Geoffrey M. Cooper Robert E. Hausman Boston University MARBAN. Contenido La Célula Seccion I. Introduccién a primera cella Evolucién del metabolismo 7 Procariotas actuales 8 Células eucariotas. 9. Desarrollo de organismos multicelulares 12 ,ULAS COMO MODELOS EXPERIMENTALES 15 E,con ts Levaduras 16 Dictyostelium discoideum Ty Caenorhabditis elegans 7 Drosophila melanogaster 18 Arabidopsis thaliana 18, Vertebrados is ¢ INSTRUMENTOS DE LA BLOLOGIA CELULAR 20 Microscopia optica Microscopia electronica Separacién subcelular Crecimiento de las células animales en cultivo Cultivo de células vegetales Virus EXPERIMENTO CLAVE: Cultivo celular animal MEDICINA MOLECULAR: Virus y cancer 2. Quimica celular ¢ COMPOSICION MOLECULAR DE LAS CE 41 Carbomidratos. 4+ Lipidos 44 Acidos nucleicos 48 Proteinas 50, ¢ PAPEL CENTRAL DE 56 Actividad catalizadora de Tas enzimas 30 Mecanismos de catilisis enzimatica 58 Coenzimas 61 Regulacién de la actividad enzimatica 61 *® ENERGIA METABOLICA 63 Energia libre y ATT oS Generacién de ATP a partir de glucosa 66 Produccién de energia a partir de otras moléculas organicas 71 Fotosintesis 72 © BIOSINTESIS DE LOS COMPONENTES CELULARES 73 Carbonidratos. Te Lipidos 15 Proteinas. 76 Acidos nucleicos 79 ¢ MEMBRANAS CELULARES 79 Tipidos de membrana ST Proteinas de membrana 81contenido Transporte a través de membranas celulares, EXPERIMENTO CLAVE: Plegamiento de las cadenas polipeptidicas MEDICINA MOLECULAR: Fenilcelonuria SS ————————————oe 3. Fundamentos de biologia molecular 89 # HERENCIA, GENES Y ADN 89 Genes y cromosomas 00 Genes y enzimas 91 Identificacion del ADN como el material genético 93 Estructura del ADN 94 Replicacién del ADN 95 ¢ EXPRESION DE LA INFORMACION GENETI 96 Colinealidad de genes y protemas Papel del ARN mensajero 98, 99 s ARN y transcripcién inversa 100 @ ADN RECOMBINANTE 103 Endonucleasas de restriccion 104 Generacién de moléculas de ADN recombinante 107 Vectores para el ADN recombinante. 108 cuenciacion de ADN 1 Expresién de genes clonados 113 Amplificacion de ADN con la reaccién en cadena de la polimerasa 115 *@ DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS Y PROTEINAS 117 Hibridacion de acidos nucleicos 117 Deteccién de pequefias cantidades de ADN 0 ARN por PCR 1i9 Sondas de anticuerpos para proteinas 119 Sondas de busqueda en bibliotecas de ADN recombinante 121 # FUNCION DE LOS GENES EN EUCARIOTAS 123 ‘Analisis genético en levaduras 123 Transferencia de genes en plantas y animales. 125 Mutagénesis de ADN clonados 128 Introduccion de mutaciones en genes celulares 128 ExreriMENTO CLAVE: Hipdtesis de provirus de ADN 102 INA MOLECULAR: VIH y sida 105 ¢ COMPLEJIDAD DE LOS GENOMAS DE EUCARIOTAS Thtrones y exones TaT Secuencias de ADN repetitivas Duplicacién a y pseudogenes Composicién del genoma en los eucariotas superiores ‘¢ CROMOSOMAS Y CROMATINA Cromatina Centromeros Telomeros @ SECUENCIAS DE LOS GENOMAS COMPLETOS Genomas procariotas El genoma de levadurascontenido Los genomas de Caenorhabditis elegans y Drosophila melanogaster 163 Genomas de plantas 165 Genoma humano 167 EXPERIMENTO CLAVE: Descubrimiento de los intrones 142 170, EXPERIMENTO CLAVE: El genoma humano, 5. Replicacion, mantenimiento y reorganizacién del ADN genémico ¢ REPLICACION DEL ADN 179 ADN polimerasas 180 Horquilla de repl 182 Fidelidad de replicacin 188 Origenes € iniciacién de la replicacion 189 ‘Telémeros y telomerasa: replicacion de los extremos de los cromosomas 191 ¢ REPARACION DEL ADN 192 Taversion directa del ADN daniado ToT 196 Reparacion propensa al error 201 Reparacién recombinatoria 202 204 [ ¢ RECOMBINACION ENTRE SECUENCIAS HOMOLOGAS DE / Las moléculas de ADN se recombinan mediante roturas y uniones 205 Modelos de recombinacién homolog: 207 Enzimas implicadas en la recombinacién homéloga 209 [ ¢ REORGANIZACION DEL ADN 211 Recombinacién especifica de sitio 21 Transposicién via intermediarios de ADN 216 sicién via intermediarios de ARN 220 n génica 225 MEDICINA MOLECULAR: Cancer de colon y reparacién del ADN 203 218 ERIMENTO CLAVE: Reorganizacion de los genes de inmunoglobulinas y maduracién del ARN 231 © TRANSCRIPCION EN PROCARIOTAS 231 ARN polimerasa y transeripeion Z3Z 236 Control negativo de la transcripcion y represores Control positivo de la transeripeién 238 ‘@ ARN POLIMERASAS EUCARIOTICAS Y FACTORES DE TRANSCRIPCIO! ERALES = 239 ARN polimerasas eucaridticas TT Factores de transcripcion generales ¢ iniciacién de la transcripeién por la ARN polimerasa I] 240 Transcripcion por las ARN polimerasas I y III 243 ‘@ REGULACION DB UA TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS 244 Secuencias de regulacion en cis: promotores y estimuladores ZAd 249 Proteinas de regulaci6n transcripcional Estructura y funcién de los activadores de la transcripeién Represores eucaridticos Relacién entre la estructura cromatinica y la transcripcién 256 Regulacién de la transcripcion por ARNs no codificantes 259 Metilacion del ADN 260 @ MADURACION Y RENOVACION DEL ARN 261 Maduracién de los ARNs ribosomicos y de transferencia 26Z Maduracién del ARNm en eucariota: 264 Mecanismos de corte y empalme o splicing 266 Corte y empalme alternativo. 272 273 Correccién del ARNcontenido Degradacion del ARN 274 EXPERIMENTO CLAVE: Aislamiento de un factor de transcripcion eucaridtico 251 EXPERIMENTO CLAVE: Descubrimiento del RNPsn 268 7. Sintesis de proteinas, procesamiento y regulacion * TRADUCCION DEL ARNM ARN de transferencia Ribosoma Organizacion de los ARNm mensajeros e inicio de la traduccién ‘anismo de la traduc ilacion de la traduc Enzimas y plegamiento de proteinas Escisién de proteinas Glicosi Anclaje de lipidos. # REGULACION DE LA FUNCION DE LAS PROTEINAS Regulacion por pequenas moleculas Fosforilacion de proteinas Interacciones proteina-proteina ‘© DEGRADACION DE PROTEINAS Ta de Ta ubiquitina-proteasoma Protedlisis lisos6mica acion EXPERIMENTO CLAVE: MEDICINA MOLECULA! apel catalitico del ARN ribosémico. Antibisticos y sintesis de proteinas Seccién III. Estructura y funcién celulares 8. Nicleo 323 ¢ ENVUELTA NUCLEAR Y TRAFICO ENTRE EL NUCLEO Y EL CITOPLASMA.......00.0... 323 Estructura de Ta envuelta nuclear 324 Complejo del poro nuclear 326 Transporte selective de proteinas desde y hacia el nuicleo 328 Regulacién del transporte de proteinas al nucleo 332 Transporte de ARNs ¢ ORGANIZACION INTERNA DEL NUCLEO Tromosomas ructura de orden superior de Ta cromatmna Dominios funcionales en el interior del nucleo. * NUCLEOLO. Genes de ARN ribosomico y organizacion del nucléolo’ Transcripcion y procesamiento del ARNr Ensamblaje de ribosomas ¢ EL NUCLEO DURANTE LA MITOSIS Disgregacion de la envuelta nuclear Condensacién de los cromosomas. Reorganizacion del nucleo interfasico EXPERIMENTO CLAVE: Identificacién de las sefales de localizacion nuclear. ..... MEDICINA MOLECULAR: Enfermedades de la lamina nuclearcontenido a ES 9, Distribucién y transporte de proteinas: Reticulo endoplasmico, aparato de Golgi y lisosomas ¢ RETICULO ENDOPLASMICO Reticulo endoplasmico y secrecion de protemas Marcaje de las proteinas para dirigirse al reticulo endoplismico Insercién de las proteinas en la membrana del RE miento y procesamiento de las proteinas en el RE de lipidos. acion de proteinas y lipidos desde el RE ¢ APARATO DE GOLGI Organizacion del Golgi Glicosilacion de proteinas en el Golgi Metabolismo de lipidos y de polisacaridos en el Golgi Distribucién y exportacién de proteinas desde el aparato de Golgi e ME NISMO DE TRANSPORTE DE LAS VESICULAS. ‘Aproximaciones experimentales al conocimiento del transporte de las vesiculas Seleccién de la mercancia, proteinas de revestimiento y gemacién de vesiculas Fusion de vesiculas. e LISOSOMAS Hidrolasas lisosémicas acidas. Endocitosis y formacién del lisosoma Fagocitosis y autofagia EXPERIMENTO CLAVE! Hipétesis de la sefial MEDICINA MOLECULAR: Enfermedad de Gaucher: 10. Bioenergética y metabolismo: Mitocondrias, cloroplastos y peroxisomas 399 e@ MITOCONDRIAS 399 Organizaci6n y funcién de las mitocondrias: 400 Sistema genético de las mitocondrias 401 Internalizacion de _proteinas y formacién de las mitocondrias 403 ¢ MECANISMO DE LA FOSFORILACION OXIDATIVA 408 Cadena de transporte de electrones 408 Acoplamiento quimiosmotico 410 Transporte de metabolitos a través de la membrana interna 414 ¢ CLOROPLASTOS Y OTROS PLASTIDOS, 415 Estructura y funcién de Tos cloroplastos aT Genoma del cloroplasto 417 Internalizacién y distribucién de las proteinas del cloroplasto 418 Otros plastidos 420 ¢ FOTOSINTESIS 422 F a traves de Tos Totosistemas Ty 22 fiyo de electron Flujo ciclico de rones 425 Sintesis de ATP 426 ¢ PEROXISOMAS. 426 Funciones de Tos peroxisomas AZ Formacién del peroxisoma 429 MEDICINA MOLECULAR: Enfermedades de las mitocondrias: neuropatia Optica hereditaria de Leber 406 EXPERIMENTO CLAVE: Teoria quimiosmética 412 ee ——— eee 11. Citoesqueleto y movimiento celular 435 ¢ ESTRUCTURA Y ORGANIZACION DE LOS FILAMENTOS DE ACTI 435 436 Ensamblaje y desensamblaje de Tos filamentos de actina xtcontenido Organizacién de los filamentos de actina. 440 Asociacién de los filamentos de actina con la membrana plasmatica 442 Protuberancias de la superficie celular 445 e@ ACTINA, MIOSINA Y MOVIMIENTO CELULAR FAT Contraccién muscular 447 Asociaciones contractiles de actina y miosina en células no musculares 451 Miosomas no convencionales 453 Migracién y arrastre celular 454 ¢ FILAMENTOS INTERMEDIOS 455 Proteinas de los filamentos intermedios 455 Ensamblaje de los filamentos intermedios 456 Organizacién intracelular de los filamentos intermedios 457 Funciones de las queratinas y neurofilamentos: enfermedades de la piel y sistema nervioso 459 # MICROTUBULOS 462 “structura, ensamblaje ¢ inestabilidad dinamica de los microtibulos 462 Centrosoma, centriolos y organizacion de los microtubulos, 464 Reorganizacion de los microtubulos durante la mitosis 466 Estabilizacién de los microtubulos y polaridad celular 467 © MOTORES MICROTUBULARES Y MOVIMIENTOS. 468 Identificaci6n de las proteinas motoras microtubulares 468 Transporte de organulos y organizacién intracelular 472 Separacién de los cromosomas mitéticos 474 Cilios y flagelos 474 EXPERIMENTO CLAVE: La expresién de una queratina mutante causa un desarrollo anémalo de la piel 460 EXPERIMENTO CLAVE: Aislamiento de la quinesina 470 eS SS 12. Superficie celular 483 ¢ ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA PLASMATICA 483 Bicapa lipidica 83 Proteinas de membrana 486 Movilidad de las proteinas de la membrana 490, Glicocalix 492 Difusion facilitada y proteinas transportadoras 494 Canales iénicos 496 Transporte activo dirigido por la hidrlisis de ATP 503 Transporte activo dirigido por gradientes iénicos 507 ¢ ENDOCITOSIS 508 Fagocitos 310 Endocitosis mediada por receptor sil Trafico de proteinas en la endocitosis: S15 ¢ PAREDES CELULARES Y MATRIZ EXTRACELULAR 518 Paredes celulares bacterianas STS Paredes celulares vegetales 519 Matriz extracclular 522 ¢@ INTERACCIO) CELULA-CELULA 528 Proteinas de adhesion celular. s Uniones estrechas 531 s de tipo gap 531 n de las células vegetales y plasmodesmos 532 MEDICINA MOLECULAR: Fibrosis quistica 509 e: Receptor de las LDL 512contenido Seccién IV. Regulaci6n celular 13. Sefializacién celular © MOLECULAS SENALIZADORAS Y SUS RECEPTORES Tipos de senalizacion celula-celula Hormonas esteroideas y superfamilia de receptores de esteroides Oxido nitrico y monéxido de carbono Neurotransmisores. Hormonas peptidicas y factores de crecimiento Eicosanoides Hormonas vegetales asociados a proteinas G ptores proteina-tirosina quinasa Receptores de citoquinas y proteina-tirosina quinasas no receptoras Receptores asociados a otras actividades enzimati ¢ VIAS DE TRANSDUCCION INTRACELULAR DE SENALE Via del AMPe: segundos mensajeros y fosforilacion de proteinas GMP ciclico Fosfolipidos y Ca2+ Ras, Raf y via de las MAP quinasas JAK/STAT * TRANSDUCCION DE SENALES Y CITOE Integrinas y transduccion de sefales Regulacién del citoesqueleto de actina ALIZACION EN EL DESARROLLO Y EN LA DIFERENCIACION 575 ] fa del receptor tirosina quinasa/Ras/Raf/ ERR en Drosophila y en C. el Hedgehog y Wnt lizacion por Notch UELETO. s JLACION DE LA MUERTE CELULAR PROGRAMADA Caspasas y apoptosis Receptores implicados en la muerte celular y la activacién de las caspasas Sefalizacion de la supervivencia celular EXPERIMENTO CLAVE: Proteina-titosina quinasa Sre MEDICINA MOLECULAR Cancer, transduccién de sefales y oncogenes ras 14. Ciclo celular Regulacién del ciclo celular por el crecimiento celular y por sefiales extracelulares Puntos de control del ciclo celular Restringir la replic: del ADN a_una vez por ciclo celular DORES DE LA PROt CICLO CELULAR MPF: und 2y Familias de ciclinas y quina Factores de crecimiento y s dependientes de ciclinas inas de tipo D Inhibidores de la progresién del ciclo celular ® SUCESOS DE LA FASE M Etapas de Ta mitosis MPF y progresié xiiicontenido Citocinesis 614 © MEIOSIS Y FECUNDACION 615 Proceso de Ta meiosis OTS Regulacién de la meiosis en los oocitos 618 Fecundacién 620. ¢ CELULAS MADRE Y MANTENIMI 'O DE TEJIDOS ADULTOS 621 Profiferacion de Tas celutas diferenciadas. O2T Células madre 622 Aplicaciones médicas de las células madre 624 EXPERIMENO CLAVE: Descubrimiento del MPF 600 MEDICINA MOLECULAR: Cultivo de células madre embrionarias. 622 15. Cancer 631 ® DESARROLLO Y CAUSAS DEL CANCER 631 Tipos de cancer aT Desarrollo del cancer 633 Causas del cancer 634 Propiedades de las células cancerosas 636 Trans formacién de las células en cultivo 640, * VIRUS TUMORALES 640 Virus de la hepatitis By C 641 SV40 y poliomavirus 641 Papilomavirus 642 Adenovirus 643, Herpesvirus 643 Retrovirus 644 *@ ONCOGENES 644 ‘Oncogenes retroviricos 645 Proto-oncogenes 646 Los oncogenes en el cancer en el hombre 649 Funciones de los productos oncogénicos 653 ¢ GENES SUPRESORES DE TUMORES 657 Tdentificacion de Tos genes supresores de tumores O37 Funciones de los productos de los genes supresores de tumore: 661 Papel de los oncogenes y de los genes supresores de tumores en el desarrollo del tumor 663 @ APLICACIONE . LA BIOLOGIA MOLECULAR PARA LA PREVENCION Y EL TRATAMIENTO DEL CANCER 664 Prevencion y deteccion precoz G64 Diagnéstico molecular 665 Tratamiento . 666 EXPERIMENTO CLAVE: Descubrimiento de los proto-oncogenes 648 MEDICINA MOLECULAR: STI-571: Tratamiento del cancer dirigido contra el oncogén ber/abl 667 Respuestas a las cuestiones Glosario xivOrganizacion y caracteristicas de La Célula La Célula ha sido disefiado para ser un texto de facil comprensién y ensefianza que puede ser cubierto en un solo semestre, a la vez que permite a los estudiantes dominar el material de todo el libro Damos por hecho que se poseen ciertos conocimientos generales de biologia y quimica aunque no supo- hemos que se tengan en las areas de quimica organica, bioquimica 0 biologia molecular. Muchos aspec- tos en la organizaci6n y caracteristicas del libro nos ayudardn a acercarnos a la materia. Organizacion La Célula se divide en cuatro partes, cada una de ellas es independiente, por lo que el orden y los temas pueden variar facilmente segun las necesidades de cada curso. La seccidn | del libro aborda los origenes de la evolucién de las células, sus métodos de estudio, su composicion quimica y los fundamentos de la biologia molecular moderna. Para aquellos estudiantes. que tengan una gran formacién en cursos de introduccién a la biologia o en cursos previos de biologia molecular, pueden obviar varias partes de este libro o pueden usarlas de repaso. La seccion Hse centra en la biologia molecular de las células asi como en la organizacion y secuen- cias del genoma; duplicacion, reparacién y combinacién de fragmentos de ADN, trascripcion del ARN: y sintesis, procesos y regulacién de proteinas. Los capitulos estan ordenados siguiendo el mismo orden de la informacion genética (ADN > ARN > proteina) y proporciona un conc! so pero actual campo de v de es s materias La seccion I// analiza la estructura y funcionamiento de la célula: nucleo, organulos citoplasmati- cos, citoesqueleto y superficie celular. Esta parte del libro comienza adaptando lo mencionado en la sec- cién II sobre biologia molecular a las células eucaridticas y continiia a través de los organulos del cito- Sin embargo, esto ‘apitulos son relativamente plasma y citoesqueleto hasta la membrana plasmati independientes y pueden tratarse en distinto orden, segin sean mas apropiados para un curso en concre- to. Finalmente, la seccién [V comprende los mecanismos de regulacién de las actividades de la célu- la, tratando temas como los estimulos celulares, el ciclo de la célula y la muerte controlada de células. Esta cuarta parte concluye con un capitulo sobre el cancer que sintetiza las consecuencias de los fallos de icos de funcionamiento de las células. los mecanismos b:Organizacion y caracteristicas de La Célula Caracteristicas Para ayudar a los estudiantes a dominar e integrar los contenido de La Célula, se han incorporado arias caracteristicas que se han organizado para guiar a los estudiantes en el trato con este libro de la siguiente manera: Organizacién de capitulos. Cada capitulo se divide en cuatro 0 cinco secciones principales, las cua- an a su vez divididas en un ntimero similar de apartados. Un esquema de las secciones principales les es al principio de cada capitulo muestra de modo rapido la organizacion de cada uno de ellos. Términos claves y glosario. Los términos claves aparecen en negrita a lo largo del capitulo, ademas de enunciarse en el sumario y definirse en el glosario de final del libro. Ilustraciones y microfotografias. Se ha desarrollado cuidadosamente un completo programa de ilus- tracion a todo color y de microfotografias para complementar y reforzar visualmente el texto. Experimentos y ensayos de medicina molecular. Cada capitulo contiene dos Experimentos clave o un Experimento clave y caracteristicas de Medicina molecular. Estas practicas tienen por objeto el instruir al lector en las bases experimentales de la célula y la biologia molecular y aplicaciones a la medicina moderna. Las practicas también pueden utilizarse como bases utiles para discusiones de estudiantes, que pueden acompaiiarse con una revision del texto original sobre el que se basan los Experimentos clave. Resumen de capitulo. El sumario esta organizado a modo de esquema, que corresponde a las suce- sivas divisiones en secciones y apartados de cada capitulo. Este formato se acompaiia de una lista con los términos claves, proporcionando asi un conciso repaso del material. Preguntas y respuestas. Una extensa bateria de preguntas al final de cada capitulo (con las res- al final del libro) tienen como proposito facilitar la revision del material de cada capitulo y animar puesta: a los estudiantes a usar dicho material para predecir o interpretar los resultados experimentales. Bibliografia. Las listas bibliograficas del final de cada capitulo permiten el acceso rapido a las paginas correspondientes del libro. Para ayudar a identificar articulos de interés, las referen an orga- nizadas de acuerdo con las secciones de los capitulos. Los articulos de interés y las paginas importantes se identifican con las iniciales [R] y [P] respectivamente.La CélulaSeccion I Introduccion ! Visidn global de la célula e investigacion celular 2 Quimica celular 3 Fundamentos de biologia molecularOrigen y evolucién de las células 4 (Células como modelos experimentales 15 Instrumentos de la biologia celular 20 EXPERIMENTO CLAVE: Cultivo celular animal 32 MEDICINA MOLECULAR: Virus y cancer 35 cuyo entendimiento es fundamental para todas las ciencias biologicas. Esto es cierto no sdlo desde el punto de partida de la ciencia basica, sino también respecto a un numero creciente de aplicaciones practicas en agricultu- ta, biotecnologia y medicina. Especialmente tras haber completado la secuen- cia del genoma humano, el progreso de la biologia celular y molecular esta abriendo nuevos horizontes en la practica médica. Ejemplos llamativos incluyen el desarrollo de nuevos farmacos especialmente disefados para interferir con el crecimiento de células cancerosas y con el uso potencial de células madre para sustituir tejidos dafados y tratar pacientes que padecen condiciones como la diabetes, enfermedad de Parkinson, de Alzheimer, lesiones de la médula espi- nal y enfermedades cardiacas. Dado que la biologia celular y molecular es un campo de investigacion de rapido crecimiento, este capitulo se centrara en como se estudian las células, asi como servira para revisar sus propiedades basicas. La apreciacion de las similitudes y diferencias entre las células resulta particularmente importante para entender la biologia celular. La primera seccién de este capitulo por lo tanto discutira la unidad y la diversidad de las células presentes hoy en dia en términos de su evolucién desde un ancestro comun. Por otra parte, todas las células comparten propiedades fundamentales que se han conservado a través de la evolucion. Por ejemplo, todas las células utilizan ADN como material ge- nético, estan rodeadas por una membrana plasmatica y usan los mismos meca- nismos basicos para el metabolismo energético. Por otro lado, las células ac- tuales han evolucionado en diferentes estilos de vida. Muchos organismos, como las bacterias, amebas y levaduras, se componen de células Unicas capa- ces de autorreplicarse independientemente. Los organismos mas complejos estan compuestos por una coleccion de células que funcionan de manera coor- dinada, con diferentes células especializadas para desarrollar funciones parti- culares. El cuerpo humano, por ejemplo, esta compuesto de mas de 200 tipos diferentes de células, cada una de ellas especializada para cada funcion distinti- va como la memoria, la vista, el movimiento, 0 la digestion. La diversidad exhibi- da por los diferentes tipos de células es sorprendente; por ejemplo, considere- mos las diferencias entre las bacterias y las células del cerebro humano. Las similitudes fundamentales entre los diferentes tipos de células proporcio- nan un marco comtn para la biologia celular, permitiendo que los principios basi- cos aprendidos a partir de experimentos con un solo tipo de célula puedan ser extrapolados y generalizados a otros tipos de células. Diversos tipos de células y organismos son extensamente utilizados para estudiar los diferentes aspectos de la biologia celular y molecular; la segunda seccidn de este capitulo discute algu- nas de las propiedades de estas células que las hacen particularmente valiosas | A BIOLOGIA MOLECULAR DE LAS CELULAS es un area de investigacion activa 34 @ Seccion | ¢ Introduccion como modelos experimentales. Finalmente, es importante reconocer que el pro- greso de la biologia celular depende también de los instrumentos experimentales que permiten a los cientificos hacer nuevas observaciones o desarrollar experi- mentos novedosos. Este capitulo de presentacién concluye por tanto con una discusion acerca de algunos experimentos utilizados para el estudio de las célu- las, ala vez que resume algunos de los descubrimientos historicos que han lleva- do a nuestro conocimiento actual sobre la estructura de la célula y su funcion Origen y evolucién de las células Las células se dividen en dos clases principales, inicialmente definidas segun donde situaran al nucleo. Las células procariotas (bacterias) carecen de en- voltura nuclear; las células eucariotas presentan un nucleo donde el material genético esta separado del citoplasma. Las células procariotas son general- mente mas pequefas y simples que las células eucariotas; ademas de la ausencia de nucleo, sus genomas son menos complejos y no contienen organu- los citoplasmaticos 0 citoesqueleto (Tabla 1.1). Al margen de estas diferencias, los mismos mecanismos moleculares basicos gobiernan las vidas de procario- tas y eucariotas, indicando que todas las células presentes hoy descienden de un ancestro primordial unico. , Como se desarrollo la primera célula? ¢Y como evolucionaron la complejidad y la diversidad que exhiben las células actuales? La primera célula Parece ser que la vida emergio hace, al menos, 3.800 millones de anos, aproxi- madamente 750 millones de afios después de que se formara La Tierra (Fig. 1.1). Cémo se origind la vida y como la primera célula Se convirtid en un ser son cuestiones de especulacion, puesto que estos acontecimientos no pueden re- producirse en el laboratorio. No obstante, diferentes tipos de experimentos han proporcionado evidencias importantes sobre algunos pasos del proceso. En 1920 se sugirié por primera vez que moléculas organicas simples po- drian polimerizar espontaneamente y formar macromoléculas bajo las condicio- nes que se pensaba que existian en la atmésfera primitiva. En el momento en el que surgié la vida, la atmésfera de La Tierra se piensa que contenia poco o nada oxigeno libre, constando principalmente de CO, y N., ademas de peque- fas cantidades de gases como H,, H.S, y CO. Tal atmosfera proporciona condi- ciones reductoras en las que las moléculas organicas, con una fuente de ener- gia como la luz solar 0 descargas eléctricas, se pueden formar espontaneamente. La formacion espontanea de las moléculas organicas fue demostrada por pri- mera vez experimentalmente en los ahos 50, cuando Stanley Miller (un estu- diante graduado en aquel entonces) demostré que la descarga de chispas eléc- tricas en una mezcla de H,, CH,, y NH,, en presencia de agua, conducia a la formacion de una variedad de moléculas organicas, incluyendo varios aminoa- cidos (Fig. 1.2). Aunque el experimento de Miller no reprodujo con precision las Caracteristicas Procariota Eucariota Nucleo ‘Ausente Presente Didmetro de una célula tipica = ~1 am 10-100 jum Citoesqueleto Ausente Presente Organulos citoplasmaticos Ausentes Presentes Contenido de ADN (pares de 1x 10°a 5 x 10% 1,5 x 107 a5 x 10° bases) Cromosomas Una molécula de ADN Multiples moléculas de ADN circular linearCapitulo 1 Presente 1.000 ‘Organismos multicelulares = 2.000 a 2 ‘s 2 3 3 5 c Primetos eucariotas = Metabolismo oxidativo 8 3.000 —_Fotosintesis = Primeras células 4.000 4.600 Formacién de la Tierra 5.000 condiciones primitivas de La Tierra, claramente demostré la plausibilidad de la sintesis espontanea de las moléculas organicas, proporcionando los materiales basicos desde donde surgieron los primeros organismos vivos. El siguiente paso en la evolucion fue la formacion de las macromoléculas. Se ha demostrado que los bloques monoméricos que constituyen las macromo- léculas se polimerizan espontaneamente bajo condiciones prebidticas plausi- bles. El calentamiento de mezclas secas de aminoacidos, por ejemplo, da como resultado su polimerizacion para formar polipéptidos. Pero la caracteristica fun- damental de la macromolécula de la que surgié la vida debe tener la habilidad de replicarse por si misma. Solamente una macromolécula capaz de dirigir la sinte- sis de nuevas copias de si misma seria capaz de reproducirse y evolucionar. De las dos clases principales de macromoléculas que aportan informacion en las células actuales (acidos nucleicos y proteinas), solo los acidos nucleicos son capaces de dirigir su propia replicacion. Los acidos nucleicos pueden servir Figura 1.2 Formacion espontanea de las moléculas organicas. El vapor de agua se expulsaba a una atmésfera que consistia en CH,, NH, y Hz, en la que se descargaban chispas de electricidad. El andlisis de los productos de la reaccion reveld la formacion de varias molé- culas organicas, incluyendo los aminodcidos alanina, Acido aspartico, Acido glutamico y glicina. Vision global de la célulae vestigacion celular @ 5 Figura 1.1 Escala temporal de la evolucion. La escala indica el momento aproximado en el que ocurrieron algunos de los aconteci- mientos mas importantes en la evolucion de las células. Descarga eléctrica Moléculas organicas Alanina ‘Acido aspartico ‘Acido glutamico Glicina Urea — Acido lactico Acido acético —Acido férmico6 @ Seccién | © Introduccion Figura 1.3 Autorreplicacién propia del ARN. Las parejas complementarias entre los nu- cledtidos (adenina [A] con uracilo [U] y guanina [G] con citosina [C]) permiten que una hebra de ARN sirva como molde para la sintesis de una nueva hebra con la secuencia complementaria Figura 1.4 Recubrimiento del ARN de autorrepli- cacion con una membrana de fosfolipi- dos. Se cree que la primera célula surgid del recubrimiento del ARN autorreplicante y sus moléculas asociadas por una mem- brana compuesta de fosfolipidos. Cada molécula de fosfolipidos presenta dos lar- gas colas hidrofobicas unidas a un grupo hidrofilico. Las colas hidrofébicas estan embebidas en la bicapa lipidica; las cabe- zas hidrofilicas estan expuestas al agua a ambos lados de la membrana. be i] Bod | food [od clel>l>icloliclolo H @iclol>|>|cjoiclojo ° io) como molde para su propia sintesis como resultado del apareamiento de ba- ses especificas entre nucledtidos complementarios (Fig. 1.3). Uno de los pasos criticos en el aprendizaje de la evolucién molecular ocurrid a principios de los afios 80, cuando se descubrié en los laboratorios de Sid Altman y Tom Cech que el ARN es capaz de catalizar numerosas reacciones quimicas, incluyendo la polimerizacién de nucleotidos. El ARN es, por tanto, el Unico capaz de servir como molde y catalizar su propia replicacién. Como consecuencia, se cree que el ARN ha sido el sistema genético inicial, y que una etapa temprana de la evolucion quimica estuvo basada en moléculas de ARN con replicacion propia —un periodo de la evolucion conocido como el mundo del ARN—. Las interac- ciones en orden entre el ARN y los aminoacidos evolucionaron a lo que hoy es el codigo genético, y eventualmente el ADN reemplazo al ARN como el material genético. La primera célula, se presupone, que surgio de la envoltura del ARN de replicacion propia en una membrana compuesta por fosfolipidos (Fig. 1.4). Tal y como se discutira en detalle en el proximo capitulo, los fosfolipidos son los componentes basicos de todas las membranas bioldgicas presentes hoy dia, incluyendo la membrana plasmatica de células procariotas y eucariotas. La ca- racteristica clave de los fosfolipidos que forman las membranas es que son moléculas anfipaticas, lo que quiere decir que una porcidn de la molécula es soluble en agua y la otra porcién no. Los fosfolipidos presentan largas cadenas hidrocarbonadas insolubles en agua (hidrofobicas) unidas a grupos solubles Membrana de fosfolipidos Molécula de fosfolipidos: Grupo hidrofilico Cola hidrofébicaCapitulo 1 * Vision global de la célulae investigacion celular @ 7 en agua (hidrofilicos) que contienen fosfatos. En contacto con el agua, los fosfolipidos espontaneamente se agrupan en una bicapa con los grupos que contienen fosfatos en el exterior en contacto con el agua y sus colas hidrocarbo- nadas en el interior en contacto unas con otras. Esta bicapa fosfolipidica forma una barrera estable entre dos compartimentos acuosos —por ejemplo, sepa- rando el interior de la célula de su ambiente externo—. La envoltura del ARN autorreplicante y las moléculas asociadas a una mem- brana lipidica se han mantenido, por tanto, como una unidad, capaz de reprodu- cirse a si misma y evolucionar. La sintesis de proteinas a partir del ARN pudo ya haber evolucionado, en cuyo caso la primera célula consistiria en un ARN de replicacion propia y sus proteinas codificadas. Evolucion del metabolismo Debido a que las células se originaron en un mar de moléculas organicas, éstas eran capaces de obtener alimento y energia directamente de su ambiente. Pero una situacion como ésta es limitada en si misma, por lo que las células necesi- taron evolucionar sus propios mecanismos de creacion de energia y sintetizar las moléculas necesarias para su replicacion. La creacion y la utilizacion contro- lada de la energia metabdlica es primordial para todas las actividades celulares, y los procesos principales de metabolismo energético (discutidos en detalle en el Cap. 2) se han conservado practicamente intactos en las células actuales. Todas las células utilizan adenosina 5’-trifosfato (ATP) como fuente de ener- gia metabdlica para llevar a cabo la sintesis de los constituyentes celulares y conducir otras actividades que requieren energia, como el movimiento (p. j., la contraccién muscular). Los mecanismos utilizados por las células para generar ATP han evolucionado en tres etapas, correspondientes a la evolucion de la glicolisis, fotosintesis y metabolismo oxidativo (Fig. 1.5). El desarrollo de estos procesos metabdlicos cambid la atmésfera de la Tierra, en consecuencia alte- rando el curso de la evolucién. En la atmoésfera anaerobia inicial de la Tierra, las primeras reacciones gene- radoras de energia presumiblemente implicaron la escision de moléculas orga- nicas en ausencia de oxigeno. Estas reacciones parecen ser una forma de la actual glicolisis —la rotura anaerobia de la glucosa a acido lactico, con la ga- nancia neta de energia de dos moléculas de ATP. Ademas de utilizar ATP como su fuente de energia quimica intracelular, todas las células actuales llevan a cabo la glicolisis, de acuerdo con la idea de que estas reacciones surgieron muy pronto en la evolucion. La glicolisis proporcioné un mecanismo mediante el cual la energia en molé- culas organicas ya formadas (p. ej., la glucosa) podia convertirse en ATP, que Glicolisi Glucosa Acido ldctico Figura 1.5 Fotosintesis Generacién de energia metabdlica. La a - glicdlisis es la rotura anaerobia de la glu- 600, +6H,0 —————m GjHi,05 + 60, cosa en acido lactico. La fotosintesis utili- za la energia del sol para conducir la sin- luce tesis de la glucosa a partir del CO, y el HO, liberando O,, como producto. El O, Mesmocnamc oxi rative liberado por la fotosintesis lo utiliza el (GHIOY co, ———» 6c0,+6H,0 metabolismo oxidativo, en el que la glu- rer cosa se rompe en CO, y H,0O, liberando Glucosa mucha més energia que la obtenida de la glicdlisis.