ProtocoloE Coli

Protocolo e Informe Armonizado para la Evaluación del Desempeño del Método para la enumeración de E.
coli Β-Glucuronidasa a 44°C utilizando 5-Bromo-4-Cloro-3-Indol Β-D-Glucurónido

Apéndice Normativo J, NOM-210-SSA1-2014
PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA

EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL
MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE
E. coli β-glucuronidasa a 44 °C
utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-
Glucurónido
APÉNDICE NORMATIVO J,
NOM-210-SSA1-2014
1.
1
Participaron en la elaboración de este protocolo.
María Esperanza Rodríguez Parra Karina Guerrero Colina

Laboratorio Estatal Salud Pública Tamaulipas Laboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.
Responsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Q. Analista de Análisis Microbiológicos
Alimentos 229 9811390 Ext: 117
834 312 6633 qcguerrero@hotmail.com
lespt@hotmail.com
Odilia Hernández Hernández Anastasio Palacios Marmolejo

Laboratorio Estatal Salud Pública Veracruz. Laboratorio Estatal de Salud Pública de
Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios Aguascalientes
Microbiológicos/Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios 449 9775511
229 9811390 Ext: 117 anastaciopalacios73@gmail.com
lesp.ohernandez@gmail.com
Participaron en la revisión de este protocolo.
Evelia Nungaray Jiménez Liliana Cano Ramírez

Laboratorio Estatal de Salud Pública de Jalisco Comisión de Control Analítico y Ampliación de
(33) 38330631 Cobertura.
nungaray_eve@hotmail.com Q. Analista
55 50805200 EXT. 2045
lcano@cofepris.gob.mx
César Omar Gálvez González M. en C. Juan Carlos Piliado Velasco

Comisión de Control Analítico y Ampliación de Laboratorio de Análisis de Riesgos del Distrito Federal
Cobertura. lardf2@gmail.com
Coordinador de la Oficina de Proyectos analíticos. Tel.: 58507923
5550805200 ext. 2022
cgalvez@cofepris.gob.mx
Autorización
Imelda Rocío Guzmán Cervantes Josefina Gutiérrez Ramírez

Comisión de Control Analítico y Ampliación de Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Cobertura. Cobertura.
Directora Ejecutiva de Control Analítico Directora Ejecutiva de Innovación.
Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext. 2043 01 55 50 80 52 00 ext. 2005
irguzman@cofepris.gob.mx jgutierrez@cofepris.gob.mx
2.
2
1. OBJETIVO.
1.1. Establecer las directrices para la evaluación del desempeño del Apéndice Normativo J. Método
para la Enumeración de E. coli β-glucuronidasa a 44ºC utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-
Glucurónido, NOM-210-SSA1-2014 en la(s) matrices de alimentos de su interés y competencia,
mediante la aplicación de este protocolo armonizado.
2. CAMPO DE APLICACIÓN.
2.1. Este protocolo es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de
implementación del Apéndice Normativo J. Método para la Enumeración de E. coli β-
glucuronidasa a 44ºC utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido.
3. MÉTODO DE ENSAYO.
3.1. Apéndice Normativo J. Método para la Enumeración de E. coli β-glucuronidasa a 44ºC, utilizando
5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido; Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014,
Productos y Servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos
indicadores. Determinación de microorganismos patógenos.
3
3.2. Diagrama de Flujo.

El diagrama de flujo es una representación gráfica del método, en todo momento se debe
tener acceso al método de prueba original.
4
4. EQUIPOS E INSTRUMENTOS
4.1. Los equipos listados a continuación son los requeridos por el método. En el informe de
evaluación de desempeño deberá completarse la “Tabla equipos e instrumentos empleados”
Nombre Características Estado deseado
Balanza
Sensibilidad de 0.1 g Calibración vigente y verificada el día de uso.
Granataria
Clase F1 o E2
10 ó 20 g;
Marco de pesas Calibrado
y 100 g ó 200 g ó
500 g
Calificada1 44°C ± 1°C, por 24 h mínimo.

Temperatura
Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura
Incubadora controlada a 44°C ±
de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día.
1°C.
División mínima de 0.5°C adecuadamente inmerso.
Calificada 35°C ± 2°C, por 24 h mínimo. Con termómetro

Temperatura
calibrado o verificado para realizar la lectura de la
Incubadora controlada a 35°C ±
temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día.
2°C
División mínima de 0.5°C. Adecuadamente inmerso.
Temperatura Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura

Baño de agua controlada de 44°C a de la temperatura del baño durante su uso. División mínima de
47°C. 0.5°C, adecuadamente inmerso.
Funcionando,
Mantenimiento vigente, lámpara funcionando y lupa limpia sin
Cuenta colonias lámpara con
ralladuras ni roturas.
iluminación.
Homogeneizador Mantenimiento vigente.

peristáltico o Funcionando. Licuadora no debe presentar fugas en el momento de la
licuadora2 operación, los vasos deben ser esterilizables.
5. MATERIALES
5.1. El material de trabajo debe ser estéril, cuando no se indique otra cosa, el material esterilizado por
calor seco o calor húmedo se considera estéril hasta por un mes siempre que se mantenga la
integridad del empaque; todo el material debe ser adecuadamente identificado, señalando la
fecha de esterilización de material y la fecha de uso. Cuando se use material estéril desechable,
1 Se entiende que la calificación de los equipos para incubación consiste en un procedimiento interno o externo por el cual se
demuestre, a través del monitoreo en diferentes puntos que la temperatura de la cámara durante un periodo determinado
mantiene una homogeneidad térmica, asegurando las condiciones de incubación de la prueba.
2 El uso del homogeneizador o de la licuadora depende del tipo de muestra, deberá utilizarse el sistema de homogeneización
más adecuado para preparar la muestra y este debe mencionarse en el informe.
5
éste deberá ser evaluado por lote en su recepción o documentar la esterilidad mediante
certificado de calidad, una vez abierto el empaque los materiales no deben ser usados después
de tres días.
5.2. El material de vidrio re-usado deberá demostrar que fue lavado adecuadamente, mediante
registros de supervisión y demostrar la ausencia de residuos de detergente.
5.3. Los siguientes materiales son de carácter enunciativo, el laboratorio deberá reportar los utilizados
y sus características en el informe.
5.3.1.Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora de vidrio o aluminio.

 Cajas Petri de vidrio o desechable, diámetro de 90 mm por 15 mm de alto
 Cucharas, tenedores y cuchillos estériles para el manejo de la muestra
 Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables
 Gradillas para tubo de ensaye esterilizables
 Mecheros Bunsen o Fisher.
 Perillas o propipetas.
 Pipetas estériles de vidrio graduadas con diferentes capacidades: 10 y 5 mL con divisiones
de 0.5 mL y 1 mL y con división mínima de 0.1 mL.
 Micropipetas 100 a 1000 μL calibradas y/o verificadas.
 Matraces Erlenmeyer con tapón de rosca de 250 mL.
 Tubos de ensaye de 18 por 150 mm con tapón de rosca.
 Puntas para micropipetas estériles y desechables.
6. MEDIOS DE CULTIVO Y MATERIAL BIOLÓGICO DE REFERENCIA

La preparación de los medio de cultivo se debe realizar conforme a las instrucciones del fabricante.
6.1. MEDIOS DE CULTIVO

6.1.1. Medio Triptona bilis X-glucurónido (TBX)
6.1.2. Agua peptonada amortiguada
6.2. CEPAS (MATERIAL BIOLÓGICO)

6.2.1.E. coli NCTC 13216 ó ATCC 25922 ó ATCC 8739
7. MUESTRAS
7.1. Cada laboratorio deberá realizar la evaluación del desempeño del método con al menos una
matriz por cada grupo de alimentos indicado en la siguiente tabla.
7.2. En el informe de validación se deberá reportar los criterios para la selección de la muestra
considerando lo siguiente:
6
Tipo de producto Matriz representativa

Grupo de Prioridad para
Tipos de producto recibido en el mayormente recibida en el
alimentos el laboratorio. 3
laboratorio. laboratorio.
Crudo
Procesados
térmicamente
Productos Reportar en el Reportar en el
Congelados Reportar en el informe
Cárnicos informe informe
Fermentados
Curado
Pate
Pescado y
Crudos Reportar en el Reportar en el
Productos de la Reportar en el informe
Congelados informe informe
pesca
Frutas y Reportar en el Reportar en el

Crudos Reportar en el informe
Vegetales informe informe
Crudos
Congelados Reportar en el Reportar en el
Leche y lácteos Reportar en el informe
fermentados informe informe
Queso artesanal
Agua potable
Agua embotellada Reportar en el Reportar en el
Agua Reportar en el informe
Agua de pozo informe informe
Hielo
Para ser llenado Reportar en el Reportar en el

Otros Productos Reportar en el informe
por cada laboratorio informe informe
7.3. La selección de las muestras debe realizarse con base en las prioridades del laboratorio
considerando; la frecuencia de recepción y los programas prioritarios.
7.4. Para la selección de las muestras se deberá contar con aproximadamente 1.5 kg o L de muestra
y almacenar en condiciones adecuadas, dependiendo de la matriz. Se debe además contar con
la trazabilidad de la muestra por ejemplo marca, número de lote, fecha de caducidad, para
productos como frutas, vegetales, agua de la llave, se deben contener información de los datos
de muestreo o lugar de la compra, fecha de la compra, etc.
7.5. Verificación de la muestra:

7.5.1. Las muestras seleccionadas deberán ser analizadas para la búsqueda de E. coli β-
glucuronidasa a 44 °C utilizando el método en cuestión.
7.5.2. Deberá realizarse por triplicado, encontrando resultados negativos en las tres repeticiones.
8. DESARROLLO EXPERIMENTAL
3 Reportar numéricamente indicando 1 para el más prioritario.
7
8.1. Ajuste del inóculo

8.1.1. Previo al ensayo de evaluación se debe identificar la dilución adecuada de los
microorganismos para preparar la suspensión de trabajo, en las concentraciones que se
indican más adelante.
8.1.2. El protocolo de preparación del inóculo puede ser elegido a conveniencia del laboratorio,
este debe describirse en el informe.
8.1.3. Para la preparación del inóculo puede consultarse la “Guía para la Evaluación del
Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para el Análisis de Alimentos” (CCAYAC-
P-062).
8.1.4. Inocular aproximadamente 120,000 UFC en 250 mL de la muestra (para muestras líquidas) o
250 mL de la primera dilución, para obtener una cuenta aproximada de 480 UFC en la
primera serie de placas, 48 UFC en la segunda y 5 UFC en la tercera.
Tabla 1 Preparación de muestras
Diluciones Número de Microorganism

Parámetro Analistas Muestra Tamaño de Inóculo
decimales réplicas o
25 g o 250 Muestras 120,000 UFC

Repetibilidad Un analista 10 Escherichia coli
mL sólidas. aproximadamente
3
diluciones
Muestras
Reproducibilida Al menos 2 analistas, o 25 g o 250 10 por 120,000 UFC
Líquidas4 Escherichia coli
d 2 tiempos diferentes mL analista aproximadamente
Directa y 2
diluciones
8.2. Repetibilidad
8.2.1. Medir 10 alícuotas de 25 g de la matriz seleccionada en 225 mL de agua peptonada
amortiguada, para muestras líquidas medir 250 mL.
8.2.2. Inocular cada alícuota con aproximadamente 120,000 UFC.
8.2.3. Verificar los inóculos utilizando la técnica de vaciado en placa, empleando para el cálculo 6
cajas, para obtener entre 15 y 150 UFC.
8.2.4. Proceder como lo establece el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice
Normativo J. NOM-210-SSA1-2014.
8.2.5. Registrar los resultados en el formato del informe.
8.3. Reproducibilidad
8.3.1. Un segundo analista o el mismo en un tiempo diferente, deberá ejecutar lo descrito en
repetibilidad.
8.3.2. Registrar los resultados en el formato del informe.
9. Resultados
9.1. Registrar resultados en el informe de desempeño.
4 Dependiendo de la matriz y la carga microbiana esperada algunas muestras liquidas deben ser
diluidas, en este caso realizar la siembra de las tres primeras diluciones.
8
10. Análisis estadístico

10.1. Repetibilidad
10.1.1. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará
automáticamente el cálculo.
10.1.2. El valor de r se calcula como:
s
DSR=
x́
r=2.8
√
Dónde:
DSR2
n
s=desviación estándar
r= repetibilidad
DSR=Desviación estándar relativa
n = número de réplicas
x́ = Promedio
10.2. Reproducibilidad
10.2.1. Calcular la reproducibilidad utilizando los resultados obtenidos de las 10 repeticiones de
la prueba de repetibilidad de un analista, más los resultados de un segundo analista, o el
mismo analista en un segundo tiempo.
10.2.3. El valor de R se calcula como:
Dónde:
R=2.8
√ DSR21 + DSR 22
n
R= Reproducibilidad (por analista)

DSR1=Desviación estándar relativa del analista 1
DSR2=Desviación estándar relativa del analista 2
n= Total de réplicas considerando los dos analistas
10.3. Recuperación
10.3.2. El valor de % de recuperación se calcula como:
% Recuperación= Media de la cuenta de logaritmo de las cuentas x100
Logaritmo de las UFC inoculadas
10.4. Sesgo
10.4.1. El sesgo es la diferencia absoluta entre el valor conocido como verdadero y el valor
obtenido experimentalmente.
9
El sesgo se calcula como:
Sesgo= [Ve-Vo]
Donde Ve= valor esperado
Vo= valor obtenido
10.5. Fuentes de incertidumbre

10.5.1. Identificar y mencionar las posibles fuentes de incertidumbre.
10.5.3. La incertidumbre expandida U tal como se define por GUM, se deriva de la incertidumbre
estándar combinada uc(y), con un factor de cobertura k elegido en esta especificación
técnica como un valor de 2 (que aproximadamente corresponde a un nivel de confianza del
95%.
U = 2 sR
Donde:
U= Incertidumbre expandida.
YiA= Son los datos transformados a logaritmo, en log10
(ufc/g) ó log10 (ufc/ml) del analista A
YiB= Son los datos transformados a logaritmo, en log10
(ufc/g) ó log 10 (ufc/ml) del analista B
n= 10
11. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
Parámetro Criterio de aceptación
Repetibilidad 10 Réplicas un analista,

Nivel de fortificación: valor medio
10
Parámetro Criterio de aceptación
Resultado r < 3
Reproducibilidad 10 Réplicas por cada analista,

Resultado R < 3
Recuperación 10 Réplicas un analista,

Nivel de fortificación valor medio
Resultado entre 90 y 110% log
Sesgo 10 réplicas un analista,

La diferencia absoluta de lo recuperado y lo inoculado es <0.3 log
Incertidumbre Especificar el mensurando

Listar las fuentes de incertidumbre
c) Realizar los cálculos de la incertidumbre expandida.
Referencia: Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis
de alimentos. CCAYAC-P-062. 2012.
11
INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E.
coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE
NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014
INFORME PARA LA EVALUACIÓN

DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO
PARA LA ENUMERACIÓN DE
E. coli β-glucuronidasa a 44 °C
utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol
β-D-Glucurónido
APÉNDICE NORMATIVO J, NOM-

210-SSA1-2014
1
Participaron en la elaboración de este informe
Maria Esperanza Rodriguez Parra Odilia Hernández Hernández

Responsable de Laboratorio de Microbiología de Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios
Aguas y Alimentos Microbiológicos/Jefatura de Depto. de Análisis
834 312 6633 Sanitarios
lespt@hotmail.com 229 9811390 Ext: 117
lesp.ohernandez@gmail.com
Anastasio Palacios Marmolejo César Omar Gálvez González

Laboratorio Estatal de Salud Pública de Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Aguascalientes Cobertura.
449 9775511 Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos.
anastaciopalacios73@gmail.com 5550805200 ext. 2022
Karina Guerrero Colina Evelia Nungaray Jiménez

Laboratorio Estatal Salud Pública Veracruz. Laboratorio Estatal de Salud Pública de
Q. Analista de Análisis Microbiológicos Jalisco
229 9811390 Ext: 117 Coordinadora de Microbiología Sanitaria
qcguerrero@hotmail.com Tel. 01 333 833 06 31
nungaray_eve@hotmail.com
Participaron en la revisión de este informe.
Fabiola Curiel Ayala Geovani Ramírez Hernández

Laboratorio Estatal de Salud Pública de Querétaro Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Gerente Técnica Vigilancia Sanitaria Cobertura
(442) 2 20 72 42 50805200 ext. 2026
2
gtecnicalespqro@gmail.com gramirez@cofepris.gob.mx
Maria Esperanza Rodriguez Parra Odilia Hernández Hernández

Responsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios
Alimentos Microbiológicos/Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios
834 312 6633 229 9811390 Ext: 117
lespt@hotmail.com lesp.ohernandez@gmail.com
Anastasio Palacios Marmolejo César Omar Gálvez González

Laboratorio Estatal de Salud Pública de Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Aguascalientes Cobertura.
449 9775511 Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos.
anastaciopalacios73@gmail.com 5550805200 ext. 2022
Karina Guerrero Colina

Laboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.
Q. Analista de Análisis Microbiológicos
229 9811390 Ext: 117
qcguerrero@hotmail.com
Autorización
Armida Zúñiga Estrada Josefina Gutiérrez Ramírez

Comisión Federal Para la Protección Contra Comisión de Control Analítico y Ampliación de
Riesgos Sanitarios. Cobertura.
Comisionada de Control Analítico y Ampliación de Directora Ejecutiva de Innovación.
Cobertura. 01 55 50 80 52 00 ext 2005
Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext 2001 jgutierrez@cofepris.gob.mx
azuniga@cofepris.gob.mx
1. OBJETIVO
Establecer los lineamientos para la elaboración del informe en la evaluación del

desempeño del Método para la enumeración de E. coli, β-glucuronidasa a 44ºC
utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J NOM-210-
SSA1-2014 en la(s) matrices de alimentos de su competencia.
2. CAMPO DE APLICACIÓN
3
Este informe es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en la implementación y

evaluación del desempeño del Apéndice Normativo J, Método para la enumeración
de E. coli, β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido.
3. EQUIPOS E INSTRUMENTOS
Equipo Descripción: Estado Evidencia del estado.6

Identificación, deseado5
Marca, Modelo
Balanza Granataria d Verificado y Haga clic aquí para escribir texto.

Calibrado
Marco de pesas Haga clic aquí Calibrado Haga clic aquí para escribir texto.
para escribir texto.
Incubadora Haga clic aquí Calificada Haga clic aquí para escribir texto.
44°C ± 1°C para escribir texto.
Incubadora Haga clic aquí Calificada Haga clic aquí para escribir texto.
35°C ± 2°C para escribir texto.
Baño de agua Haga clic aquí Con termómetro Haga clic aquí para escribir texto.
44°C a 47°C para escribir texto. calibrado y/o
verificado a 47°C
Micropipetas 100 a Haga clic aquí Calibrada y Haga clic aquí para escribir texto.
1000 μL calibradas para escribir texto. Verificada
y verificadas
Cuenta colonias Haga clic aquí Mantenimiento No aplica

para escribir texto. vigente
Homogeneizador Haga clic aquí Mantenimiento No aplica

peristáltico, para escribir texto. Vigente
licuadora
Instrumento de Haga clic aquí Calibrado y Haga clic aquí para escribir texto.
medición de para escribir texto. Verificado
temperatura
Reporto Superviso
Firma Firma
Nombre Haga clic aquí para escribir Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
texto.
Fecha Fecha
5 Seguir los criterios de aplicación descritos en http://www.cofepris.gob.mx/TyS/Paginas/Terceros-

Autorizados.aspx
6Hacer referencia al registro, número de informe de calibración/calificación. Anexar copia de las
evidencias al presente informe.
4
4. MATERIALES
Material Marca Lote Certificado de
calidad7
Caja petri de vidrio o desechable, Haga clic aquí para Haga clic Haga clic aquí
diámetro 90 mm x 15mm alto escribir texto. aquí para para escribir texto.
escribir
texto.
Bolsas estériles para Haga clic aquí para Haga clic Haga clic aquí
homogeneizador peristáltico o escribir texto. aquí para para escribir texto.
vasos de licuadora escribir
texto.
Cucharas, tenedores y cuchillos Haga clic aquí para Haga clic Haga clic aquí
para el manejo de la muestra. escribir texto. aquí para para escribir texto.
escribir
texto.
Frascos de 500 mL con tapa de Haga clic aquí para Haga clic Haga clic aquí
rosca esterilizables escribir texto. aquí para para escribir texto.
escribir
texto.
Pipetas estériles de vidrio Haga clic aquí para Haga clic Haga clic aquí
graduadas de diferentes escribir texto. aquí para para escribir texto.
capacidades: 10 mL y 5 mL con escribir
divisiones de 0.5 mL y 1 mL con texto.
divisiones de 0.1mL
Matraces Erlenmeyer con tapón Haga clic aquí para Haga clic Haga clic aquí
de rosca de 250 mL escribir texto. aquí para para escribir texto.
escribir
texto.
Reporto Superviso
Firma Firma
texto.
Fecha Fecha
5. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
7 Cuando se use material esterilizado en el laboratorio, se deberá anexar evidencias de la prueba de

esterilidad realizada al material.
5
Reactivo o Marca Lote y Resultados de Fecha de vida

medio de caducidad desempeño y útil del medio
cultivo fecha de preparado.
evaluación
Medio Triptona Haga clic Haga clic aquí Haga clic aquí para
bilis X- aquí para para escribir escribir texto.
glucurónido escribir texto.
(TBX) texto.
Agua peptonada Haga clic Haga clic aquí Haga clic aquí para
amortiguada aquí para para escribir escribir texto.
escribir texto.
texto.
Reporto Superviso
Firma Firma
texto.
Fecha Fecha
6. CEPAS
Cepas utilizadas ATCC Certificado u hoja de identidad y
aseguramiento de calidad
Escherichia coli Haga clic aquí para Haga clic aquí para escribir texto.
escribir texto.
Reporto Superviso
Firma Firma
texto.
Fecha Fecha
7. MUESTRAS
7.1. Criterio de selección de la muestra
6
Criterio de Tipos de Tipo de Matriz Prioridad para el

selección de la producto producto representativa, laboratorio
muestra recibido en el mayormente
laboratorio. recibida en el
laboratorio
Productos Crudo Reportar en el Ejemplo 2

Cárnicos Procesados informe Carne molida
térmicamente congelada
Congelados Ejemplo
Fermentrados Cárnico crudo
Curado Cárnico
Pate congelado
Pescado y Crudos Reportar en el Reportar en el 3

Productos de la Congelados informe informe
pesca Ejemplo
Pescado Ejemplo
refrigerado Tilapia
Crudos
Congelado
Frutas y Crudos Reportar en el Reportar en el 4

Vegetales Mínimamente informe informe
procesados Ejemplo fruta Ejemplo
cruda No recibe
No recibe
Leche y lácteos Fresco Reportar en el Reportar en el 1

Crudos informe informe
Queso artesanal Ejemplo Ejemplo
Queso Fresco Queso fresco
Otros Productos Para ser llenado Ejemplo Reportar en el 5

por cada No aplica informe
laboratorio Ejemplo
No aplica
Muestra SeleccionadaHaga clic aquí para Cantidad de MuestraHaga clic aquí para
escribir texto. escribir texto.
Descripción de la muestra (cuando aplique: marca, lote, fecha de caducidad, condiciones de

preservación): Haga clic aquí para escribir texto.
Reporto Superviso
Firma Firma
texto.
Fecha Fecha
7
8. DESARROLLO EXPERIMENTAL.
8.1. Preparación del Inóculo. (Ver punto 8.1 del protocolo)
8.1.1. Descripción de la preparación del inóculo:
Escriba en esta sección el protocolo empleado. por ejemplo:
Se inoculó una asada de Escherichia coli en 10 mL de Caldo Infusión

Cerebro Corazón, se incubó a 35 o C +/- 2o C por 22 a 24 h. A partir del
cultivo se realizaron una serie de diluciones con solución salina 0.85%
hasta llegar a la dilución 10-10.
Se colocó 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilución 10 -7 a 10-10 y se
adicionó AST, se incubó a 35o C + 2o C por 22 a 24 h. Se realizó el conteo
en cada dilución y se realizó el registro de los resultados de la
concentración del microorganismo en cada dilución.
Se seleccionó la dilución con cuentas aproximadamente de 12 X 10 4

UFC.
Las diluciones se mantuvieron en refrigeración y no son utilizadas por más

26h.
8.1.2. Preparación del Inóculo. Registro

Fecha de preparación: Fecha de lectura:
Diluciones 10.7 10.8 10.9 Dilución seleccionada
Cuenta de >250 >250 78 102 7 10 10.5

colonias
UFC >250 90 <25 UFC 9X104

Reporto Superviso
Firma Firma
texto.
Fecha Fecha
8
8.2.Resultados de Verificación de la muestra:
Ausencia del Analito
Tamaño de la 25 g Fecha del Análisis:

unidad de
análisis:
Réplica Resultado Valor esperado Cumple (sí / no /

no aplica)
1 Haga clic aquí para ☐Muestras no ☐si

escribir texto. contaminadas: ☐no
< 10 UFC/g o <1 ☐no aplica
UFC/mL
2 Haga clic aquí para ☐Muestras ☐si
naturalmente
escribir texto. ☐no
contaminadas:
☐No aplica
☐no aplica
3 Haga clic aquí para ☐si

escribir texto. ☐no
☐no aplica
Ver Registros:Haga clic aquí para escribir texto.
Reporto Superviso
Firma Firma
texto.
Fecha Fecha
8.3. Resultados
Se prepararon las muestras como se menciona el punto 8.3 del protocolo para
las pruebas de repetibilidad y reproducibilidad, siguiendo el método, se colocan
los resultados encontrados por cada analista.
9
8.3.1. Analista 1
Répli 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
ca
UFC Haga Haga Haga Haga Haga Haga Haga Haga Haga Haga
clic clic clic clic clic clic clic clic clic clic
aquí aquí aquí aquí aquí aquí aquí aquí aquí aquí
para para para para para para para para para para
escri escri escri escri escri escri escri escri escri escri
bir bir bir bir bir bir bir bir bir bir
texto. texto. texto. texto. texto. texto. texto. texto. texto. texto.
Ver Registros:Haga clic aquí para escribir texto.
Reporto Superviso
Firma Firma
Nombre Haga clic aquí para escribir Nombre Haga clic aquí para escribir
texto. texto.
Fecha Fecha
8.3.1.1. Verificación del Inóculo.

Volumen inoculado _1ml_ de la dilución 105 Aproximadamente __90000___UFC,
volumen total inoculado: 250mL
Cuenta de 3600 3600 360 360 30 36 10.5

colonias
UFC >250 36 <25 UFC 90X104

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Nombre Haga clic aquí para Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
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Fecha Fecha
10
8.3.2. Analista 2
Réplic 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
a
UFC Haga Haga Haga Haga Haga Haga Haga Haga Haga Haga
clic clic clic clic clic clic clic clic clic clic
aquí aquí aquí aquí aquí aquí aquí aquí aquí aquí
para para para para para para para para para para
escrib escrib escrib escrib escrib escrib escrib escrib escrib escrib
ir ir ir ir ir ir ir ir ir ir
texto. texto. texto. texto. texto. texto. texto. texto. texto. texto.
Ver Registros: Haga clic aquí para escribir texto.
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texto.
Fecha Fecha
8.3.2.1. Verificación del Inóculo.

Volumen inoculado _1ml_ de la dilución 105 Aproximadamente __90000___UFC,
volumen total inoculado: 250mL
Cuenta de 3600 3600 360 360 30 36 10.5

colonias
UFC >250 36 <25 UFC 90X104

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Nombre Haga clic aquí para Nombre Haga clic aquí para escribir texto.
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Fecha Fecha
Colocar los resultados en la hoja de cálculo del ANEXO.
9. RESULTADOS
11
Resultados Criterio de
Parámetro Dictamen
obtenidos aceptación
Repetibilidad Analista 1 r<3

Haga clic ☐Cumple
aquí para ☐No cumple
escribir texto.
Analista 2
Haga clic
aquí para
escribir texto.
Reproducibilida Haga clic R<3 ☐Cumple

d aquí para ☐No cumple
escribir texto.
Recuperación Analista 1 Entre 90 y 110 log ☐Cumple

Haga clic ☐No cumple
aquí para
escribir
texto.
Analista 2
Haga clic
aquí para
escribir
texto.
Sesgo Analista 1 Diferencia absoluta ❏ Cumple

Haga clic entre lo recuperado e ❏ No cumple
aquí para inoculado < 0.3 log
escribir
texto.
Analista 2
Haga clic
aquí para
escribir
texto.
Incertidumbre Haga clic Haga clic aquí para Haga clic aquí
expandida aquí para escribir texto. para escribir
escribir texto.
texto.
10. Discusión de los resultados
12
Por ejemplo:
Los resultados del análisis estadístico realizado, demuestran que al aplicar el método
se obtienen resultados confiables y reproducibles y por tanto se puede utilizar para el
análisis de los productos descritos en este informe.
11. CONCLUSIÓN
● Al cumplirse todos los criterios de validez se concluye que el Método para la

enumeración de E. coli,β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-
Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar
la clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio), al ser
aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX es adecuado para el
análisis del grupo de alimentos (matriz específica).
● Al NO cumplirse los criterios de validez (indicar cuales no se han cumplido) se

concluye que el Método para la enumeración de E. coli,β-glucuronidasa a 44º C
utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J.
NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el
método del laboratorio), al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de
XXXXXXX NO es adecuado para el análisis del grupo de alimentos cárnicos o para la
matriz específica.
12. BIBLIOGRAFÍA
12.1 Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, PRODUCTOS Y SERVICIOS.
MÉTODOS DE PRUEBA MICROBIOLÓGICOS. DETERMINACIÓN DE
MICROORGANISMOS INDICADORES. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS
PATÓGENOS. APÉNDICE NORMATIVO J. Método para la enumeración de E. coli,
β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido,
12.2 Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba

Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-P-062 2012.
13. ANEXOS
Anexe copia de las evidencias referidas en el informe.
Hoja de cálculos
13
INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-
Glucurónido. APÉNDICE NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014 anexo 1

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Protocolo e Informe Armonizado para la Evaluación del Desempeño del Método para la enumeración de E.

coli Β-Glucuronidasa a 44°C utilizando 5-Bromo-4-Cloro-3-Indol Β-D-Glucurónido

PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA

Participaron en la elaboración de este protocolo.

María Esperanza Rodríguez Parra Karina Guerrero Colina

Odilia Hernández Hernández Anastasio Palacios Marmolejo

Participaron en la revisión de este protocolo.

Evelia Nungaray Jiménez Liliana Cano Ramírez

César Omar Gálvez González M. en C. Juan Carlos Piliado Velasco

Imelda Rocío Guzmán Cervantes Josefina Gutiérrez Ramírez

3.2. Diagrama de Flujo.

Calificada1 44°C ± 1°C, por 24 h mínimo.

Calificada 35°C ± 2°C, por 24 h mínimo. Con termómetro

Temperatura Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura

Homogeneizador Mantenimiento vigente.

5.3.1.Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora de vidrio o aluminio.

6. MEDIOS DE CULTIVO Y MATERIAL BIOLÓGICO DE REFERENCIA

6.1. MEDIOS DE CULTIVO

6.2. CEPAS (MATERIAL BIOLÓGICO)

Tipo de producto Matriz representativa

Frutas y Reportar en el Reportar en el

Para ser llenado Reportar en el Reportar en el

7.5. Verificación de la muestra:

3 Reportar numéricamente indicando 1 para el más prioritario.

8.1. Ajuste del inóculo

Tabla 1 Preparación de muestras

Diluciones Número de Microorganism

25 g o 250 Muestras 120,000 UFC

10. Análisis estadístico

R= Reproducibilidad (por analista)

10.5. Fuentes de incertidumbre

11. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN

Parámetro Criterio de aceptación

Repetibilidad 10 Réplicas un analista,

Parámetro Criterio de aceptación

Reproducibilidad 10 Réplicas por cada analista,

Recuperación 10 Réplicas un analista,

Sesgo 10 réplicas un analista,

Incertidumbre Especificar el mensurando

INFORME PARA LA EVALUACIÓN

APÉNDICE NORMATIVO J, NOM-

Participaron en la elaboración de este informe

Maria Esperanza Rodriguez Parra Odilia Hernández Hernández

Anastasio Palacios Marmolejo César Omar Gálvez González

Karina Guerrero Colina Evelia Nungaray Jiménez

Participaron en la revisión de este informe.

Fabiola Curiel Ayala Geovani Ramírez Hernández

Maria Esperanza Rodriguez Parra Odilia Hernández Hernández

Anastasio Palacios Marmolejo César Omar Gálvez González

Karina Guerrero Colina

Armida Zúñiga Estrada Josefina Gutiérrez Ramírez

Establecer los lineamientos para la elaboración del informe en la evaluación del

Este informe es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en la implementación y

Equipo Descripción: Estado Evidencia del estado.6

Balanza Granataria d Verificado y Haga clic aquí para escribir texto.

Cuenta colonias Haga clic aquí Mantenimiento No aplica

Homogeneizador Haga clic aquí Mantenimiento No aplica

5 Seguir los criterios de aplicación descritos en http://www.cofepris.gob.mx/TyS/Paginas/Terceros-

5. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO

7 Cuando se use material esterilizado en el laboratorio, se deberá anexar evidencias de la prueba de

Reactivo o Marca Lote y Resultados de Fecha de vida

Criterio de Tipos de Tipo de Matriz Prioridad para el

Productos Crudo Reportar en el Ejemplo 2