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Cromatografía preparativa
La cromatografía preparativa se utiliza principalmente con fines cualitativos,
preparativos o de limpieza, entre otros.
Cromatografía en papel
Cromatografía en columna
- A diferencia de los dos procesos anteriores que eran ascendentes, en
cambio esta cromatografía es descendente.
- Se rellena una columna que puede ser de distintos tamaños, lo importante
es poner algodón o lana de vidrio, para que cuando se rellene con silica gel
no pase a través de la llave.
- Cuando se rellena toda la columna, es importante que no quede con
fracturas, puesto que no es un relleno sólido ya que se le va agregando con
solvente.
- Es una técnica utilizada principalmente para limpieza o depuración de la
muestra por separación de los componentes de la mezcla.
- La muestra se aplica en la parte superior y se eluye con los solventes
agregados por gravedad o forzados por presión externa
Cromatografía gaseosa
Es una de las técnicas más usadas en instrumentación. Puede ser usada como
método de identificación y cuantificación
Esta técnica tiene sus similitudes y diferencias con la cromatografía liquida:
Esta técnica pude ser utilizada para compuestos con apreciable grado de
volatilidad (bajo 350 a 400C).
El compuesto a analizar deber ser rápidamente volatilizado y no
transformado durante su análisis (esto no es función de los puntos de
ebullición, sino que también del tamaño de la molécula y la polaridad).
Dato: Algunos compuestos de origen farmacéutico son térmicamente sensibles y
se degradan con la temperatura, esta técnica no es la más idónea para estos
compuestos. La polaridad de la mayoría de los compuestos farmacéuticos es que
son iónicos y solubles en agua.
Existen dos tipos de cromatografías:
1. Gas – sólido
2. Gas – liquido
Esto significa que una es la fase móvil y la otra es la estacionaria respectivamente.
La cromatografía gas-líquido se basa en la distribución del analito entre una fase
móvil gaseosa y una fase líquida inmovilizada sobre la superficie de un sólido
inerte, esto quiere decir, que lo que transporta a los analitos a través del proceso
cromatográfico es un gas, a diferencia de la cromatografía liquida y se mueve a
través de una fase estacionaria que es un sólido o líquido.
Equipo
Sublimar: pasar de
solido a gas, sin pasar
por líquido.
Auto- sampler: es el sistema por el cual ingresa la muestra hacia el
inyector
Para ingresar la muestra hacia el sistema es mediante una microjeringa.
Microjeringa: Es una jeringa ‘’común y corriente’’ de dimensiones
manipulables, pero que el embolo en su interior tiene una capacidad muy
pequeña, normalmente no supera los 10 microlitros.
Reguladores
Tiene dos presiones, uno
que tiene una mayor
graduación y otro que tiene
una menor graduación. El
que posee la mayor
graduación es de primer
estado y está conectado
directamente al cilindro, denota lo que queda en el cilindro, en cambio, el segundo
estado es con la presión que está saliendo del cilindro.
Inyector
Es donde ingresa la muestra. En este compartimento la muestra es volatilizada
debido a la alta temperatura a la cual se encuentra el inyector.
La temperatura depende de los analitos, pero normalmente esta por sobre los
200°, no es constante.
Normalmente lo que se inyecta a un
sistema cromatográfico, no es más de un
microlitro de muestra.
La jeringa pasa a través de una septa o
septum es como una ‘’goma’’ la cual tiene
por función evitar que la muestre una vez
que ingrese, salga.
En el interior del inyector es donde está la
cámara de vaporización, son unos tubos
de vidrios en los cuales se indica el flujo y
que tiene distintas geometrias internas, no
externas.
Split injection
Existen dos tipos de inyeccion:
Split (con división): parte de ese volumen inyectado pasa al volumen
cromatografico y parte se purga o se va del sistema.
Splitless (sin división): Significa que todo lo que este inyectando en el
sistema pasa al proceso cromatografico.
¿Cómo funciona esto?
Estan las moleculas del gas carrier que pasan a través del sistema, las
moleculas de la muestra y las moleculas del solvente que son las mayoritarias.
Cuando ocurre un proceso normal, todo lo que ingresa al sistema, las
moleculas, pasa al proceso cromatografico.
Si yo abro la valvula de split lo que se puede hacer es que parte de lo que se
inyecte pasa al sistema y la otra parte de alguna forma salga del sistema,
mediante una vía de escape (inyección split).
Normalmente los cromatografos vienen con un sistema de limpieza o purga de
septa ¿Por qué? Porque la septa, a pesar de que posea un bajo sangrado (low
bleeding) como está posicionada en el inyector, está a alta temperatura, por lo
tanto, lo que le puede pasar a la septa es que puede sufrir ciertas
modificaciones termicas y puede que ser que ciertos componentes por los
cuales esta fabricada la septa tambien pasen al proceso cromatografico y
cuando esto ocurre se conoce como sangrado, que es cuando la señal
analitica es mucho mayor a la del analito.
Para evitar esto, se agrega bajo la septa una especie de flujo o de gas
portador, que va de alguna forma limpiando los posibles componentes que se
han producido por la septa para que no entre al sistema.
Lo que normalmente se coloca en los cromatografos de gases es la razón del
split y en este caso es 80:1, esto significa que de cada 80 moleculas que
ingresan al sistema solamente una pasa al proceso cromatografico.
Cosas importantes de entender:
Que significa y que herramientas nos proporciona ocupar split o splitless