INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA MICROBIANA

Práctica 1 “Transporte de glucosa en levaduras”

Grupo: 5IM1
Sección 1
Equipo 3

Integrantes:

Fecha de entrega: 24-Septiembre-2015

HIPOTESIS
Sí Saccharomyces cerevisiae transporta la glucosa por difusión facilitada, es decir,
que necesita una proteína transportadora, entonces el transporte se verá inhibido
por la N-etil maleimida.
OBJETIVO
Demostrar y concluir que el transporte que la levadura (Saccharomyces
cerevisiae) utiliza para incorporar glucosa es por difusión facilitada.
ANALISIS DE RESULTADOS
Tabla 1. Determinación de Glucosa residual

Absorbancia 540 nm
Tiempo
Matraz numero
0 min 10 min 20 min 30 min
1 0.366 0.348 0.368 0.331
2 0.421 0.172 0.006 0.01
3 0.349 0.241 0.083 0.015
4 0.452 0.388 0.409 0.515
5 0 0.002 0.003 0.003

Tabla 2. Curva tipo de glucosa 500 µg/ml

µg de glucosa Absorbancia (540 nm)

0 0
100 0.033
200 0.128
300 0.228
400 0.306
500 0.432
Gráfica de curva tipo de glucosa

Cálculos:
Se calculó la cantidad de azúcar residual mediante la ecuación de la recta la cual
nos dará la concentración en µg

Glucosa residual (mg) y+ 0.0321

Matraz/Tie x=
0´ 10´ 20´ 30´ 0.0009
mpo
1 0.4423 0.4223 0.4445 0.4034
0.366+0.0321
2 0.5034 0.2267 0.0423 0.0467 x= =442.33 µ g
0.0009
3 0.4234 0.3034 0.1278 0.0523
4 0.5378 0.4667 0.4901 0.609 1mg ----1000µg
5 0.0356 0.0378 0.039 0.0578

Glucosa residual real (mg) Para obtener la glucosa residual

Matraz/Tie real a los matraces del 1 al 4 se
0´ 10´ 20´ 30´
mpo les resto la concentración
1 0.407 0.385 0.405 0.345 obtenida del matraz 5 de cada
2 0.468 0.189 0.0033 0 serie de tiempo correspondiente.
3 0.388 0.266 0.0088 0
(0.4423 – 0.0356) mg = 0.407mg
4 0.502 0.429 0.4511 0.551
 Glucosa residual real (mg/ml) Glucosa residual en mg/ml:
Matraz 0´ 10´ 20´ 30´ 1
x=( mg glucosa)( f . d)( )
1 2.035 1.93 2.025 1.72 alicuota
2 2.34 0.95 0.0165 0
3 1.94 1.33 0.044 0 1
x=( 0.407 mg)(1.5)( )
0.3 ml =2.03
4 2.51 2.145 2.25 2.75
5mg/ml

Glucosa consumida (mg/ml) Glucosa consumida =

Matraz 0´ 10´ 20´ 30´
Gulosa tiempo cero – Glucosa
1 0 0.105 0.01 0.315 tiempo x
2 0 1.39 2.3235 2.34
(2.035 - 1.93) mg = 0.105 mg/ml
3 0 0.61 1.896 1.94
4 0 0.365 0.26 0

Glucosa consumida en función del tiempo

2.5

2
Matraz 1
1.5
Matraz 2
Glucosa consumida (mg/ml) 1 Matraz 3
Matraz 4
0.5

0
0 5 10 15 20 25 30 35

Tiempo (min)

DISCUSIÓN
Para determinar cuál es el mecanismo de transporte que Saccharomyces
cerevisiae utiliza para transportar la glucosa al interior de la célula tenemos que
analizar los resultados obtenidos.
Se realizó una serie de matraces preparados de diferente manera, para analizar
los diferentes factores que determinan el tipo de transporte que se realiza.
Se tomó como referencia el matraz No.2 ya que este fue realizado a temperatura
ambiente, condición óptima para que S.cerevisiae realice el transporte, esto se
debe a que es un microorganismo mesófilico, es decir, que su temperatura óptima
de crecimiento es de 25°C a 40°. Al observar el comportamiento del matraz 2
podemos observar el comportamiento “ideal” de la levadura al transportar glucosa.
Matraz 1 (4°C)
Este matraz fue preparado de la misma manera que el matraz número dos,
cambiándole sólo una condición, la temperatura.
Como anteriormente se explicó S.cerevisiae es un microorganismo mesófilo, al
disminuir la temperatura, a una distinta de la óptima, podemos observar una
disminución en la cantidad de glucosa transportada. Esto se debe a en la
membrana citoplásmica de este microorganismo hay un disminución en la energía
cinética, los fosfolípidos presentes se rigidizan y se modifican las proteínas.
Matraz 3 (DNF)
Al matraz número tres se le agregó 2,4-dinitrofenol (DNF), el cual es un agente
desacoplante debido a que el pKa del grupo –OH fenólico esta disociado al pH
intracelular pero al acercarse a la membrana interna mitocondrial, se protona
aumentando su hidrofobicidad para ingresar, difundiéndose en la membrana por
acción de masa, una vez dentro el pH es más alto lo que ocasiona su
desprotonación, de esta forma capta el transporte de protones evitando el canal
protónico de la fosforilación oxidativa, provocando una inhibición de la síntesis de
ATP.
Al analizar el comportamiento de este matraz en la gráfica se puede observar que
el uso del 2,4-dinitrofenol no interfirió con el transporte de glucosa y por lo tanto
podemos decir que el transporte que realiza S.cerevisiae de la glucosa no es un
transporte activo ya que este no requiere de energía, por ello no se ve afectado
por la acción de DNF.
Matraz 4 (NEM)
Al matraz número tres se le adicionó N-etil maleimida.
Al analizar la gráfica se puede ver una interferencia con el transporte esto debido a
la NEM.
Podemos decir que realizó dicho transporte por difusión facilitada, ya que necesita
de una proteína transportadora, al haber un cambio conformacional por la unión de
NEM a los grupos sulfihidrilo de las proteínas de la membrana, esta proteína
(acarreadora) ya no reconoce a la glucosa.
CONCLUSION
Saccharomyces cerevisiae realiza transporte por difusión facilitada.
BIBLIOGRAFIA