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El cuidado materno, sinaptogénesis hipocampo y el desarrollo cognitivo en ratas

Dong Liu, Josie Diorio, Jamie C. Day, Darlene D. Francis y Michael J. Meaney

Desarrollo Laboratorio de Neuroendocrinología, Douglas Centro de Investigación del Hospital, Departamentos

de Psiquiatría y Neurología y Neurocirugía de la Universidad McGill, 6875 Boul. LaSalle, Montreal H4H 1R3,
Canadá
La correspondencia debe dirigirse a MJM (mdmm@musica.mcgill.ca)

Nos informan de que las variaciones en la atención materna en la rata promueven la sinaptogénesis
y spa-cial aprendizaje y la memoria del hipocampo a través de sistemas conocidos para mediar
dependiente de la experiencia de los nervios desarrollar-ment. Por lo tanto, los hijos de madres que
muestran altos niveles de lamer las crías y aseo y arqueado de devolución de enfermería mostró una
mayor expresión de la subunidad del receptor NMDA y el factor neu-rotrophic (BDNF) ARNm derivado
del cerebro, aumenta la inervación colinérgica del hipocampo y mejora el aprendizaje espacial y la
memoria. Un estudio transversal fomentar proporcionan evidencia de una relación directa entre el
comportamiento materno y el desarrollo del hipocampo, aunque no todos los recién nacidos eran
igualmente sensibles a las variaciones en la atención materna.

Cuidado de los padres está pensado para influir en el desarrollo cognitivo en la descendencia humana 1,2, aunque gran
parte de la evidencia permanece cor-relacional 2, y hay poca comprensión de Mech-nismos subyacentes. , Maltrato o
descuido de los padres clínicamente 3,4 o contienda familiar 5 pueden poner en peligro el desarrollo cognitivo. Del
mismo modo, los primates no humanos y roedores muestran profundos efectos de la privación materna en el desarrollo
cognitivo 2. ¿Estos hallazgos necesariamente implican que, en condiciones normales de atención materna activa-mente
contribuye al desarrollo de los sistemas neurales que median en el desarrollo cognitivo, sin embargo, o, simplemente,
que la ausencia de la madre o condiciones de abuso son tan perjudiciales para physiolo-gy que comprometen
inevitablemente el desarrollo cognitivo? Si el cuidado maternal es relevante, entonces ¿cuáles son las características
relevantes de las interacciones madre-hijos y cómo influyen en neur-al desarrollo?

Examinamos estas cuestiones en los estudios de origen natural diferencias individuales en el comportamiento
materno en la rata. Contacto Polilla-er-cachorro en la rata se produce principalmente en el contexto de un combate
nido, en el que la madre se aproxima a la basura, recoge los cachorros debajo de ella, lame y prepara a sus cachorros
y enfermeras sin dejar de lamer y preparar a los cachorros de vez en cuando; La pelea ter-minates cuando la madre
deja el nido 6,7. Las diferencias individuales en dos formas de comportamiento maternal altamente correlacionados,
lamiendo / aseo personal y de enfermería en arco-back (LG-ABN), son Sta-ble durante la primera semana de la
lactancia 8-10, y también a través de múltiples camadas (DDF, A. Mar y MJM, datos no publicados). La ques-ción,
entonces, es si este tipo de variaciones que ocurren naturalmente en el comportamiento maternal podrían estar
relacionados con el desarrollo de las diferencias indi-vidual en el desarrollo cognitivo.
RESULTADOS
Las variaciones en la atención materna
Hemos observado cohortes de ratas lactantes femeninos, anotando el fre-cuencia de la madre de lamer / aseo personal
y de enfermería en arco-back en los diez primeros días después del parto. Las madres que mostraron un alto
frecuencia de lamido / aseo personal y de enfermería en arco-back (ani-mals cuyas puntuaciones en ambos
comportamientos fueron de 1 sd mayor que la media de toda la cohorte) fueron considerados de "alto LG-ABN ',
donde, como las madres que fueron más bajos en cada medida (<1 sd menor que la media) se considera "baja LG-ABN
'. Las diferencias en el comportamiento materno fueron altamente significativas (F 1,14 =
15,6; p <0,0001; Higo. 1a), fueron evidentes durante los primeros 8 días del parto siga-ción, y se produjo a pesar de
que las madres de alta y baja LG-ABN pasaron el mismo tiempo en general en contacto con crías (por-centaje de las
observaciones que implican el contacto madre-cría: alta LG-
ABN = 54  3%; bajo LG-ABN = 52  5%, ns). Debido a que las madres de alta y baja LG-ABN éxito traseros del
mismo número de crías hasta el destete, y la descendencia no difieren en el peso al destete (DDF, A. Mar & MJM,
datos no publicados), parece razonable suponer que la solicitud materna de estas madres se encuentra dentro de un
rango normal de comportamiento maternal.

El desarrollo del hipocampo

El aprendizaje espacial y la memoria se examinó en el adulto fuera de la primavera de las madres de alta y baja LG-
ABN utilizando la prueba del laberinto acuático de Morris 10. Para reducir al mínimo la influencia de cualquier grupo
DIF-rencias potenciales en la emocionalidad, que los animales habituados al laberinto en cinco días consecutivos antes
de la prueba. La descendencia de madres altos LG-ABN mostraron significativamente más cortas latencias (datos
que no se muestra), así como rutas de natación (F 1,34 = 26,07, p <0,0001) para localizar la plataforma de destino que
hizo descendencia de baja LG-ABN
madres (Fig. 2a). Aunque los animales no diferían en el primer día de las pruebas, las diferencias fueron significativas
en el rendimiento appar-ENT para cada uno de los próximos tres días (grupo  interacción día
efecto, F = 4.136 2,93, p <0,05). Cuando la plataforma se hizo vis-ble, no hubo diferencias entre los grupos (todos los
latencias <10 s), suge-gesting que estos efectos no están relacionados con las demandas sensoriomotoras de la
tarea 12. El día 3 de las pruebas, los animales se les dio un solo ensayo "sonda" con la plataforma eliminado. La
descendencia de madres altos LG-ABN observó una elevación significativa Buscar-
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realizado el día 3 de las pruebas revelaron aumentó

significativamente
buscando en el cuadrante objetivo en la descendencia de
edad alta LG-
ABN en comparación con las madres de baja LG-
ABN (F 3,45= 4,2, p <0,01).
Adopción
cruzada
Se examinó la relación entre las variaciones de la madre
el comportamiento y el desarrollo del hipocampo utilizando
una adopción cruzada
estudio en el que las crías de madres bajas LG-ABN fueron
criados por
altos presas LG-ABN, y viceversa. Para evitar efectos en
maternidad
el comportamiento final 15 y mantener el carácter original de
la anfitriona tura
ter, no más de dos crías se fomentó en o desde cualquiera
camada 16. Las observaciones de la conducta materna
mostraron que el compor-
ior de las madres de alta y baja LG-ABN no se vio afectada
y que
Se mantuvieron las diferencias de grupo en el
comportamiento maternal (media
± sem, la frecuencia de lamido materna / aseo personal, altos
cachorros de mayor
madre, 13,5 ± 0,8; bajo-alto, 14,1 ± 2,5; bajo-bajo, de 7,5 ±
Higo. 1. El comportamiento materno de las madres de alta y 1,3;
baja LG-ABN. Media
(± SEM) de frecuencia porcentaje de lamer / aseo en alta y alto-bajo, 6,8 ± 0,7; p <0,01).
baja
Madres LG-ABN (n = 8 por grupo) durante los primeros 10 Como adultos, el aprendizaje espacial y la memoria de
días postpar- los animales nacidos de
tum. presentado en bloques de dos días. Los datos se madres LG-ABN baja, pero criados por altos diques LG-
analizaron como el per- ABN era
porcentaje de observaciones en las que se observaron los indistinguible de la de altas cachorros LG-ABN criados por
animales para ser alto
dedicada a lamer / preparar a un cachorro. Madres de alta y Madres LG-ABN (efecto de grupo, F 3,26 =
baja LG-ABN 9,2, p <0,001;Fig. 3A).
fueron seleccionados sobre la base de las diferencias Ambos grupos difieren significativamente de bajos
individuales en la expresión cachorros criados LG-ABN
de lamer / aseo personal, así como arcos de devolución de
enfermería a partir de datos por las bajas madres LG-ABN en los días 2 y 3 de la
De cada uno de los 8 primeros días después del parto (~ 150 prueba. A diferencia de,
observaciones por ani-
 no hubo efecto de la adopción cruzada la descendencia
biológica de
mal por día; * P <0,0001). altos madres LG-ABN a las represas LG-ABN
bajas (Fig. 3A).Por lo tanto
el aprendizaje espacial y la memoria de la descendencia
biológica de
altos madres LG-ABN no fue afectado por la naturaleza de
la tracción trasera
ing en el cuadrante objetivo (tiempo, F 3,102 = 4,6, p <0,005; nadar- madre ing.
Del mismo modo, la inmunorreactividad sinaptofisina-
ming distancia, F 3,102 = 7,9, p <0,001) en comparación con el off- como en el adulto
descendencia de madres bajas LG-ABN criados por altos
primavera de altas madres LG-ABN (Fig. 2b). diques LG-ABN
El aprendizaje espacial y la memoria en la rata se asocia con el no fue diferente en las medidas de la plasticidad sináptica
hip- del off-
función pocampal 10-13, y la primera semana de vida es un período primavera de altas madres LG-ABN (efecto de
de grupo, F 3,25 = 7,4,
intensa sinaptogénesis del hipocampo. Por lo tanto, hemos p <0,001; Higo. 3b y c). Todos los grupos, incluidos los de
examinado expresión alto a bajo
animales, mostraron niveles más altos de immunore-
sión de dos independientes sináptica marcadores, sinaptofisina y sinaptofisina similar
molécula de adhesión celular neural (N-CAM 14) en transferencias la actividad en comparación con las crías de madres bajas
de Western con LG-ABN
muestras de hipocampo preparados a partir de día 18 o día 90 crías criados por madres bajas LG-ABN.
madres de alta y baja LG-ABN. Había grupo significativo
efectos tanto para sinaptofisina (F 1,33 = 26,3, p <0,0001) y NCAM El sistema colinérgico septohippocampal
(F 1,36 = 32,2, p <0,0001) inmunoreactividad en tejido del Considerando la importancia de la choliner-
hipocampo septohippocampal
de la descendencia de alta en comparación con las madres de baja GIC sistema para el aprendizaje espacial y la
LG-ABN memoria 11,17,18, se examinaron
(Fig. 2c y d). Estos hallazgos sugieren ya sea aumento de los la liberación de acetilcolina (ACh) en el hipocampo dorsal
niveles de usando
sinaptogénesis o aumento de la supervivencia sináptica en la microdiálisis en animales conscientes bajo basal y K + -
descendencia de stimu-
altos madres LG-ABN.
Tabla de volumen y densidad de campo de las células 1. neurona en
A pesar de la magnitud de la diversos campos del hipocampo.
las diferencias en Plastica-
sináptica región del
dad, no hubo diferencias Densidad (a) Neuron. hipocampo
en Dinamarca neuronas del
hipocampo día 8 DG CA1 CA3
582070 ± 414236 ±
sidad en cualquiera de los días LG-alta ABN 730113 ± 27494 34339 11891
8 o 90 días 544823 ± 367547 ±
(Tabla 1a), ni había di- Bajo LG-ABN 682133 ± 34497 27631 19917
ferencias en en volumen del
hipocampo día 90
365740 ± 186698 ±
ume (Tabla 1b). LG-alta ABN 545718 ± 6587 34256 7865
 El cuidado materno en la 339209 ± 183760 ±
primera infancia Bajo LG-ABN 520833 ± 36464 24617 16459
se asoció con la diferencia
cias en el aprendizaje espacial (B) el volumen de la célula de región del
y campo. hipocampo
memoria que soportó incluso día 8 DG CA1 CA3
en fases posteriores del
envejecimiento
(Fig. 2b). Por lo tanto, a los 24 LG-alta ABN 1,51 ± 0,06 1,43 ± 0,07 1,47 ± 0,06
meses
Bajo LG-ABN 1,45 ± 0,09 1,38 ± 0,09 1,42 ± 0,10
de la edad, las crías de alta
LG-ABN y baja LG-ABN día 90
animales difieren en su
persona LG-alta ABN 2,45 ± 0,10 2,03 ± 0,08 2,44 ± 0,14
rendimiento en el agua de
Morris Bajo LG-ABN 2,22 ± 0,14 1,92 ± 0,10 2.14 ± 0.13
laberinto (F 1,15 =
12,3, p<0,005). La media (± SEM) estima por mm 3 (n = 4 por grupo).
Los resultados de un ensayo de
sonda
800 Nature Neuroscience • Volumen 3 No. 8 • Agosto el año 2000
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condiciones relacionadas. Hubo significativamente más altos niveles de ACh en dializados bajo tanto basal y
K + estimuladas condiciones en el
alta descendencia LG-ABN (F 1,17 = 8,9, p <0,01; Fig. 4a). Para abordar la cuestión de la inervación colinérgica, que
analizaron los niveles de
colina acetiltransferasa (ChAT) la actividad en dos sitios principales de proyección choliner-GIC en el cerebro anterior,
el hipocampo y la corteza prefrontal. Actividad ChAT fue significativamente mayor en el hipocampo, pero no en la
corteza prefrontal de la descendencia adulta de madres LG-ABN altas (grupo  interacción región, F 1,18 =
3,10, p <0,05; Higo. 4b). También se encontró una mayor acetilcolinesterasa tinción en la descendencia de los altos
madres LG / ABN, que concuerda con la idea de una mayor inervación colinérgica del hipocampo en estos
animales (Fig. 4c).
Hipocampo BDNF y la expresión del receptor NMDA
Supervivencia sináptica colinérgica en el hipocampo ha sido Asso-ciados con varios factores neurotróficos, incluyendo
factor de crecimiento nervioso (NGF), factor de crecimiento nervioso derivado del cerebro (BDNF) y la neurotrofina-
3 (NT-3) 19-21. Se utilizó lahibridación in situ con oligonucleótidos dirigidos contra los ARNm para estos factores
neu-rotrophic y encontramos una mayor expresión de mRNA del BDNF en el hipocampo dorsal de la jornada de 8
cachorros de alta com-
comparado con bajos madres LG-ABN (figura 5;. F 1,9 = 8,0, p <0,02). No hubo diferencias en NGF o NT-3 niveles
de mRNA, ni
hubo diferencias en los niveles de ARNm de BDNF a los 18 o 90 días de edad (datos no mostrados).
La activación de los receptores de glutamato NMDA, en particular la recep-tor, aumenta la expresión del gen
BDNF 22. La hibridación in situ perno-s mostró niveles de ARNm que codifican para el aumento de NR2A
(F 1,11 = 5,7, p <0,05) y NR2B (F 1,11 = 7,0, p <0,05) subunidades del receptor de NMDA en el hipocampo de día 8
descendencia de
alta en comparación con las madres LG-ABN bajas (Fig. 6B y C). Las diferencias se mantuvieron en la edad adulta,
tanto para el NR2A
(F 1,17 = 29,7, p <0,0001) y NR2B (F 1,17 = 7,4, p <0,02) subunidades (Fig. 6b y c), y en los adultos también fueron
altamente signif-
diferencias rencias en NR1 (F 1,17 = 6,8, p <0,02) la expresión del ARNm de la subunidad (Fig. 6a). Hipocampo
NMDA ([3 H] MK801) capacidad de unión recep-tor se incrementó tanto en el día 8 y el adulto

descendientes de madres altos LG-ABN (Fig. 6d), lo que refleja la importancia fun-cional de estos cambios en la
expresión génica. Estos resultados sugieren que el comportamiento maternal regula la expresión de NMDA recep-tor
en la descendencia.
Los efectos de la atención materna en la expresión del receptor de NMDA son específicos de la zona. En los días 8
animales, no hubo diferencias en la expresión de la subunidad del receptor NMDA en el núcleo central o basolat-ral
de la amígdala. Aunque no hubo diferencias en los niveles de NR1 o ARNm NR2B en adultos, NR2A ARNm expre-
sión fue significativamente mayor en el núcleo central de la amyg-dala (p <0,05) en la descendencia de bajos madres
LG-ABN, sin efecto en el núcleo basolateral.
En vista de la ausencia de un efecto adopción cruzada en la descendencia bio-lógica de altos madres LG-ABN, nos
preguntamos

Un segundo
Higo. 2. espacial de aprendizaje / memoria y la
sinaptogénesis en el hipocampo
los hijos adultos de alto en comparación con las madres
de baja LG-ABN. (A) Mean
(± SEM) de latencia (s) para localizar y subir a la
plataforma sumergida
más de cinco días consecutivos de la prueba en la
descendencia adulta de alta y
madres bajas LG-ABN. Los datos para cada día de la
prueba se derivan de
tres ensayos separados para un valor promedio se
calculó para cada animal.
El análisis estadístico de los grupos  día de la
prueba (n = 20 animales por grupo, do re
elaborado a partir del 5 de altura y 5 camadas bajas LG-
ABN) mostraron que el grupo diferente
cias son significativos para los días 2-4 (** p <0,001,
* p <0,05), pero no para la
primero o el último día de pruebas. (B) paneles de la
izquierda muestran los resultados de la sonda
ensayo (target = cuadrante 2), tanto para el tiempo y la
distancia. Los paneles de la derecha
representar los resultados del ensayo de laberinto de
baño y de la sonda (como se describe anteriormente)
durante 24 meses de edad crías de animales de alta y
baja LG-ABN (*p <0,05).
(C, d) análisis de inmunotransferencia Western de
sinaptofisina (n = 9-11 grupo;
c) o de adhesión celular neural (NCAM; norte = 10 por
grupo; d) -como immunore-
actividad de homogenados del hipocampo preparados a
partir de off- individuo
primavera de madres altos o bajos LG-ABN a los 18 o 90
días de edad. Parte superior,
blot representativo (25  g de proteína por carril) se
sondeó con sinaptofisina
o anticuerpo NCAM para las muestras de día 18 o el día
90-ani- individuo
mals. El anticuerpo reconoce tanto NCAM los 120 y 140
isoformas de
NCAM. Ovoalbúmina o actina tinción se presenta como
un control positivo
para los errores de carga. Parte inferior, media (± SEM)
de la densidad óptica unidad de MEASURE
Sures en todos los grupos (n = 8 por grupo, con animales
procedentes de 4 de alto
y 4 camadas LG-ABN bajos). Análisis post-hoc mostró
significativa
Efectos de grupo (* p <0,01) en cada edad.

Nature Neuroscience • Volumen 3 No. 8 • Agosto el año 2000 801

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Higo. 3. adopción cruzada invierte diferencias en el aprendizaje espacial y la sinaptogénesis del hipocampo
en la descendencia de baja, pero no altas madres LG-ABN. (A) La media (± SEM) de latencia (s) para
localizar y subir a la plataforma sumergida más de cinco días consecutivos de prueba en el adulto de crías
de bajos madres LG-ABN y criados ya sea por baja (bajo-bajo) o alto (bajo-alto) presas LG-ABN en
comparación con las crías de madres altos LG-ABN criados por madres LG-ABN alto (alto-alto) o madres
de baja LG-ABN (alto-bajo). El análisis estadístico de los grupos  día de la prueba (n = 7-8 animales por
grupo, extraídos de 5 litros de cada condición) mostró significativa (* p <0,01) efectos de grupo en los días
2 y 3 de la prueba. (B) transferencias Western representativos para sinaptofisina inmunoreactividad similar
en muestras de tejido del hipocampo a partir del día 90 de alto individuo alto, alto-bajo, bajo-bajo y bajo-
alto animales. Tinción de ovoalbúmina se presenta como un control positivo para los errores de
carga. (C) La media (± SEM) unidad mide la densidad óptica a través de grupos (n = 6-8 por grupo,
elaborado a partir de 4 camadas de cada condición). Análisis post-hoc mostró que la inmunorreactividad
sinaptofisina-como fue significativamente (* p <0,01) menor en el grupo bajo-bajo en comparación con
cualquiera de los grupos restantes.

Si las diferencias en la expresión de la subunidad del receptor de NMDA podrían ser evidente poco después del
nacimiento (día 0,5). No se encontraron diferencias en el ARNm para la subunidad NR1 (datos no mostrados).
NR2B expresión no era detectable en los animales de esta edad. Cómo siempre, hubo un aumento muy significativo
de la expresión de ARNm NR2A (F 1,15 = 12,3, p <0,005) en las crías recién nacido de madres altos LG-ABN en
comparación con los nacidos a menor
Hembras LG-ABN.

D ISCUSIÓN
Estos hallazgos sugieren que las variaciones en el comportamiento materno están relacionados con la expresión
diferencial de genes que codifican subunidades del receptor de NMDA, lo que mejora la sensibilidad del hipocampo
al glutamato, y aumentar la expresión del gen BDNF y el desarrollo sináptica así hip-pocampal. En la corteza visual y
somatosensorial, la experiencia que dependen de modificaciones de desa-rrollo sináptica requieren la activación del
receptor de NMDA 23-25, y existe considerable evidencia de procesos comunes de plasma sináptico

ticidad en el hipocampo y la corteza sensorial 26. Por lo tanto, las variaciones en la atención materna pueden ser
considerados para causar niveles diferenciales de la experiencia sensorial para el cachorro en desarrollo, lo que resulta
en niveles alterados de desarrollo sináptico del hipocampo. Materna lamen-ción / aseo personal es una importante
fuente de estimulación táctil para el desarrollo de las crías, que afecta el crecimiento somático y desa-
rrollo 27,28 neuronal. La privación materna amortigua los niveles de liberación de la hormona del crecimiento y aumenta
los de los altamente catabólicas Glu-cocorticoids suprarrenales 27-29, las cuales, a su vez, reducen la expresión de
BDNF 30. Estos efectos de la separación materna son bloqueados por artificial
'caricias' de los cachorros privados con cepillos - una manipulación que imita la estimulación táctil derivado de la
madre lame-ción / aseo personal. Del mismo modo, la postura de enfermería en arco-posterior de la madre se asocia
con un aumento de la estimulación táctil del pezón derivado de conmutación por cachorros, una actividad asociada con
el aumento de volumen del hipocampo 6.
El estudio de corte fomento proporciona evidencia de una rela-rela- directa entre la atención materna y el desarrollo
del hipocampo.

Higo. 4. Las crías de las madres de adultos de alta y baja LG-ABN difieren en la inervación colinérgica del
hipocampo. (A) La media (± SEM) los niveles de acetilcolina (ACh) en los dializados recogidos en el
hipocampo dorsal de la descendencia de las madres de adultos altas o bajas LG-ABN (n = 9-10 por grupo
con los animales dibujados a partir de 4 de alto y 4 camadas bajas LG-ABN) bajo basal, pre-estimulación
condiciones (P) o después de la estimulación de K +. post-hoc de análisis estadísticos mostraron un efecto
significativo grupo en diversos puntos temporales (* p <0,05). (B) La media (± SEM) nivel de
acetiltransferasa actividad de colina (ChAT) en fracciones synapto-Somal preparadas a partir del
hipocampo o tejido de la corteza prefrontal de las madres adultas altas o bajas LG (n = 10 por grupo con
animales procedentes de 4 de alto y 4 de baja camadas LG-ABN; * p <0,05). (C) coronal secciones
representativas mediante el hipocampo dorsal que muestran la tinción de acetilcolinesterasa en las crías
de las madres de adultos altas o bajas LG / ABN. Tenga en cuenta que aunque la tinción es evidente en
todo el hipocampo en ambas secciones, la intensidad es sustancialmente mayor en el alto descendencia
LG / ABN.
802 Nature Neuroscience • Volumen 3 No. 8 • Agosto el año 2000
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Higo. 5. expresión génica derivado del cerebro factor neurotrófico (BDNF). (A) autorradiogramas
representativas de hibridación in situ examinar la expresión de mRNA del BDNF en el hipocampo dorsal
en el día 8 fuera de la primavera de las madres altas o bajas LG-ABN. (B)media (± SEM) niveles de
expresión de mRNA del BDNF utilizando medidas ópticas de densidad de autoradi-icionales en el giro
dentado (DG), así como las regiones CA1 y CA3 del cuerno de Ammon en el hipocampo dorsal de día 8
cachorros de alta o LG bajas madres (n = 4-6 por grupo, elaborado a partir de 3 de alto y 3 camadas bajas
LG-ABN; * p <0,05). No hubo diferencias entre los grupos en el tamaño del cuerpo celular o en la densidad
de células (datos no presentados). Tenga en cuenta que el efecto de cuidado materno en los niveles de
mRNA del BDNF no se debió a diferencias en la densidad de neuronas del hipocampo (Tabla 1).

El aprendizaje espacial y el desarrollo sináptica del hipocampo en la descendencia biológica de bajos presas LG-ABN
criados por madres altos LG-ABN eran indistinguibles de los de fuera de la primavera normal de altas madres LG-
ABN. Por lo tanto, las variaciones en la atención materna pueden influir directamente en el desarrollo del
hipocampo. Estos find-Ings son consistentes con los resultados en la BALBc ratón, una cepa que normalmente muestra
deteriorado drásticamente hipocampo desarrollar-ment y los déficits de aprendizaje espacial en comparación con los
ratones C57. Como adultos, cachorros criados por madres BALBc C57 muestran una mejora en el aprendizaje-spa cial,
y las madres C57 muestran un aumento de lamer / aseo personal y de enfermería en arco-back en comparación con las
presas BALBc 31. Cómo siempre, sí parece haber limitaciones, como la descendencia biológica de altas hembras LG-
ABN criados por madres bajas LG-ABN resem purgado del la descendencia normal de altas madres LG-ABN. De
nuevo la analogía con los ratones BALBc y C57 es instructiva. A pesar de que
Ratones BALBc que se crían por las madres se parecen a los ratones C57 C57 en las medidas de aprendizaje espacial
y la memoria, los cachorros criados por madres C57 BALBc no se ven afectadas 31.
Los mecanismos subyacentes a estas diferencias en la sensibilidad a la influencia de la atención materna no están
claras. Sin embargo, si de hecho las diferencias en la expresión del receptor de NMDA son esenciales para el efecto
de la estimulación táctil materna en el desarrollo sináptica del hipocampo, a continuación, los datos de las subunidades
del receptor NMDA en las crías recién nacidas podrían explicar la sensibilidad de los animales nacidos a menor
Hembras LG-ABN. El desarrollo del hipocampo en la escasa descendencia LG-ABN se verá reforzada por el aumento
de la estimulación táctil-mento asociado con un alto madre LG-ABN, a causa de

El día postnatal 8 Adulto

un

segundo
Bmax (pmol / mg) Bmax (pmol / mg)

aumento de la expresión NR2A y por lo tanto una mayor sensibilidad a la estimulación del medio-ENVI. La
descendencia de las madres altos LG-ABN muestran una mayor expresión NR2A al nacer, y esto podría entonces
reducir su 'confianza' en la estimulación materna - por lo menos en lo que respecta al desarrollo del hipocampo. Este
hypothe-sis es ciertamente especulativa, pero sí nos permite formular una pregunta cinating-fas: ¿por qué es más
importante cuidado de sus padres para ciertos individuos que para otros?

El aumento de la expresión de las subunidades del receptor NMDA aparentes en la descendencia de los altos madres
LG-ABN en la vida postnatal temprana puede servir como un mecanismo fundamental la mediación del efecto de la
atención materna en el desarrollo del hipocampo. Alter-nativa, estas diferencias podrían reflejar diferentes receptores
de Lev-els de desarrollo sináptico. A pesar de este problema que queda por resolver, las pruebas existentes de diversos
modelos de desarrollo corti-cal sugiere un papel causal para tales diferencias en
Los niveles del receptor NMDA en la mediación de los efectos de las variaciones que se producen de forma natural en
la atención materna en el desarrollo synap-tic del hipocampo 23-25. La descendencia de madres altos LG-ABN
mostraron aumento de NR2A y NR2B expresión así como el aumento del hipocampo receptor NMDA de unión en el
día postnatal 8. La cinética de los receptores NMDA compuestos por NR1 / NR2A subunidades difieren de los
compuestos por
Subunidades NR1 / NR2B, siendo los receptores que contienen NR2A

El día
postnatal 8 Adulto

do

re
Bmax (pmol / Bmax (pmol /
mg) mg)
Higo. 6. la expresión del gen de la subunidad del receptor de NMDA. (Ac) media (± SEM) unidad
mide la densidad óptica de los autorradiogramas de en el lugar hibridación estudios de la
NR1 (a), NR2A (b) y NR2B (c) subunidades del receptor NMDA en día 8 (n= 6-7 por grupo) y
adulto (día 100; n = 9-10 por grupo) descendencia de madres de alta y baja LG-ABN. Los datos
se presentan para el giro dentado (DG), así como la CA1 y CA3 regiones del cuerno de Ammon
en el hipocampo dorsal (* p <0,01). (D) Representante parcelas Scatchard de [3H] ensayos de
unión al receptor MK-801 con muestras de hipocampo de los días 8 o hijos adultos de las madres
de alta y baja LG-ABN. El análisis estadístico (n = 3 animales por grupo) revelaron grupo
significativo de los valores B max,tanto para adultos (alta LG-ABN, 11,7 ± 0,6; baja LG-ABN, 5,1 ±
0,4 pmol por mg; p <0,001) y el día 8 ( alta LG-ABN, 8,7 ± 0,4; baja LG-ABN, 4,0 ± 0,5 pmol por
mg; p <0,001) animales. No hubo diferencias entre los grupos en los valores de K d (rango, 0,7 a
1,1 nM).
Nature Neuroscience • Volumen 3 No. 8 • Agosto el año 2000 803
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Higo. La expresión del gen de la subunidad del receptor de NMDA en 7. newborn madres de alta y baja
LG-ABN. Arriba, microfotografía representativa de autorradiogramas de hibridación in situ examinar la
expresión NR2A mRNA en el hipocampo dorsal en el día 0,5 hijos de madres altos o bajos LG-ABN. Parte
inferior, media (± SEM) de la unidad de densidad óptica MEA-Sures de autorradiogramas de en
los estudios de hibridación in situ de la subunidad NR2A del receptor NMDA en día 0,5 (n = 8-9 por grupo)
descendientes de madres de alta y baja LG-ABN, para las regiones CA1 y CA3 del asta de Ammon en el
hipocampo dorsal (* p <0,01).

la forma madura. Apropiadas estimulación sensorial (luz) stim-ulates aumento de la expresión NR2A en la corteza
visual 32. Sugerimos que la expresión del hipocampo NR2A aumento en los hijos de madres altos LG-ABN puede
derivar de una mayor materna, estimulación táctil. La estimulación táctil aumenta la expresión del receptor de NMDA
en la corteza barril de ratones 33. Estos resultados también sugieren que los efectos del cuidado materno en la
sinaptogénesis hipocampo están mediadas a través sys-sistemas implicados en el dependiente de la experiencia de
desarrollo de varios sistemas neurales.
Variaciones que ocurren naturalmente en lamer / novio-ción materna y arqueado de devolución de enfermería se
asociaron con el desarrollo de unificación de la inervación colinérgica al hipocampo, así como las diferencias en la
expresión de ARNm de las subunidades del receptor NMDA. En los adultos, hubo una mayor expresión del ARNm
NR1 del hipocampo. Estos resultados proporcionan un mecanismo para las diferencias observadas en el aprendizaje
espacial y la memoria en animales adultos. En la rata adulta, el aprendizaje espacial y la memoria depende de la
integridad del hipocampo; lesiones del hipocampo producen profundas deficiencias de aprendizaje espacial 10-13. Por
otra parte, el aprendizaje espacial se ve afectada por los receptores colinérgicos o NMDA bloque-ade11,17,18,34-36 o en
ratones que carecen de la subunidad NR1 37. Del mismo modo, hipocampo potenciación a largo plazo, un modelo
neuronal potencial para el aprendizaje y la memoria 36, se ve reforzada por tratamientos que aumentan la liberación de
acetilcolina38 o por la sobreexpresión de las subunidades del receptor de NMDA en el hipocampo 39. Tomados en
conjunto, estos resultados sugieren que la atención materna aumenta hipocampo
Los niveles del receptor de NMDA, lo que resulta en la expresión de BDNF elevada y el aumento de la sinaptogénesis
del hipocampo, y de este modo el aprendizaje espacial mejorado en la edad adulta. Estos resultados también son
consistentes con la idea de que el comportamiento maternal estimula activamente la sinaptogénesis hip-pocampal en
la descendencia a través de sistemas que median el desarrollo neuronal dependiente de la experiencia.
M ÉTODOS
Animales. Los animales utilizados en todos los estudios se derivaron de Long-Evans ratas encapuchadas obtenidos de
Charles River Canadá (St. Constant, Québec) y criados en nuestras instalaciones. No más de dos animales por grupo
fueron extraídas de una sola camada. Los cachorros fueron destetados en el día postnatal 22 y alojados en el mismo
sexo, mismos grupos camada de 3-4 animales por jaula hasta el día 45, y 2 animales por jaula a partir de entonces hasta
el momento del ensayo (~ 100 días). Las madres y sus crías fueron alojados en 46  18  30 cm jaulas de plexiglás que
permitían una visión clara de toda la actividad dentro de la jaula. Los alimentos y el agua se
proporcionaron ad libitum. La colonia era-principal contenida en un 12:12 luz: oscuridad cronograma con las luces
encendidas a las 08:00 h. Todos los procedi-mientos se realizaron de acuerdo con las directrices del Consejo
Canadiense de Protección de los Animales y aprobados por el Comité de Cuidado de Animales de la Universidad
McGill.
Observaciones de comportamiento. El comportamiento materno se anotó 8-10 durante seis períodos de observación
de 100 minutos al día durante los primeros 10 días después del parto (0600, 0900, 1200, 1500, 1800 y 2100 h), durante
la cual se obtuvo el comportamiento de cada polilla-er cada 4 minutos. Los datos se analizaron como el porcentaje de
observaciones en el que los animales involucrados en la conducta objetivo. Los comportamientos de seguimiento que
muestra 8 fueron marcados: madre de los cachorros, lamiendo madre / aseo cualquier cachorro, cachorros de la madre
de enfermería en una postura arqueada espalda, en una postura 'manta' en el que la madre se pone sobre las crías, o en
una postura pasiva en el que la madre se ha quedado ya sea en su parte posterior o lateral, mientras que la enfermera
cachorros.
Para definir las poblaciones de alta y baja LG-ABN, se observó el comportamiento mater-nal en una cohorte de 32
madres e ideamos el grupo de la media y la desviación estándar para cada comportamiento durante los primeros 10
días de vida. Los altos madres LG-ABN se definieron como mujeres cuyas puntuaciones de frecuencia tanto para lamer
/ aseo personal y de enfermería arqueada espalda eran más de una DE por encima de la media. Madres bajas LG-ABN
se definieron como mujeres cuyas puntuaciones de frecuencia tanto para lamer / aseo personal y de enfermería arqueada
espalda eran más de una DE por debajo de la media. Como se informó anteriormente 9,10, lamen-ción / aseo personal
están altamente correlacionados (r> 0,90).
En el estudio de adopción cruzada, presas altas o bajas LG-ABN se aparearon y se dejan de dar a luz. Dentro de las
12 horas siguientes al nacimiento, presas fueron retirados de la jaula, y 2 animales por camada fueron cruzadas fos-
cados. El procedimiento se llevó menos de 15 minutos. Las crías cruzadas fomentado, junto con dos crías nativas, se
marcaron con un marcador semi-perma-nente hasta el día postnatal diez y por las diferencias individuales en su pelaje
a partir de entonces. Los cachorros fueron marcados en el momento de adopción cruzada y de nuevo en el quinto día.
Los grupos críticos de interés son animales nacidos de bajo LG-polilla ABN-res, y se fomentan a las madres altos
LG-ABN (denominados bajo-alto) y el grupo recíproco de máximos y mínimos. Para el control de los efectos de la
adopción cruzada con otra madre, los hijos de las presas altas o bajas LG-ABN se fos-cados con otras madres LG-
ABN altas o bajas, respectivamente (grupos de alto de alto y bajo-bajo LG-ABN ). A continuación, se observó el
comportamiento materno de cada presa para los siguientes ocho días como se describió anteriormente.
El aprendizaje espacial y la memoria. Aprendizaje espacial y la memoria fue el examen-INED mediante la tarea del
laberinto acuático de Morris 10,11,18. Se requieren los animales para encontrar una plataforma sumergida (2 cm) en
una piscina (1,6 m de diámetro) de agua opaca utilizando un entorno espacial muy distales proporcionados en la sala
de pruebas 10 . Los ani-mals recibieron 15 ensayos, 3 ensayos por día, durante cinco días consecutivos con la plataforma
sumergida. Después de las pruebas, todos los animales se realizaron en el sexto día usando una versión con señales
visuales de la tarea 10 con la plataforma elevada 2 cm por encima de la superficie del agua para asegurarse de que las
alteraciones no estaban relacionadas con defectos sensoriomotoras 10,18 .
Morfología. Estimaciones de la densidad de neuronas se obtuvieron utilizando un procedimiento seg-namiento en
serie 47 con 50 secciones del cerebro M preparados a partir de muestras de tejidos perfundidos. Se cortó una serie de
secciones a través de la dorsal de hip-pocampus, y cada quinta sección se tiñó y se utiliza para contar con un analizador
de imágenes MCID (MCID, St. Catherine, Ontario) utilizando el método de disección óptica imparcial 40 .
Estudios de acetilcolina. Corteza frontal disecado y hipocampos de ratas adultas individuales se homogeneizaron y
se incubaron durante 15 min en tampón que contenía [ 14 C] acetil coenzima A, como se ha descrito previamente 41 . Los
datos se expresan como media ± SEM de ACh nmol por mg de proteína por h.
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Se determinó el contenido de proteína como se ha descrito por Bradford 42 .

Para in vivo estudios de microdiálisis, las ratas se implantaron estereotáxicamente con una cánula guía en el
hipocampo dorsal (0,8 mm posterior al bregma, 2,5 mm lateral a la línea media, 2,0 mm ventral a la duramadre) y
dejaron recuperar durante 4-6 D antes en vivo diálisis. Doce a dieciséis horas antes de la prueba-ción, CMA-10 sondas
(0,5 mm de diámetro exterior, longitud 4 mm, CMA Micro-diálisis, Sobna, Suecia) fueron implantados a través de la
cánula guía. Cada animal se sometió a diálisis una vez. En el día de los experimentos de diálisis, las ratas se colocaron
individualmente en jaulas ovales sin párpados durante 1 h antes de ser conectado a una bomba Harvard Microliter
jeringa (Harvard Apparatus, Holliston, Massa-chusetts) y se dializaron durante un período de lavado de 1 h con un
CSF artificial que contenía NaCl 125 mM, KCl 3 mM, 1,3 mM CaCl 2 , 1,0 mM MgCl 2 , 23 mM NaHCO 3 y 0,1 M de
bromuro de neostigmina (Sigma, St. Louis, Mis-souri) en tampón de fosfato acuoso (1 mM, pH 7,4 ), a razón de 5 l
por minuto. Para el K + estimulación, 100 mM K + se utilizó, y NaCl concentra-ción se redujo a 27,5 mM para mantener
equi-osmolaridad. Se recogieron fracciones de dializado de diez minutos, congelados y almacenados a -80 ° C hasta
su análisis.
La acetilcolina se ensayó por HPLC con detección electroquímica en combinación con un reactor de enzima. Las
muestras se separaron en una columna de fase inversa pretratado con sulfato de laurilo. La acetil-colina y colina
separados pasan entonces a través de un reactor que contiene la enzima acetilcolinesterasa y colina oxidasa
covalentemente unido a glu-taraldehyde-activa Lichrosorb NH2 10 m (Capital HPLC Ltd., West Lothian, Reino
Unido) y se hace reaccionar para dar un rendimiento estequiométrico de peróxido de hidrógeno. El peróxido de
hidrógeno se detectó electroquímicamente por un conjunto de electrodos plat-inum a 500 mV (frente a Ag / AgCl,
Antec Inc., Fremont, California). En la fase móvil, 0,2 M de fosfato de potasio acuosa tampón de pH 8,0, que contiene
hidróxido de tetrametilamonio 1 mM, fue entregado por una bomba (Shimadzu LC-10AD, Shimadzu Scientific
INSTRU-mentos Inc., Columbia, Maryland) a 0,35-0,45 ml por min .
Para el estudio de la acetilcolinesterasa, las ratas fueron profundamente anestesiados con pentobarbital y se
perfundieron a través de la aorta ascendente con 300 ml de solución salina seguido de 600 ml 4% de paraformaldehído
en tampón fosfato 0,1 M (pH 7,4). Los cerebros se diseccionaron, fijaron posteriormente y cryoprotected en tamponada
con fosfato 30% de sacarosa durante 24 h. Veinticinco m secciones fueron teñidas para la
acetilcolinesterasa 43 . Brevemente, los portaobjetos se dejaron equilibrar a 4ºC antes de incubar a temperatura
ambiente durante 3 horas en una solución de sulfato de cobre (0,05%), glicina (0,075%), ethopromazine (0,0072%) y
yoduro de acetiltiocolina (0,12%) en acetato de sodio ( M) tampón de 0,1, se ajustó a pH 5,0. Las secciones fueron
enjuagadas en agua destilada y se trataron durante 6 minutos en una solución de revelado de sulfuro de sodio (0,38%,
pH 7,8). La tinción fue finalmente se intensificó en una solución de nitrato de plata (1%) durante 2 min, y las rodajas
se enjuagaron en agua destilada, y coverslipped.

Western Blot. Después de una rápida decapitación, los cerebros se retiraron y se coloca en hielo. Los hipocampos se
diseccionaron, se congelaron en hielo seco y almacenados a -80 ° C. Muestras de hipocampo se prepararon usando
Ficoll método de centrifugación en gradiente. Se tomaron alícuotas de los homogenados para determinar los niveles
de proteínas sinápticas en todo el hipocampo 42 . Cantidades iguales de proteínas (25 mg) se separaron mediante SDS-
tricina electroforesis en gel de gradiente de 10-20% 44 y a inmunotransferencia con anticuerpos primarios específicos
(Sigma). Las bandas inmunorreactivas se visualizaron mediante quimioluminiscencia mejorada (ECL, Amersham,
Toronto, Ontario). Lecturas de densidad óptica para la sinaptofisina (39 kDa) o NCAM (120 y 140 kDa) bandas se
determinaron utilizando un sistema de Densit-geo- asistido por ordenador (MCID Systems). Para todos los estudios,
manchas individuales se obtuvieron a partir de muestras de un animal.
En situ de hibridación. Se sacrificaron los animales en condiciones de estado de reposo directamente desde la jaula
de alojamiento. In situ La hibridación se realizaron como se describe 8,9 utilizando 3 'final [ 35 S] secuencias de
oligonucleótidos marcadas con ddATP para NR1 45 , NR2A 45 , NR2B45 , BDNF 46 y NT-3 47 (Sheldon Centro de
Biotecnología, Montreal, Canadá). El NGF in situ estudio se realizó utilizando un [ 35 S] UTP ribosonda marcada
con 48 preparado a partir de un clon de NGF de rata producido por sub-clonación de un fragmento de 238 pb (pb 532
a 770) del clon de NGF de rata 49 en Bluescript. Las láminas fueron adosados a Hyperfilm (NR1 durante 7 días, NR2A
y NR2B durante 14 días, BDNF o NT-3 durante 21 días), junto con las secciones de [ 35 S] patrones preparados con
cantidades conocidas de [marcado con 35 S] en un cerebro pegar. La señal de hibridación en el hipocampo dorsal era
can-
ficados utilizando densitometría con un sistema de análisis de imagen (MCID). Ensayo de unión del receptor de
NMDA. de unión en hipocampo receptor NMDA membranas sinápticas se midió utilizando el método de ref. 50.
ensayos de unión de saturación Equi-Librium (proteína de membrana 30 mg) se realizaron utilizando 0,38 a 32 nM
[ 3 H] MK-801 (actividad específica 22 Ci por mmol). La unión no específica se determinó en presencia de 4 mM MK-
801. Todos los ensayos incluyeron espermidina 20 mM, glicina 20 mM y 100 mM gluta-mate, y después de la filtración
rápida a vacío, la radiactividad unida se contó usando un contador de centelleo líquido.

Un GRADECIMIENTOS
Los autores agradecen el laboratorio de R. Quirion, Douglas Centro de Investigación del Hospital, para el
asesoramiento sobre los estudios de acetilcolina y G. Kuchel para el asesoramiento sobre el ARNm de NGF en el
protocolo situ. Esta investigación fue apoyada por una donación de Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación
de Canadá (a MJM). DL tiene una beca de postgrado, JD una beca post-doctoral y MJM un Científico Senior de la
adjudicación del Medical Research Council de Canadá.
R ECEIVED 6 A BRIL ; Un CCEPTED M 30 AY 2000