Profesor: PhD.

Gerardo Andrés Caicedo Pineda

09-10. Análisis de orina

Materiales que deben llevar los estudiantes: para cada sesión, 100 mL de orina
de diferentes tipos de personas: hombre delgado, hombre grueso, mujer delgada,
mujer gruesa. Cada grupo trae solo 1 muestra, escogida entre las anteriores, pero
que entre todos sea diferente.
Reactivos: ureasa, Solución de NaOH al 10%, HCl concentrado, solución
saturada de ácido pícrico, reactivo de Molisch, ácido sulfúrico concentrado,
solución de ZnSO4.7H2O al 5%, solución Ba(OH)2 0.3 N, reactivo de Fehling A,
reactivo de Fehling B, solución de cloruro de bario al 10%, ácido nítrico
concentrado, solución de nitrato de plata al 10%, solución molibdato de amonio
al 10%, sulfato de amonio, solución de nitroferricianuro de sodio, hidróxido de
amonio concentrado, solución de nitroprusiato de sodio al 5%, ácido acético
glacial, reactivo de Bencidina, solución de Biuret, solución de sulfato de cobre al
10%, NaOH 1 N, solución de ninhidrina, papel indicador universal, solución
hidróxido de amonio al 0.2%, cloroformo, solución de Lieberman-Buchard,
solución de ZnCl2 en metanol al 30%.
Materiales: tubos de ensayo, tubos de ensayo con tapa, gradilla para tubo de
ensayo, pipetas graduadas de 2 mL, 5 mL y 10 mL, beakers de 50 mL, 100 mL y
500 mL, cápsula de porcelana, portaobjetos, embudo de separación, probeta.
Equipos: placa de calentamiento, centrífuga, microscopio.
Prelaboratorio (aspectos a considerar para el informe)
¿Cuál es el objetivo de la práctica?
¿En qué se basan los procesos experimentales?
¿Qué antecedentes hay de las fases experimentales?
¿Qué resultados se espera(n) encontrar en la práctica?
¿Qué valores teóricos existen en la literatura, con los que se pueda comparar
los resultados obtenidos? (llevar estos datos el día de la práctica).
Procedimiento
Sesión 1

• Propiedades físicas de la orina: Anote y aprecie el color de la orina. Con la

ayuda de un papel indicador universal, tome el pH de la orina.
• Urea: coloque 10 mL de orina en un tubo de ensayo. Agregue una tableta de
ureasa pulverizada, mezcle completamente y, después de 10 minutos, agregue

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10 gotas de NaOH al 10%. Caliente a ebullición, colocando un papel indicador

de pH en los humos que salen del tubo.
• Ácido úrico 1: coloque 5 mL de orina en un tubo de ensayo. Agregue 4 mL de
HCl concentrado, mezcle bien y deje ahí hasta el próximo laboratorio (Sesión
2).
• Creatina: coloque 5 mL de orina en un tubo de ensayo y agregue 1 mL de
solución saturada de ácido pícrico, alcalinizando con NaOH al 10%.
• Carbohidratos: Tome 5 mL de orina en un tubo de ensayo y agregue 5 gotas
de reactivo de Molisch. Agite y agregue 1 mL de H2SO4 concentrado, por la
pared del tubo, sin agitar. Observe la coloración producida en la zona de
contacto de los dos líquidos.
• Presencia de agentes reductores: Tome 5 mL de orina y agregue 2 mL de
ZnSO4.7H2O al 5%, agitando. Adicione 2 mL de Ba(OH)2 0.3 N, agite y filtre.
Agregue al filtrado 1 mL de reactivo de Fehling A y B, mezcle y caliente a
ebullición, con el fin de observar la formación de precipitado rojizo.
• Sulfatos: Coloque en un tubo de ensayo 5 mL de orina, acidifique con HCl,
caliente a ebullición y agregue 1 mL de BaCl2 al 10%. Observe la formación de
precipitado.
• Cloruros: Coloque en un tubo de ensayo 5 mL de orina, acidifique con HNO3
y agregue 1 mL de AgNO3 al 10%. Observe la formación de precipitado.
• Fosfatos: Coloque en un tubo de ensayo 5 mL de orina, acidifique con HNO3
y agregue 2 mL de molibdato de amonio al 10%. Caliente en baño de agua a
65 °C y observe la formación de precipitado.
• Cuerpos cetónicos: Tome en el fondo de un tubo de ensayo 1 cm de cristales
de sulfato de amonio y agregue orina, de manera que cubra los cristales y
agite. Luego, adicione 3 gotas de nitroferricianuro de sodio recién preparado,
agite y agregue una capa de hidróxido de amonio concentrado. Deje la mezcla
en reposo, hasta observar la aparición de color púrpura.
• Acetona: Coloque 2 mL de orina en un tubo de ensayo y 5 gotas de
nitroprusiato de sodio al 5%. Alcalinice la solución con NaOH al 10%. Debe
aparecer un color rojo, si hay acetona. Luego, acidifique con ácido acético
glacial. Si el color no corresponde a acetona, vira a amarillo, pero si hay
acetona, el color rojo se intensifica.
• Hemoglobina: en un tubo de ensayo, tome unos miligramos de reactivo de
bencidina. Agregue 5 mL de orina y observe la aparición de color azul.
• Proteínas y aminoácidos: en 2 tubos de ensayo, tome 3 mL de orina, en cada
uno. A uno de ellos agregue 2 mL de solución de Biuret, 1 mL de sulfato de
cobre al 10% y 1 mL de NaOH 1N. Agite y observe la formación de color violeta
o púrpura. En el segundo, agregue una solución de ninhidrina, agite y caliente
en agua hirviendo, durante 5 minutos. Enfríe y observe la formación de color
rosado o violeta.
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Sesión 2

• Ácido úrico 2: centrifugue la solución guardada en la Sesión 1 y transfiera

los cristales formados a una cápsula de porcelana. Paralelamente, coloque
unos pocos cristales en un portaobjetos y observe al microscopio. A la cápsula,
agregue 3 gotas de HNO3 concentrado y evapore sobre una plancha.
Finalmente, agregue una gota de NH4OH diluido.
• Solución para análisis de esteroides: Coloque en un embudo de separación
50 mL de orina. Agregue 15 mL de cloroformo. Tape y agite, invirtiendo el
embudo varias veces, destapando luego de cada inversión, con el fin de regular
la presión. Luego, deje quieto el embudo, para que se separe la parte
clorofórmica (fondo) de la acuosa (superior). Recolecte la fase clorofórmica y
repita la adición de cloroformo y el proceso. Combine las fases clorofórmicas
y evapórelas sobre una plancha hasta que se tenga un volumen de 10 mL.
Hágalo bajo un extractor o sitio aireado.
• De la solución anterior, tome 3 mL en un tubo de ensayo. Agregue por la pared
del tubo, sin agitar, 1 mL de solución de Lieberman-Buchard, de manera que
este vaya al fondo. Observe la coloración producida en la zona de contacto de
las dos fases.
• Tome, en un segundo tubo, 5 mL de la solución clorofórmica. Agregue 5 mL
de una solución de ZnCl2 en metanol al 30% y caliente en agua hirviendo
durante 10 minutos, hasta observar la coloración producida.
• Examen al microscopio: Tome 10 mL de orina en un tubo de ensayo y
centrifugue durante 5 minutos a 4000 rpm. Decante con cuidado el líquido,
dejando 1 o 2 mL de la solución del fondo. Mezcle completamente el sedimento
y transfiera 1 gota a un portaobjetos y mire al microscopio. Localice diferentes
formas celulares, cristales, epitelios, etc. Dibuje lo observado.
Descripción de resultados
Se sugiere tener en cuenta los siguientes datos: coloraciones o precipitados
formados, qué significan, por qué son importantes en al análisis. ¿La orina debe
tener todos los elementos evaluados? ¿Por qué?

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