International Journal of Oral Science (2015), 1-7

ABIERTO www.nature.com/ijos

ARTÍCULO ORIGINAL

Una pérdida de segundo- terminaciones nerviosas asociadas con el complejo

de células de neuritas Merkel en el lesional epitelio mucosa oral del liquen
plano y hiperqueratosis
Daniela Caldero'n Carrio'n 1, YUKSEL Korkmaz 1,2,3, Britta Cho 2, Marion Kopp 1, Wilhelm Bloch 4, Klaus Addicks 3
y Wilhelm Niedermeier 1

TheMerkel compleja de células neuritas inicia la percepción del tacto Un andmediates segundo adaptando lentamente respuestas de tipo I. El liquen plano es una inflamación
autoinmune inflamatoria crónica mediada por células diseasewithT, mientras que la hiperqueratosis es characterizedwith o sin displasia epitelial en la mucosa oral. Para determinar
los efectos de andhyperkeratosis liquen planus en complejo de células de neuritas theMerkel, epitelio de la mucosa oral sana y lesional epitelio de la mucosa oral de liquen plano y
pacientes hiperqueratosis se tiñeron por inmunohistoquímica usando un avidina-biotina-peroxidasa inmunofluorescencia complejo y doble usando citoqueratina pan, citoqueratina 20
(K20, un marcador de células de Merkel), y neurofilamentos 200 (NF200, un a mielinizadas segundo- y A re- marcador de fibra nerviosa) anticuerpos. NF200 inmunorreactivas (ir) fibras
nerviosas inhealthy tejidos y en la lesional oralmucosaepitheliumof liquen plano andhyperkeratosis se contaron y se analizaron estadísticamente. En la mucosa oral sana, se
detectaron células K20-positiveMerkel con y sin estrecha asociación a las fibras nerviosas NF200-IR intraepiteliales. En la mucosa oral lesional del liquen plano y pacientes
hiperqueratosis, se detectaron fibras nerviosas NF200-IR extremadamente raros sólo en la lámina propia. En comparación con los tejidos sanos, liquen plano y tejidos
hiperqueratosis había disminuido significativamente el número de fibras nerviosas NF200-IR en el epitelio de la mucosa oral. liquen plano y la hiperqueratosis se asociaron con la
ausencia de una segundo- terminaciones nerviosas en el epitelio de la mucosa oral. Por lo tanto, concluimos que mechanosensation mediada por el complejo de células de neuritas
Merkel en el epitelio de la mucosa oral, se altera en el liquen plano y la hiperqueratosis.

International Journal of Oral Science la publicación anticipada en línea, 23 de Octubre de 2015; doi: 10.1038 / ijos.2015.31

palabras clave: UNA segundo- fibras nerviosas; hiperqueratosis; liquen plano; mechanosensation; complejo de células de neuritas Merkel

INTRODUCCIÓN Meissner y Pacini corpúsculos. 1 Se han propuesto las células de Merkel ser las células receptoras

Los receptores de la mucosa oral se clasifican como termorreceptores, mecanorreceptores y mechanosensory dentro theMerkel complejos de células de neuritas porque las células de Merkel

nociceptores. Termorreceptores son terminaciones nerviosas que perciben los estímulos de forman contactos sinápticos con terminaciones nerviosas aferentes somatosensorial. 1,4 TheMerkel

calentamiento y enfriamiento. 1 Mecanorreceptores son receptores especializados que perciben estrías,
tacto y la presión estímulos, 1 mientras que los nociceptores son receptores que perciben estímulos
dolorosos. 1-2 En comparación con las terminaciones nerviosas libres en la mucosa oral, las
complejo de células de neuritas es una unidad sensorial única que media mechanosensation. 6-7 células
de Merkel responden al tacto estímulos e inducir un potencial de acción en las fibras nerviosas
aferentes que inervan las células. 6-7

terminaciones nerviosas encapsuladas tales como los corpúsculos de Pacini, los corpúsculos de

Meissner y las células de Merkel son mecanorreceptores especializados. El sistema nervioso periférico cutáneo es conocido por estar implicado en la homeostasis
epidérmica. Por ejemplo, la proliferación de queratinocitos es modulada por la inervación de la

Las terminaciones nerviosas aferentes inervan la mucosa y la piel se clasifican por su velocidad de piel. 8 neuropéptido sustancia P sensorial regula inmunidad de la piel a través de su receptor,

conducción en tres grupos: A segundo, UNA re y fibras nerviosas C y terminaciones nerviosas. 1,3 La NK-R1, 9 mientras que el péptido relacionado con el gen neuropéptido calcitonina (CGRP) está

sensación del tacto está mediada por una segundo fibras. La nocicepción está mediada por una re- y implicada en la regulación del crecimiento de queratinocitos local. 10 En la epidermis, el CGRP
neuropéptido puede tener efectos inmunomoduladores inhibidores sobre la presentación de
fibras C. 1 La A segundo-
antígenos mediada por células Langerhans. 11-12
fibras nerviosas se subdividen en tres grupos: de adaptación lenta tipo I y fibras nerviosas de tipo II y
adaptarse rápidamente las fibras nerviosas. Las fibras nerviosas de tipo I de adaptación lenta
inervan los complejos de células de Merkel-neuritas, 1,4-5 mientras que los de adaptación lenta tipo II Se describió que la reducción de la percepción sensorial por el epitelio mucosa oral después de la

fibras nerviosas inervan los corpúsculos de Ruffini. 1 Las fibras nerviosas adaptarse rápidamente pérdida de dientes es compensada por un aumento en los números locales de células de Merkel del

inervan epitelio de la mucosa oral. 13 A partir de estos

1 Departamento de Prótesis Dental, Facultad de Odontología, Universidad de Colonia, Colonia, Alemania; 2 Centro de Bioquímica, Instituto Experimental para la Investigación Dental y Biología musculoesqueléticos Oral, Facultad de Medicina,

Universidad de Colonia, Colonia, Alemania; 3 Departamento de Anatomía de la Universidad de Colonia, Colonia, Alemania y 4 Departamento de Biología Molecular y Celular de Medicina Deportiva de la Universidad Alemana del Deporte, Colonia,

Alemania
Correspondencia: Dr. Y Korkmaz, Centro de Bioquímica, Instituto de Investigación Dental y Biología musculoesqueléticos Oral, Facultad de Medicina, Universidad de Colonia, Kerpener-Street
32, Colonia 50931, Alemania E-mail:
yueksel.korkmaz@uk-koeln.de de aceptar 15 de julio de
el año 2015
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DC Carrio' n et al

resultados, se concluyó que la reducción de la percepción por el epitelio de la mucosa oral, se lavaron en agua destilada y se sumerge la solución de intoMayer hematoxilina durante 10 min, se
es compensada por un aumento en la población local de células de Merkel. 13 Estos lavaron en agua corriente del grifo, se enjuagaron en agua destilada durante 2 min y luego se
resultados indican que las células de Merkel están involucrados en la regulación de sumerge en una solución de eosina durante 1 min. Las secciones se deshidrataron en etanol, se
mechanosensation en el epitelio de la mucosa oral sana. aclaró en xilenos ymontado en Entellan (Merck, Darmstadt, Alemania).

En la mucosa oral, liquen plano es una enfermedad autoinmune inflamatoria crónica

que implica la inflamación mediada por células T. hiperqueratosis oral se caracteriza
La inmunohistoquímica
por la hiperqueratosis del epitelio y hiperparaqueratosis, con o sin displasia epitelial.
Bajo los efectos de varios diferentes agentes irritantes nocivos que desencadenan el La avidina-biotina-peroxidasa método complejo. Las secciones desparafinadas se

liquen plano y la hiperqueratosis, las células del epitelio de la mucosa oral, revelan
diferentes cambios asociados con la inflamación, degeneración, hiperplasia o displasia.
Para evitar no fisiológicas estímulos nocivos de estiramiento y la presión en el diseño
de tratamiento prostodoncia dental, los conocimientos respecto a mechanosensation en
enfermedades de la mucosa oral, incluyendo liquen plano y hiperqueratosis, es de gran
importancia. Sin embargo,
El hallazgo de que la citoqueratina 20 (K20) es un marcador fiable de las células de
Merkel cutáneas 14 también se confirmó en células de Merkel de la mucosa oral. 15 Para
determinar los efectos de liquen plano y la hiperqueratosis en la células de Merkel-A segundo-
nervio complejo terminando en el epitelio de la mucosa oral, la localización y colocalización
de neurofilamentos 200 (NF200, un marcador de A segundo- terminaciones nerviosas) y K20
fueron investigados por inmunohistoquímica utilizando un métodos de inmunofluorescencia
doble complejos y confocales avidina-biotina-peroxidasa en el epitelio mucosa oral humana
sana y en lesional biopsias mucosa epitelio oral de liquen plano y pacientes hiperqueratosis.
lavaron en 0,05 mol? L 2 1 tris (hidroximetil) aminometano (Tris) solución salina -buffered
(TBS), y las secciones se trataron con proteinasa K (DAKO, Hamburgo, Alemania)
durante 3 min. La actividad peroxidasa endógena fue inhibida por 0,05 mol? L 2 1 TBS
que contiene 0,3% de H 2 O 2. A continuación, las secciones se trataron con 0,25% de
Triton X-100. Los sitios no específicos de unión para los anticuerpos se bloquearon con
albúmina de suero bovino al 2% (BSA; PAA Laboratories GmbH, Cölbe, Alemania) y
5% de suero normal de cabra (NGS; Vector Laboratories, Burlingame, CA, EE.UU.).
Posteriormente, las secciones se incubaron con los siguientes anticuerpos: anticuerpo
monoclonal de ratón anti-citoqueratina pan (pK, 1: 100; Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.),
de conejo anti-K20 (1: 250, Abcam, Cambridge, Reino Unido) y el ratón anti-NF200 (1:
2 000, Sigma, Taufkirchen, Alemania). Las secciones fueron incubadas con biotina de
cabra anti-ratón (01:50) y de IgG de cabra anti-conejo (1: 100, Vector Laboratories,
Burlingame, CA, EE.UU.), según el caso, que corresponde a los anticuerpos primarios.
A continuación, las secciones se incubaron en avidina-biotina-peroxidasa complejo (1:
100; Vector Laboratories, Burlingame, CA, 9- tetrahidrocloruro de diaminobencidina
(Sigma, Taufkirchen, Alemania) en 0,05 mol? L 2 1 tampón de Tris-HCl, pH

MATERIALES Y MÉTODOS
7,6, que contiene 0,01% de H 2 O 2 y 0,01% de sulfato de amonio níquel. Las secciones fueron
recogida de muestras de tejido
montadas en Entellan (Merck, Darmstadt, Alemania). Las incubaciones sin anticuerpos primarios
Las muestras con liquen plano ( norte 5 8) e hiperqueratosis ( norte 5 6) se originó de la mucosa
pero con anticuerpos secundarios (anti-IgG de ratón (Vector Laboratories, Burlingame, CA,
oral bucal, mientras que las muestras normales se originaron de la mucosa oral de la retromolar
EE.UU.) y de cabra biotinilado anti-IgG de conejo purificado por afinidad (Vector Laboratories,
( norte 5 2) y palatal ( norte 5 2) el número de células regions.Merkel en la mucosa oral varían en
Burlingame, CA, EE.UU.) se llevaron a biotina de cabra purificado por afinidad como controles,
función del sitio ( es decir, queratinizado o mucosa oral no queratinizado).
como se describe anteriormente. dieciséis

Se recogieron muestras sanas de la mucosa bucal de los pacientes que fueron tratados
con cirugía plástica. Los pacientes acordaron que sus tejidos examinados con fines de
investigación. La obtención de muestras de mucosa oral humana en el momento de la cirugía inmunofluorescencia doble. Las secciones se desparafinaron y se trataron con proteinasa K
fue aprobado por el Comité de Ética Humanos de Heinrich-Heine-Universidad, de Düsseldorf. (DAKO, Hamburgo, Alemania) durante 3 min. Los sitios no específicos de unión para los
anticuerpos fueron bloqueadas con solución que contiene 2% de BSA y 5% NGS bloqueo. Las
secciones se incubaron con anticuerpo monoclonal de ratón anti-NF200 (1: 2 000; Sigma,
La caracterización clínica y patológica de muestras de tejido
Taufkirchen, Alemania) anticuerpo durante la noche a 4 6 C. A continuación, las secciones se
Se recogieron las historias clínicas, y se llevaron a cabo las investigaciones de los
incubaron con anticuerpo de cabra 488-DyLight conjugado anti-IgG de ratón (Pierce
sujetos para el diagnóstico de liquen plano y la hiperqueratosis en la Clínica y
Biotechnology, Rockford, IL, EE.UU.) a 1: 1 000. Después del bloqueo de los sitios no específicos
Policlínica de Cirugía Oral y Maxilofacial de la Universidad de Colonia. El diagnóstico
de unión a byusing un bloqueo solutioncontaining 2 % de BSA y 5% NGS, las secciones se
histopatológico fue confirmada por hematoxilina y eosina (H & E) tinción.
incubaron con anticuerpo policlonal de conejo anti-citoqueratina 20 (K20) (Abcam, Cambridge,
Reino Unido) a una relación 1:? dilución 250 en 0,05 mol L 2 1 TBS durante la noche a 4 6 C. A
continuación, las secciones se incubaron con 550-DyeLight cabra conjugado IgG anti-conejo
la fijación del tejido, inclusión y corte
(Pierce Biotechnology, Rockford, IL, EE.UU.) a una dilución de 1: 500. Para la identificación
Las muestras de tejido se prepararon y se recogen en un fijador que contiene 4% de
paraformaldehído y solución de ácido pícrico al 0,2% en 0,1 mol? L 2 1 núcleo celular, las secciones fueron incubadas con DRAQ5 (Axxora, Lörrach, Alemania). Las
secciones fueron montadas en aguamarina Poli / Mount (Polysciences, Warrington, PA, EE.UU.).
solución salina tamponada con fosfato (PBS; pH 7,4). Las muestras de tejido se lavaron en
incubaciones inmunohistoquímicos Indouble, los controles se realizaron incubando las secciones
0,1 mol? L 2 1 PBS (pH 7,4) a 4 6 C y embebidos en parafina. El uso de un microtomo (HM 355 S
sin el primero (NF200) y segundo (K20) anticuerpos primarios pero con DRAQ5 a stainDNA ycon
Microtom; Microm International GmbH, Walldorf, Alemania), las muestras se cortaron en 10- metro
anticuerpos secundarios (de cabra 488-DyLight conjugado anti-IgG de ratón y anti-550-DyLight
m de espesor secciones.
conjugado IgG de conejo), como se describe anteriormente. 17

Hematoxilina y eosina
Las secciones se desparafinaron en xilenos y rehidratada en una serie de lavados con etanol en
concentraciones decrecientes. A continuación, las secciones se

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análisis de imagen confocal una segundo ome

pK K20
Tres imágenes fluorescentes de color fueron adquiridas en un LSM 510 META microscopio ome
confocal (Carl Zeiss, Oberkochen, Alemania). El haz de excitación 488 nm de un láser de
argón-criptón y un filtro de emisión de paso de banda 505- 530-nm se utiliza para ver
selectivamente el fluorocromo verde (para la identificación de NF200). El haz de excitación
543 nm y filtro de emisión de paso de banda 560 a 613 nm se utilizaron para ver
licenciado en Derecho
selectivamente el fluorocromo rojo (para la identificación de K20). El haz de excitación 633 licenciado en Derecho
nm y filtro de emisión de paso de banda 649 a 702 nm se utilizaron para ver
selectivamente el fluorocromo rojo lejano (para la identificación de DRAQ5). 17

lp lp

Cuantificación de las fibras nerviosas y el análisis estadístico

En las incubaciones de inmunohistoquímica, las secciones consecutivas de la mucosa oral se do NF200
re
NF200 ome
tiñeron con pK, K20 y NF200 usando el método del complejo avidinbiotin. Las fibras nerviosas
*
y las terminaciones nerviosas se identificaron para la cuantificación mediante la tinción para
NF200. Para la cuantificación, se seleccionó una sección por cada paciente. La cuantificación
se realizó en cuatro secciones ( norte 5 4) de cuatro individuos sanos, en ocho secciones lp
enfermas liquen plano ( norte 5 8) fromeight pacientes y en seis secciones enfermas
hiperqueratosis ( norte 5 6) a partir de seis pacientes. NF200-inmunorreactiva (IR) perfiles de
fibras nerviosas se visualizaron utilizando microscopía de luz convencional. secciones licenciado en Derecho

NF200-IR fueron vistos en 3 10 aumentos usando un microscopio Olympus (Olympus

Deutschland GmbH, Hamburgo, Alemania) unido a un fosfatidilcolinas que contienen software
Cell F de formación de imágenes (Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Münster,
Alemania) Imágenes fueron codificados para cegar al investigador para el número y el estado **
del paciente .
mi
DRAQ5 NF200 K20

Las fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas distribuidas en la lámina propia, en la capa de

células basales y en la zona intraepitelial se fijaron en un 10 6 metro metro 2 zona. El uso de un sistema

de análisis de imagen por ordenador (Cell F; Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Münster,
ome
Alemania), la ramificación de haces de fibras nerviosas (como dos o tres unidades, dependiendo de la

ramificación de los haces de fibras nerviosas), de cada nervio fibra (como una unidad), a través de las

fibras nerviosas seccionadas (como una unidad) y de exclusivos terminaciones nerviosas libres se

contaron (como una unidad) por secciones. A continuación, se analizaron estadísticamente los

números de las fibras nerviosas en la mucosa oral lesional del liquen plano y pacientes

hiperqueratosis.
licenciado en Derecho

Los datos se presentan como la media 6 error estándar de la media (SEM). Los resultados
se analizaron mediante análisis unidireccional de la varianza, y las diferencias entre los sanos
y los enfermos con el liquen plano y grupos hiperqueratosis se compararon mediante la
prueba post hoc de Bonferroni. La significación estadística se definió como PAG , 0.05.

lp

RESULTADOS

En la mucosa oral sana, las células epiteliales forman una barrera epitelial intacta con papilas
epiteliales regulares. En la lámina propia, fibras de colágeno, vasos sanguíneos, fibras Figura 1 La expresión de pK en queratinocitos y K20 en las células de Merkel y la localización de NF200
nerviosas, y células estromales mostraron una arquitectura celular normal (datos no en las fibras nerviosas de la mucosa oral humana saludable. (una) En el epitelio de la mucosa oral sana,
mostrados). En el liquen plano, el epitelio era delgada, y se identificaron numerosas células pK se detecta con diferentes intensidades de tinción (en función de la capa epitelial) en queratinocitos y

inflamatorias en la capa basal, así como en la lámina propia. En cuanto a la hiperqueratosis,
secciones de cuatro pacientes revelaron cambios no displásicas, y las secciones de dos
pacientes revelaron cambios displásicos.
en las células de Merkel del epitelio de la mucosa oral. ( segundo) K20 se identifica sólo en las células de
Merkel, situados en la capa basal del epitelio. ( do y re) NF200 se encuentra en las fibras nerviosas y las
terminaciones nerviosas distribuidas en la zona intraepitelial (un asterisco), en la capa basal del epitelio
(dos asteriscos) y en la lámina propia de la mucosa oral sana. ( mi) DRAQ5 (marcador de cromosoma) se
identifica en los núcleos celulares de los queratinocitos (azul). fibras nerviosas Intraepitelial NF200-IR
(verde) se detectan en asociación (amarillo) con las células K20-IR Merkel (rojo) en la capa basal del

expresión pK en los queratinocitos y células de Merkel, expresión K20 en las células de Merkel y epitelio. Tenga en cuenta que algunas fibras nerviosas NF200-IR intraepiteliales no están asociados con
las células de Merkel (flechas). Barras: a-d 5
expresión NF200 en las fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas de la mucosa oral

En comparación con la tinción moderada de los queratinocitos, se detectó una fuerte intensidad
50 metro metro; e = 10 metro metro. bl, capa basal; IR, inmunorreactiva; K20, citoqueratina 20; lp, lámina propia;
de la tinción para PK en células de Merkel, situadas en la capa basal de la mucosa oral (Figura NF200, neurofilamento 200; OMe, epitelio de la mucosa bucal; pK, citoqueratina sartén.
1a). K20 Strong (a Merkel específica

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marcador de células) -staining intensidad fue identificado solamente en las células de Merkel
(Figura 1b). NF200-ir fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas se detectaron en el epitelio,
la capa basal (Figura 1c) y la lámina propia (Figura 1d) de la mucosa oral. Por confocal de doble
tinción de inmunofluorescencia, se detectaron NF200-ir fibras nerviosas y las terminaciones
nerviosas; algunas de estas fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas estaban íntimamente
asociados con las células de Merkel en la capa basal del epitelio, mientras que algunos
detectaron fibras nerviosas NF200-IR intraepitelial y terminaciones no estaban íntimamente
asociados con las células de Merkel del epitelio de la mucosa oral sana (Figura 1e).
La pérdida de fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas NF200-ir en el lesional epitelio
mucosa oral del liquen plano
El lesional oralmucosa epitheliumof lichenplanuswas characterizedby tinción H & E (Figura
2a y 2b). En secciones de tejido liquen plano, los epitheliumwas generalmente delgada,
(Figura 2a) y papilas epiteliales no fueron detectables (Figura 2b). Se han identificado
numerosas células inflamatorias en la capa basal, así como en la lámina propia de la
mucosa oral enfermo (Figura 2b). En los casos asociados con la inflamación, se observaron
cambios estructurales en la capa basal y en el epitelio (figura 2b). Queratinocitos de epitelio
de la mucosa oral y de Merkel células acostado en

una segundo sol

ÉL ome DRAQ 5 NF200 K20
ÉL licenciado en Derecho
ome

ome

lp licenciado en Derecho

lp

lp
do re
ome K20 ome
pK

licenciado en Derecho
licenciado en Derecho

lp h
lp
180
El liquen plano

160
mi
sana
NF200 ome F NF200
140
Número de fibras nerviosas NF200-IR

licenciado en Derecho 120

100
lp
80

60
*
lp * 40
*
* 20

Figura 2 La expresión de pK en los queratinocitos y células K20 inMerkel y la localización de NF200 en las fibras nerviosas de la mucosa oral humana lesional del liquen plano. (una) En el liquen plano, el epitelio es delgado, y
papilas no son identificados por tinción H & E. ( segundo) La capa basal no está intacto, y hay numerosos linfocitos con la inflamación crónica en la lámina propia (detalle de la zona al cuadrado en una). (do) Los queratinocitos
aremoderately positivo para PK. Las células de Merkel son fuertemente positivas para PK. ( re) Sólo las células de Merkel, situados en la capa basal son positivos para K20. ( mi y F) En comparación con la mucosa oral sana, la
mucosa oral lesional del liquen plano está asociado con un número significativamente reducido de fibras nerviosas NF200-IR distribuidos en la lámina propia (asteriscos). ( sol) DRAQ5 se detecta en los núcleos de las células de
la sección de tejido liquen planus enfermo. no se detectan NF200-ir fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas associatedwith las células K20-irMerkel. ( h) La mucosa oral lesional del liquen plano está asociado con un
número disminuido de manera significativa de las fibras nerviosas NF200-IR en comparación con la mucosa oral sana. Bar: a = 1 mm; bf = 50

metro metro; sol 5 20 metro metro. bl, capa basal; H & E, andeosin hematoxilina; IR, inmunorreactiva; K20, citoqueratina 20; lp, lámina propia; NF200, neurofilamento 200; OMe, epitelio de la mucosa bucal; pK, citoqueratina sartén.

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la capa basal del epitelio reveló tinción positiva para pK (Figura 2c). intensidad
K20-tinción fuerte se observó en las células de Merkel de la lesional epitelio mucosa
oral del liquen plano (Figura 2d).
NF200-ir fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas no se detectaron en el lesional epitelio
mucosa bucal del liquen plano (Figura 2e). En la mucosa oral lesional del liquen plano, NF200 fue
identificado solamente en las fibras nerviosas individuales y terminaciones nerviosas distribuidas
en la lámina propia (Figura 2e y 2f). Se identificaron las células K20-positiveMerkel sin una
asociación con las fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas (Figura 2g). Liquen plano se
asoció con una disminución significativa en el número de fibras nerviosas NF200-positivos
encontrados en la mucosa oral en comparación con el número que se encuentra en la saludable
mucosa oral (Figura 2h).
La pérdida de fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas NF200-ir en el lesional epitelio
mucosa oral de hiperqueratosis
El lesional epitelio mucosa oral de hiperqueratosis se caracteriza por la realización de la
tinción H & E (Figura 3a y 3b). Los núcleos de las células de queratinocitos en la capa
basal eran más grandes que los núcleos de los queratinocitos en las otras capas
epiteliales de la mucosa oral (Figura 3b). Numerosos grandes extensiones de células
epiteliales basales ovales en el tejido conectivo subyacente se detectaron (Figura 3b).
En algunos casos de hiperqueratosis, se identificaron las células inflamatorias
ocasionales (datos no mostrados). En el epitelio bucal lesional de hiperqueratosis, pK se
detectó en los queratinocitos (Figura 3c). K20 se detectó con fuerte intensidad de la
tinción en el citoplasma

una segundo sol

ÉL ÉL DRAQ5 NF200 K20
ome

ome

ome
lp

licenciado en Derecho

bl lp

do re
ome ome
pK K20

lp

licenciado en Derecho

licenciado en Derecho

h
lp lp 180 Sano

mi F 160
NF200 NF200 hiperqueratosis
140
Número de fibras nerviosas NF200-IR

120
ome *
100
*
80
lp
60

40
lp
20

Figura 3 La expresión de pK en queratinocitos y K20 en las células de Merkel y la localización de NF200 en las fibras nerviosas de la mucosa oral humana lesional de hiperqueratosis. (una y segundo) En hiperqueratosis, los numerosos
grandes extensiones de células epiteliales basales ovales en la capa de células basales se identifican mediante tinción H & E ( segundo 5 detalle de la zona al cuadrado en una). (do) A excepción de en la capa basal, los queratinocitos
células andMerkel tiñen positivamente para pK. ( re) células de Merkel distribuidos en la capa basal son fuertemente IR para K20. ( mi) NF200-IR no es detectable en las fibras nerviosas del epitelio lesional de hiperqueratosis. ( F) NF200
se identifica sólo en las fibras nerviosas individuales en la lámina propia (asteriscos). ( sol) NF200-ir fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas no se detectan en relación a las células K20-ir Merkel de la lesional epitelio de la
mucosa oral de la hiperqueratosis. ( h) En comparación con la mucosa oral sana, mucosa oral lesional de hiperqueratosis se asocia con un número disminuido significativamente de las fibras nerviosas NF200-IR. Bares: una 5 1 mm; b-f 5
50 metro m, g 5 20 metro metro. bl, capa basal; H & E, hematoxilina y eosina; IR, inmunorreactiva; K20, citoqueratina 20; lp, lámina propia; NF200, neurofilamento 200; OMe, epitelio de la mucosa bucal; pK, citoqueratina sartén.

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DC Carrio' n et al
y con la intensidad de tinción débil en los núcleos de Merkel células (Figura 3d).
En el lesional epitelio de la mucosa oral de hiperqueratosis, NF200
inmunorreactividad no se detectó en la zona intraepitelial y en la capa basal del epitelio
(Figura 3e). Sólo fibras individuales y terminaciones nerviosas en la lámina propia
fueron positivos para NF200 (Figura 3f). Se detectaron las células de Merkel teñidos
con K20 sin una asociación con las fibras nerviosas o terminaciones nerviosas en el
lesional epitelio de la mucosa oral de hiperqueratosis (Figura 3G). La hiperqueratosis se
asoció con una disminución significativa en el número de fibras nerviosas
NF200-positivos detectados en la mucosa oral en comparación con el número
identificado en la mucosa oral sana (Figura 3h).
controles de inmunohistoquímica
En las incubaciones de control, no se detectó inmunorreactividad no específica (datos no
mostrados). En la doble tinción de inmunofluorescencia confocal, las incubaciones control
sin los primeros y segundos anticuerpos primarios resultaron en la desaparición de la
reacción inmunohistoquímica específica (datos no mostrados).
análisis estadístico
En las secciones de mucosa oral sana, numerosos NF200-ir fibras nerviosas y las
terminaciones nerviosas se contaron en la lámina propia y el área intraepitelial ( norte 5 4;
(108.86 6 47,90) unidades densitométricas (DUS)). En los tejidos de pacientes con liquen plano
y especialmente hiperqueratosis, las fibras nerviosas solamente se detectaron raramente en la
lámina propia. En comparación con la mucosa oral sana, la mucosa oral de pacientes liquen
plano está asociado con un número significativamente reducido de fibras nerviosas NF200-IR ( norteestímulos. En el presente estudio, la estrecha relación entre las terminaciones nerviosas
5 8; (20.08 6 9,11) DUS) (Figura 2h). En cuanto a la hiperqueratosis ( norte 5 6; (17.77 6 10,25)
DUs), el número de fibras nerviosas ofNF200-IR identifiedwas significativamente disminuido en
comparación con el NF200-ir fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas identificado en la
mucosa sana oral (Figura 3h).
DISCUSIÓN
En la mucosa oral humana sana, se detectaron las células de Merkel en asociación con las
fibras nerviosas NF200-ir intraepiteliales. liquen plano y la hiperqueratosis se asociaron con una
pérdida de fibras nerviosas y las terminaciones nerviosas NF200-ir en el epitelio de la mucosa
oral. La pérdida de la asociación entre las terminaciones nerviosas y las células de Merkel fue
similar en hiperqueratosis con cambios no displásicas y con cambios displásicos. A partir de
estos resultados, se puede sugerir que el planus- liquen, y la pérdida de hiperqueratosis
asociada de las terminaciones nerviosas en el complejo de células de neuritas Merkel de los
resultados de la mucosa bucal en el deterioro de la Merkel percepción compleja modulada de
células de neuritas de contacto de señalización en el epitelio de la mucosa oral.
En saludable epitelio de la mucosa bucal, NF200 (un marcador de A sensorial mielinizadas segundo-mecanismos. Por lo tanto, la aclaración de los mecanismos de la lesión específica definitivos
y A re- fibras nerviosas) se detectó en las terminaciones nerviosas intraepiteliales en estrecha
asociación con los queratinocitos. Se demostró que la proliferación de queratinocitos en la capa
experimentos adicionales.
basal epitelial fue modulada por una segundo- ANDA re- fibras nerviosas y terminaciones nerviosas. 8 Además
de la transducción de los estímulos nocivos de los estímulos externos al sistema nervioso central,
la evidencia sugiere que las fibras nerviosas sensoriales influyen queratinocitos 9-10 y células de
Langerhans 11-12 por la liberación de neuropéptidos sensoriales. Se sabe que sensorial A segundo- y
A re- fibras nerviosas contienen neuropéptidos sensoriales abundantes, especialmente la sustancia
P y CGRP. Por lo tanto, es posible que la función del epitelio de la mucosa oral, es modulada por
las fibras nerviosas sensoriales por un equilibrio entre el crecimiento y la diferenciación de los
queratinocitos, que puede ser regulado
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por la sustancia de neuropéptidos sensoriales P y CGRP en condiciones fisiológicas. En
contraste con el epitelio de la mucosa bucal saludable, la ausencia de la A segundo- y A re- fibras
nerviosas y terminaciones nerviosas en enferma epitelio de la mucosa oral, indica que la
regulación neuropeptidedependent de las células de Langerhans y queratinocitos se altera en
los casos de liquen plano y la hiperqueratosis. Está claro que los queratinocitos pueden verse
afectados por el liquen plano y la hiperqueratosis de una manera dependiente de la lesión por
un número de otros mecanismos complejos desconocidos.
Se requieren células de Merkel para la sensibilidad táctil. 1,18 En in vitro 19 y
en vivo 1 experimentos, se encontró que existe una relación estrecha y que el contacto se produce
entre las terminaciones nerviosas y las células de Merkel. células de Merkel contienen vesículas de
núcleo denso que se asemejan a las vesículas neurosecretoras. 20 Se detectaron las sinapsis
recíprocas en las zonas de contacto entre Merkel membrana plasmática de la célula y la membrana
plasmática de las neuritas. 21 células de Merkel expresan las herramientas moleculares necesarios
para enviar excitatorio así como las señales moduladoras a las neuronas sensoriales. 4 En las células
de Merkel, la expresión de factores de transcripción neuronales, canales de iones dependientes de
voltaje (K dependiente de voltaje 1- subunidades de los canales) y proteínas sinápticas se demostró. 4 Estos
resultados apoyan la noción de que las células de Merkel son células receptoras sensoriales que
transmiten señales táctiles para las terminaciones nerviosas de las neuronas somatosensoriales a
través de los contactos sinápticos. Finalmente, se demostró que la despolarización de las células de
Merkel inducidas potenciales de acción en el tipo de adaptación lenta I aferente fibras nerviosas que
inervados las células de Merkel. 6 En contraste, la hiperpolarización de las células de Merkel
suprimida potenciales de acción táctiles inducida. 6 En este proceso mechanosensation, Piezo22, un
canal catiónico activado mecánica, se requiere para la actividad de contacto inducida en las células
de Merkel. 7 Estos resultados indican que las células de Merkel regulan mechanosensation mediante
la inducción de potenciales de acción en las fibras nerviosas aferentes en respuesta al tacto
NF200-positivas y las células de Merkel K20-positivos de la mucosa bucal saludable indicó que
existe la percepción táctil fisiológico en el epitelio de la mucosa bucal. células de Merkel son células
mechanosensory que activan A segundo- terminaciones aferentes sensoriales de la mucosa bucal
sana.
Hay evidencia 22-23 apoyando el hallazgo de que la Merkel cellneurite unidad compleja es
necesaria para la señalización táctil mecanosensorial intacto. Las células ofMerkel eliminación por
tratamiento enzimático, fotoablación o knockout de genes resultaron en ausencia de las
respuestas de los aferentes de adaptación lenta. 22-23 Por tanto, es posible que el planus- liquen y
pérdida hiperqueratosis asociada de las terminaciones nerviosas de las Merkel de células de
neuritas unidad de resultados complejos en el deterioro de la percepción de señalización táctil en
el epitelio de la mucosa bucal. En comparación con el liquen plano, la hiperqueratosis se asoció
con una disminución significativa en el número de las fibras nerviosas y las terminaciones
nerviosas NF200-positiva en la lámina propia. planus- liquen y de la pérdida de
hyperkeratosisassociated aferentes mielinizadas A segundo- fibras nerviosas y las terminaciones
nerviosas pueden verse afectados de una manera dependiente de la lesión por diferentes
responsables de planus- líquenes y pérdida hyperkeratosisassociated de la relación entre las
células de Merkel y aferentes mielinizadas A segundo- terminaciones nerviosas requiere
La extracción de los dientes induce una reducción en la percepción del epitelio oralmucosal.
Esta reducción es aumento associatedwithan en la población local de células de Merkel, lo que
indica que la reducción en la percepción del epitelio de la mucosa oral puede ser compensado
por un aumento en el número de células locales Merkel. 13 Esto es de gran importancia para el
papel de las células de Merkel en la regulación de mechanosensation de la mucosa oral sana.
Debido a que la activación de los receptores del tacto es

deteriorado en el liquen plano y en hiperqueratosis, en el tratamiento protésico de dientes, toda
la cavidad oral, especialmente la mucosa bucal, deben ser observados y examinados
clínicamente. Por lo tanto, la administración de una terapia de prótesis requiere un epitelio de la
mucosa oral sana; inervación saludable y mechanosensation son requisitos previos para la
protección del epitelio de la mucosa oral contra de estiramiento y presión estímulos nocivos, que
puede ser ejercida por el tratamiento protésico de los dientes.
EXPRESIONES DE GRATITUD
Este trabajo contiene parte de la tesis doctoral de Daniela Caldero' n Carrio' n.
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