Materiales que deben llevar los estudiantes: intestino delgado de res u oveja, tijeras para cortar el intestino, filtro de café. Cada grupo trae su material. Reactivos: reactivo de Benedict, reactivo de Barfoed, sacarosa al 5%, maltosa al 5%, lactosa al 5%, tolueno, agua destilada. Vidriería: mortero, beaker de 500 mL y 100 mL, tubos de ensayo, pipetas graduadas de 10 mL y 2 mL, gradilla para tubo de ensayo, termómetro, embudo. Equipos: placa de calentamiento. Prelaboratorio (aspectos a considerar para el informe) ¿Cuál es el objetivo de la práctica? ¿En qué se basan los procesos experimentales? ¿Qué antecedentes hay de las fases experimentales? ¿Qué resultados se espera(n) encontrar en la práctica? ¿Qué valores teóricos existen en la literatura, con los que se pueda comparar los resultados obtenidos? (llevar estos datos el día de la práctica). Procedimiento1 Extracción de las enzimas intestinales Nota: de preferencia, el intestino debe ser de animal recién sacrificado. Se requiere la primera porción (Duodeno) la cual se debe guardar en el congelador hasta el momento de la práctica. • Utilice 10 cm a 15 cm de duodeno. Córtelo a lo largo, con unas tijeras provistas de buen corte. Lave el intestino, córtelo en pedazos muy pequeños y muélalo. • Recoja el molido en un beaker. Agregue 50 mL de agua destilada y dos gotas de tolueno. Haga todo el proceso lo más rápido posible, agitando bien durante 15 minutos. • Filtre, a través del filtro de café. El líquido debe salir claro (contiene las enzimas). Acción enzimática Tome 15 mL del líquido anterior y sométalo a ebullición durante 5 minutos.
1 Basado en: Míguez J. Prácticas de Bioquímica. UPTC. 1997.
• Prepare tres pares de tubos de ensayo. En cada par, coloque 10 mL soluciones
al 5% de lactosa, maltosa y sacarosa, respectivamente. • A un tubo de cada par agregue 2 mL de extracto intestinal sin hervir y al otro 2 mL de enzima hervida. • Coloque todos los tubos a baño maría por 1 hora, manteniendo una temperatura estable de 38 °C. Pasado ese tiempo, haga las pruebas de Benedict y Barfoed en cada tubo. Anote los resultados. Descripción de resultados Se sugiere tener en cuenta los cambios de coloración de las pruebas, a la hora del análisis. Así mismo, comprender el tipo de enzima que está trabajando y su acción enzimática sobre los azúcares problema.