Práctica 1

Curvas Estándar y Concentración

Una curva estándar o curva patrón es una curva de referencia construida por
cantidades conocidas de una determinada sustancia (ej. mg) que se utiliza para
determinar la cantidad de esa misma sustancia presente en una alícuota. Tiene dos
aplicaciones:

• Conocer la confiabilidad de nuestras mediciones

• Utilizarla como referencia para interpolar valores de nuevas determinaciones

Objetivos:

• Aprender a realizar y utilizar curvas estándar para determinar concentraciones

específicas de soluciones desconocidas

• Conocer y utilizar las diferentes formas de calcular concentraciones

Materiales:

• Micropipeta de 1 ml o jeringa de insulina

• Espectrofotómetro y celdas de 1ml

• 11 Tubos de ensaye

• Gradilla

• Vortex

Reactivos (por grupo):

• 1.5 mL de solución de albúmina sérica bovina 0.2 mg/ml

• 0.5 mL de solución A (proteína de concentración desconocida)

• 1 mL de solución B (proteína de concentración desconocida)

• 50 mL de Reactivo Bradford (guardar en frasco ámbar)

Método:

Curva de Proteína por el método de Bradford

 • Preparar los siguientes tubos. Para la curva estándar (tubos 1 al 6) se utiliza una
solución de 0.2 mg / ml de albúmina sérica bobina (BSA). Para los tubos problema
(7 al 10) se utilizan las soluciones de concentración desconocida (A y B).

Tubo µl de BSA µg de BSA µl de H2O A595

1 0 µl 0 µl 0 µl
2 25 µl 5 µl 75µl
3 50 µl 10 µl 50 µl
4 75 µl 15 µl 25 µl
5 100 µl 20 µl 0 µl

Tubo µl de Sol. µg Prot µl de H2O A595

Problema
7 Problema A 10 µl ¿? 90 µl
8 Problema A 15 µl ¿? 85 µl
9 Problema B 30 µl ¿? 70 µl
10 Problema B 60 µl ¿? 40 µl

• Mezclar bien todos los tubos

• Adicionar a cada tubo 1ml de reactivo Bradford y mezclar inmediatamente

• Esperar al menos 5 minutos pero menos de 1 hora

• Leer la A595 y anotar los datos

• Eliminar los desechos de reactivo Bradford en el contenedor designado para ello

 • Lo que sobre de las solución patrón de albúmina y de las soluciones problema A y
B se puede volver a congelar para que otros grupos puedan utilizarlas.

Análisis de datos:

• Calcular los µg de albúmina que corresponden a las cantidades utilizadas en cada

tubo de la curva estándar

• Graficar la curva estándar (µg de proteína en el eje X y A540 en el Y) y obtener la

ecuación de la recta.

• Calcular la cantidad de proteína en las muestras problema (tubos 7, 8, 9 y 10).

• Calcular la concentración de proteína en las soluciones problema (A y B).

• Completar la siguiente tabla

Tubo ml sol A ml sol B mg Proteína mg Proteína/

ml
7 ---
8 ---
9 ---
10 ---

¿Cuál es la concentración de proteína en la sol A? ¿y en la B?

**Nota: el reporte debe incluir todos los cálculos, tanto del análisis de resultados como
del cuestionario.

Cuestionario:

1. Definir los siguientes conceptos: Concentración, mol, molaridad, porcentaje

(como forma de medir concentración), número de abogadro

2. ¿Cuál es la diferencia entre un mol y uno molar?

3. ¿Qué significa que una solución esté a una concentración 2M? ¿y 2% w/v?

4. Completar la siguiente tabla con las equivalencias correspondientes:

 M mM µM nM pM
1M = 1
1mM = 1
1µM = 1
1nM = 1
1pM = 1

5. ¿Para qué sirve una curva estándar?

6. ¿Cuánto debes poner de soluto y de disolvente para preparar 50ml de cada una
de las siguientes diluciones?

a. 1:2

b. 1:5

c. 2:5

7. Si tienes una solución de glucosa 1M y la diluyes1:2

a. ¿A qué molaridad queda?

b. Si diluyes 1:3 la dilución anterior ¿A qué dilución final queda?

c. ¿Qué molaridad tiene esta última solución?

d. ¿Cuál es la concentración final en %?

8. ¿Cuántos gramos debes pesar para preparar 250ml de (NH4)SO4 (sulfato de

amonio) 2M? ¿A cuánto equivale en %?

9. ¿Cuánto debes pesar para preparar 50ml de HCl 0.4%? ¿A qué molaridad queda?

10. Calcule la molaridad de una solución que contiene 26g de fructosa (C6H12O6)
diluidos en 300ml de H2O ¿y a qué porcentaje queda?

11. En agua el NaCl se disocia y forma iones Na+ y Cl-. Si preparas 50 ml de solución
de NaCl 0.5M, suponiendo que todo el NaCl quedó disociado, ¿A qué molaridad
quedan los iones Na+? ¿y los Cl-?

12.