratorio.
 SOLUCION
1.
2. La Prueba De Molish, es una prueba que da positiva es presencia de lactosa
que es un azúcar reductora, es la prueba que reduce al azúcar de la leche dando
una coloración al formar el complejo.
Reactivo De Benedict, Es oxidante suave capaz de oxidar al azúcar de la leche ya
que este azúcar presenta al grupo carbonilo que al encontrarse libre hace que el
azúcar sea reductor, esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de
reducir el Cu2+ en un medio alcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y precipita en
forma de Cu2O, lo que proporciona la coloración positiva de la reacción.
Reactivo De Barfoed; Siempre dar una prueba positiva en presencia de azúcar
reductores porque al formarse el óxido que precipita dando una coloración
mientras que este reactivo en presencia de almidón que un polisacárido no
reductor no podrá formarse al oxido cuproso dando una prueba negativa.
Prueba Bial, es una prueba para identificar azucares pentosas, ya que las
pentosas al reaccionar con ácido clorhídrico forma el furfural.
Prueba Salliwanoff; Se usa para azúcar aldosa y cetosa que en presencia de
ácidos minerales y calentándolas sufren deshidratación la cual da como resultado
la formación de un anillo pentagonal de furfural que luego se condensa dando una
coloración roja.
Prueba Sacarosa; Es un disacárido que carece de poder reductor esto se debe a
que carece de aldehído y cetonas libres y al aplicar la prueba de Benedict y
Salliwanoff están dan positivas, la hidrolisis acida hace que la glucosa y fructosa
reaccionen con el reactivo de Benedict y Salliwanof.
Prueba Polisacárido; reaccionan con el yoduro de potasio dando como resultado
un poli yoduro toma una coloración azulina indicando la presencia del halógeno en
el almidón.

3.Porque la maltosa es un disacárido formando por la unión de dos unidades de

glucosa mediante enlace ∞14- glucosidico que hace que sea un azúcar reductor y
pueda formar el compuesto alfa glucopiranocil (1,4) alfa glupopiranos y el almidón
a pesar de estar formado por unidades de glucosa, forma un polímero o
polisacárido formando por la mezcla de amilasa y amilo pectina que se unen
mediante enlace ∞1-6 y ∞ 1,4 que al ser ramificado no deja aldehído o cetonas
libres haciendo que no sea reductor por lo que la prueba es negativa.

4. las enfermedades causas por los carbohidratos están directamente

relacionadas con los órganos del cuerpo que realizan el metabolismo.

Las siguientes enfermedades son causas por hidratos de carbono

Obesidad: se define como una acumulación anormal excesiva de grasa.

Diabetes tipo 1: se observa una sobre producción de insulina debida a la

destrucción auto inmune de las células B.
Diabetes tipo 2: en esta el cuerpo produce insulina pero no la suficiente a la que
produce la glucosa.

Caries.

Enfermedades cardiovasculares: impiden al corazón su normal funcionamiento.

5. La celulosa tiene una estructura lineal o fibrosa, en la que se establecen

múltiples puentes de hidrógeno entre los grupos hidroxilo de distintas cadenas
yuxtapuestas de glucosa, haciéndolas impenetrables al agua, lo que hace que sea
insoluble en agua, y originando fibras compactas que constituyen la pared celular
de las células vegetales.

6.No es un azúcar reductor porque no contiene ningún átomo de carbono

anomérico libre, puesto que los carbonos anoméricos de sus dos unidades
monosacáridos constituyentes se hallan unidos entre sí covalentemente mediante
un enlace O-glucosídico. Por esta razón, la sacarosa no es un azúcar reductor y
tampoco posee un extremo reductor.

7. Se puede determinar glucosa usando el reactivo de felling por que la glucosa al

tener aldehído en su estructura esta es reducida por el Cu+2 presenta en el
reactivo de felling y formara el Cu2 o que se precipita y da una coloración rojiza.
 CONCLUSIÓN.
En esta práctica llegamos a conocer la importancia de cada una de las pruebas
que realizamos, y así poder conocer carbohidratos, pentosas, aldosas, cetosas,
acción reductora de azucares.
Es de mucha importancia conocer sobre el tema de carbohidratos, son bases
fundamental para la estabilidad del organismo y así diferenciar que sustancias
pueden ingerir ciertos organismo cual las pueden rechazar y como pueden
reaccionar algunas con un cierto organismo metabolizándolas.
 LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA N° 4
PRUEBAS CUALITATIVAS PARA CARBOHIDRATOS

ANYI TAPIAS GONZALES

OSWALDO PETRO DIAZ
ADRIANA RAMOS
MARIA JOSE MONTALVO
JUAN CAMILO DIONICIO
ADALBERTO CARABALLO

ARCADIO ARMANZA
(DOCENTE)

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS
PROGRAMA DE INGENIERIA AGRONOMICA