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NORMA TÉCNICA NTC

COLOMBIANA 235-2

2002-04-30

GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES.


DETERMINACIÓN DE LA MATERIA INSAPONIFICABLE
MÉTODO DE EXTRACCIÓN CON HEXANO

E: ANIMAL AND VEGETABLE FATS AND OIL.


DETERMINATION OF INSAPONIFIABLE MATTER.
METHOD USING HEXANO EXTRACTION

CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopción equivalente


(EQV) de la ISO 18609:2000

DESCRIPTORES: determinación de la materia


insaponificable por extracción con
hexano; grasas; alimentación; grasa
vegetal; grasa animal; aceite vegetal;
aceite animal; grasas y aceites.

I.C.S.: 67.200.10

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)


Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435

Prohibida su reproducción Editada 2002-05-14


PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo


nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica


está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.

La NTC 235-2 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2002-04-30.

Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a


través de su participación en el Comité Técnico 311501 Aceites y grasas vegetales y animales
comestibles.

ACEGRASAS S.A. FÁBRICA DE GRASAS Y PRODUCTOS


CARULLA VIVERO S.A. QUÍMICOS S.A.
CENIPALMA SOCIEDAD INDUSTRIAL DE GRASAS Y
COMESTIBLES RICOS S.A. ACEITES
COMPAÑÍA NACIONAL DE LEVADURAS UNILEVER ANDINA S.A.

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las


siguientes empresas:

ASOCIACIÓN NACIONAL DE INDUSTRIALES INDUSTRIAS DEL MAÍZ S.A.


ANDI INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE
COLOMBINA S.A. MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS INVIMA
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.
S.A. IBLAB
COMPAÑÍA NACIONAL DE LEVADURAS S.A. LLOREDA GRASAS S.A.
CORPORACIÓN COLOMBIA INTERNACIONAL MERCADEO DE ALIMENTOS DE
DISA S.A. COLOMBIA S.A.
FÁBRICA DE ACEITES Y MARGARINAS DEL MINISTERIO DE AGRICULTURA
MAGDALENA MINISTERIO DE DESARROLLO
FABRICAS UNIDAS DE ACEITES Y GRASAS ECONÓMICO
VEGETALES MINISTERIO DE SALUD
FEDERACIÓN NACIONAL DE NESTLÉ DE COLOMBIA
CULTIVADORES DE PALMA NULAB LTDA
FIRMENICH S.A. PRODUCTOS ALIMENTICIOS CRONCH
GRASAS S.A. S.A.
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS NOEL - ZENÚ SANTANDEREANA DE ACEITES
S.A. SGS COLOMBIA S.A.
SUPERINTENDENCIA DE INDUSTRIA Y UNIVERSIDAD INCCA DE COLOMBIA
COMERCIO UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO
UNIVERSIDAD DEL VALLE UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 235-2

GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES.


DETERMINACIÓN DE LA MATERIA INSAPONIFICABLE
MÉTODO UTILIZANDO HEXANO PARA LA EXTRACCIÓN

1. OBJETO

La presente norma especifica un método que usa una extracción con hexano para la
determinación del contenido de materia insaponificable en las grasas y aceites animales y
vegetales.

Este método se aplica a todas las grasas y aceites pero no a las ceras.

ADVERTENCIA. Sin embargo, en comparación con el método presentado en la NTC 235-1, da


resultados que son sistemáticamente bajos.

2. REFERENCIAS NORMATIVAS

La siguiente norma contiene disposiciones que, mediante la referencia dentro de este texto,
constituyen la integridad del mismo. En el momento de la publicación eran válidas las ediciones
indicadas. Todas las normas están sujetas a actualización; los participantes, mediante
acuerdos basados en esta norma, deben investigar la posibilidad de aplicar la última versión de
la norma mencionada a continuación:

NTC 5033: 2002, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparación de la muestra para
ensayo.

3. DEFINICIONES

Para los propósitos de la presente norma se aplica la siguiente definición:

3.1 Materia insaponificable: todas las sustancias presentes en el producto, que, después de
saponificación de éste por hidróxido de potasio y extracción por hexano, no son volátiles bajo
las condiciones especificadas.

Nota. El material insaponificable incluye lípidos de origen natural, como esteroles, hidrocarburos y alcoholes superiores,
alcoholes alifáticos y terpénicos, al igual que cualquier material extraño extraído por el solvente, y no volátil a 103 °C
(por ejemplo: aceites minerales) que pueden estar presentes.

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4. PRINCIPIO

Saponificación de la grasa o aceite por ebullición bajo reflujo con una solución de hidróxido de
potasio etanólica. Extracción de la materia insaponificable de la solución de jabón con hexano,
o en ausencia de éste, éter de petróleo liviano. Evaporación del solvente y pesaje del residuo
después de secado.

5. REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de grado analítico reconocido. El agua usada debe ser agua
destilada o agua de pureza al menos equivalente.

5.1 n-Hexano, o en ausencia de éste, éter de petróleo liviano, destilado entre 40 °C y 60 °C,
número de bromo menor de 1. Ambos solventes deben estar libres de residuos.

5.2 Etanol, solución 10 % (v/v).

5.3 Fenolftaleína, solución de 10 g/l en 95 % de etanol (v/v).

5.4 Hidróxido de potasio, solución etanólica, c(KOH) ≈ 1 mol/l. Se disuelven 60 g de


hidróxido de potasio en 50 ml de agua y se diluye hasta 1 000 ml con etanol al 95 % (v/v). La
solución debe ser incolora o de un amarillo pajizo.

6. EQUIPO

El usual de laboratorio y, en particular, el siguiente:

6.1 Balón de 250 ml, con boca esmerilado.

6.2 Condensador de reflujo con junta esmerilada para unión a los balones (véase el numeral 6.1).

6.3 Embudos de separación con capacidad de 250 ml, con llaves y tapones de
politetrafluoroetileno (PTF).

6.4 Baño de agua hirviendo o manta de calentamiento.

6.5 Horno con capacidad para mantenerse a 103 °C ± 2 °C o un aparato de secado al


vacío, por ejemplo, un evaporador giratorio o un aparato similar.

7. MUESTREO

El muestreo no es parte del método especificado en la presente norma. En la NTC 217 se


presenta un método de muestreo recomendado.

Es importante que el laboratorio reciba una muestra representativa y que no haya sido dañada
o alterada durante el almacenamiento o transporte.

8. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

La muestra de ensayo se prepara de acuerdo con la NTC 5033.

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9. PROCEDIMIENTO

9.1 PORCIÓN DE ENSAYO

Se pesan aproximadamente 5 g de la muestra de ensayo (véase el numeral 8), con


aproximación a 0,01 g, en un balón de 250 ml (véase el numeral 6.1).

9.2 SAPONIFICACIÓN

Se agregan 50 ml de solución de hidróxido de potasio (véase el numeral 5.4) y algunas perlas


de vidrio. Se conecta el condensador de reflujo (véase el numeral 6.2) al balón y se deja el
contenido en ebullición lenta durante 1 h. Al terminar este período, se suspende el
calentamiento, se agregan 50 ml de agua destilada por la parte superior del condensador y se
agita.

9.3 EXTRACCIÓN DE LA MATERIA INSAPONIFICABLE

Después del enfriamiento, se transfiere la solución a un embudo de separación de 250 ml


(véase el numeral 6.3). Se enjuagan el balón y las perlas varias veces con n-hexano (véase el
numeral 5.1) usando 50 ml en total, y se vierten estos enjuagues en el embudo de separación.
Se coloca el tapón, se agita vigorosamente durante 1 min y se libera presión periódicamente
invirtiendo el embudo y abriendo la llave con cuidado.

Se deja reposar hasta que haya separación completa de las dos fases, y luego se separa la
capa inferior (capa acuosa) en un segundo embudo de separación.

Si se forma una emulsión, ésta se destruye agregando pequeñas cantidades de etanol o


hidróxido de potasio concentrado, o solución de cloruro de sodio.

Se extrae la solución jabonosa etanólica acuosa dos veces más, cada una de ellas en la misma
forma con 50 ml de hexano. Se recogen los tres extractos de n-hexano en el embudo de
separación.

9.4 LAVADO DEL EXTRACTO CON HEXANO

Se lavan los extractos combinados tres veces con porciones de 25 ml de solución de etanol
(véase el numeral 5.2), agitando vigorosamente y decantando la solución etanólica acuosa
después de cada lavada. Se decanta cada solución de lavado, dejando 2 ml, luego se gira el
embudo alrededor de su eje. Se espera algunos minutos para recolectar la capa etanólica
acuosa restante. Al decantar, se cierra la llave cuando la solución de hexano alcanza el
diámetro interior de la misma.

Se continúa lavando con la solución de etanol hasta que los enjuagues no presenten color
rosado al agregar una gota de solución de fenolftaleína (véase el numeral 5.3).

9.5 EVAPORACIÓN DEL SOLVENTE

Se transfiere cuantitativamente la solución de hexano, poco a poco si es necesario, a través del


embudo de separación, hacia un balón de 250 ml secado previamente a 103 °C ± 2 °C en el
horno (véase el numeral 6.5), enfriado y pesado con aproximación a 0,1 mg. Se evapora el
solvente en un baño de agua hirviendo (véase el numeral 6.4).

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9.6 SECADO DEL RESIDUO Y DETERMINACIÓN

9.6.1 Se seca el residuo durante 15 min en el horno (véase el numeral 6.5) a 103 °C ± 2 °C,
con el balón en posición casi horizontal. Se deja enfriar en un desecador y se pesa con
aproximación a 0,1 mg.

Como alternativa, se conecta el balón al aparato para secado en vacío (véase el numeral 6.5) y se
seca sobre el baño de agua hirviendo con el máximo de vacío de la bomba de agua,
aproximadamente durante 15 min. Se deja enfriar a temperatura ambiente con el máximo de vacío
de la bomba de agua, se seca cuidadosamente el balón y se pesa con aproximación a 0,1 mg.

Se repite el secado por períodos sucesivos de 15 min hasta que la pérdida de masa entre dos
pesajes sucesivos sea menor de 1,5 mg. Si no se obtiene masa constante después de tres
períodos de secado, la materia insaponificable probablemente está contaminada y, entonces,
se debe repetir la determinación.

9.6.2 Si se considera necesaria una corrección para ácidos grasos libres, después del pesaje
del residuo, se disuelve éste en 4 ml de hexano y luego se agregan 20 ml de etanol,
previamente neutralizado, hasta obtener un color rosado suave en presencia de fenolftaleína
(véase el numeral 5.3) como indicador. Se titula con solución etanólica volumétrica estándar de
hidróxido de potasio, c(KOH)=0,1 mol/l hasta obtener el mismo color final. La masa de los
ácidos grasos libres se calcula como ácido oléico y la masa del residuo se corrige de acuerdo
con esto (véase el numeral 10).

9.7 NÚMERO DE DETERMINACIONES

Se llevan a cabo dos determinaciones en la misma muestra de ensayo.

9.8 ENSAYO EN BLANCO

Se lleva a cabo un ensayo en blanco usando el mismo procedimiento y las mismas cantidades
de todos los reactivos, pero omitiendo la porción de ensayo. Si el residuo excede 1,5 mg, se
investigan la técnica y los reactivos.

10. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

El contenido de materia insaponificable, expresado como un porcentaje en masa de la muestra,


es igual a:

100 ( m1 − m 2 − m 3 )
%
m0

Donde:

m0 = es la masa, en gramos, de la porción de ensayo;

m1 = es la masa, en gramos, del residuo;

m2 = es la masa, en gramos, del residuo obtenido con el blanco;

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m3 = es la masa, en gramos, de los ácidos grasos libres, si los hay (véase el


numeral 9.6.2) y es igual a 0,28 Vc.

Donde:

V = es el volumen, en mililitros, de la solución etanólica volumétrica estándar


de hidróxido de potasio usada para la titulación;

c = es la concentración exacta, en moles por litro, de la solución etanólica


volumétrica estándar de hidróxido de potasio.

El resultado se considera como la media aritmética de las dos determinaciones.

11. PRECISIÓN

El Anexo A contiene los detalles de un ensayo interlaboratorio sobre la precisión del método.
Los valores derivados de este ensayo pueden no ser aplicables a rangos y matrices diferentes
a las que se dan.

12. INFORME DE ENSAYO

En el informe se debe especificar:

- toda la información necesaria para completar la identificación de la muestra;

- el método de acuerdo con el cual se llevó a cabo el muestreo, si es conocido;

- el método utilizado;

- también se deben mencionar todos los detalles operativos no especificados en la


presente norma, o considerados como opcionales, junto con los detalles de
cualquier evento que pueda haber influido en los resultados del ensayo;

- el(los) resultado(s) de ensayo obtenidos, o, si la repetibilidad ha sido verificada, el


resultado final obtenido.

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Anexo A (Informativo)

Resultados del ensayo interlaboratorio

A1. PARTICIPACIÓN

En el estudio colaborativo organizado por “The Institut des Corps Gras Centre Technique
Industriel" tomaron parte cuarenta laboratorios de seis diferentes países (Francia, Alemania
Hungría, Malasia, Países Bajos y Gran Bretaña.

A2. MUESTRAS

Se ensayaron tres muestras:

- Muestra A. Aceite crudo de girasol

- Muestra B. Aceite crudo de palma

- Muestra C. Sebo crudo

A3. RESULTADOS

En la Tabla A1, A2 y A3 se registran los datos de los resultados obtenidos por los laboratorios
de las muestras A, B y C. En la Tabla A4 se registran los datos de los resultados muestra por
muestra.

Para la muestra A se eliminaron dos laboratorios sobre la base de los ensayos the Cochran
(Laboratorio 6) y Dixon (Laboratorio 9), un laboratorio para la muestra C sobre la base del
ensayo Dixon (Laboratorio 11). Para la muestra B no se eliminó ningún laboratorio.

El promedio del contenido de la materia insaponificable para las tres muestras estuvo entre
0,15 % y 0,58 % (en masa).

El límite de repetibilidad se aproxima a 0,06 % (en masa) y el coeficiente de variación de


repetibilidad está entre 3,6 % y 10,5 %.

El límite de reproducibilidad se aproxima a 0,18 % (en masa) y el coeficiente de variación de


reproducibilidad esta entre 9 % y 36 %.

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Tabla A1. Muestra A. Aceite crudo de girasol

Resultado 1 Resultado 2
Laboratorio
% (en masa) % (en masa)
1 0,56 0,58
2 0,541 0,545
3 0,51 0,52
4 0,62 0,58
5 0,57 0,63
6 0,78 0,61
7 0,54 0,51
8 0,64 0,62
9 0,89 0,89
10 0,54 0,57
11 0,62 0,64
12 0,6 0,63
13 0,68 0,68
14 0,56 0,52
Nota. El laboratorio 6 fue eliminado con base en el ensayo de Cochran (5 %).
El laboratorio 9 fue eliminado con base en el ensayo de Dixon (5 %).

Tabla A2. Muestra B. Aceite crudo de palma

Resultado 1 Resultado 2
Laboratorio
% (en masa) % (en masa)
1 0,35 0,33
2 0,2625 0,2485
3 0,37 0,32
4 0,30 0,30
5 0,35 0,42
6 0,44 0,45
7 0,35 0,3
8 0,35 0,35
9 0,18 0,18
10 0,25 0,32
11 0,51 0,48
12 0,24 0,26
13 0,34 0,32
14 0,38 0,34

Tabla A3. Muestra C. Sebo crudo

Resultado 1 Resultado 2
Laboratorio
% (en masa) % (en masa)
1 0,16 0,18
2 0,1337 0,106
3 0,18 0,17.
4 0,15 0,14
5 0,22 0,23
6 0,09 0,12
7 0,09 0,11
8 0,2 0,21
9 0,04 0,03
10 0,13 0,18
11 0,40 0,41
12 0,13 0,14
13 0,23 0,22
14 0,16 0,19
Nota. Laboratorio 11 fue eliminado con base en el ensayo de Dixon (5 %).

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Tabla A4. Análisis estadístico de los resultados del estudio colaborativo

Aceite crudo de
Aceite crudo de girasol Sebo crudo
palma
Muestra A Muestra C
Muestra B
Numero de laboratorios 14 14 14
Número de laboratorios retenidos luego de 12 14 13
eliminar estadísticas falsas
Promedio, % (en masa) 0,58 0,33 0,15
Desviación estándar de repetibilidad, sr ,% 0,02 0,03 0,02
Coeficiente de variación de repetibilidad (%) 3,64 7,81 10,49
Desviación estándar de reproducibilidad, sR, % 0,05 0,08 0,05
Coeficiente de variación de reproducibilidad, (%) 8,99 24,63 36,32
Límite de repetibilidad, r, % 0,06 0,07 0,04
Límite de reproducibilidad, R, % 0,15 0,23 0,16

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DOCUMENTO DE REFERENCIA

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Animal and Vegetable Fats and


Oils. Determination of Unsaponiable Matter. Method Using Hexano Extraction. Geneve:
ISO 2000, 8 p. (ISO 18609).