La nefelometría y turbidimetría están relacionados estrechamente son técnicas

analíticas basadas en la dispersión de la radiación por una solución que

contiene material de partículas disperso.

Cuando una radiación pasa a través de un medio transparente en el que se

dispersan partículas sólidas, parte de la radiación es dispersada en todas las
direcciones, dando una apariencia turbia a la mezcla. La disminución de la
radiación incidente, como resultado de la dispersión de partículas, es la base
de los métodos turbidimétricos.

La nefelometría por el contrario se basa en medición de la radiación dispersa,

por lo general en un ángulo recto al haz incidente.

La elección entre un nefelométrico y una medición turbidimétrico depende de la

fracción de la luz dispersada.

Cuando la dispersión es extensa, debido a la presencia de muchas partículas,

turbidimetría generalmente proporciona resultados más fiables. Nefelometría se
prefiere utilizar a bajas concentraciones debido a una pequeña intensidad
dispersa sobre un fondo negro es más fácil de medir que un pequeño cambio
en la intensidad de la radiación transmitida intensa.

Es importante tener en cuenta que la dispersión asociada tanto con

nefelometría y turbidimetría no implica la pérdida de potencia radiante;
solamente la dirección de propagación se ve afectada.

La intensidad de la radiación que aparece en cualquier ángulo depende de:

número de partículas, su tamaño y forma, así como la longitud de onda de la
radiación.

El Efecto de la concentración en la dispersión análisis turbidimétrico consiste

en la medición de la disminución de la intensidad de la radiación incidente que
es causada por la dispersión.

Efecto de la concentración en la dispersión análisis turbidimétrico

Consiste en la medición de la disminución de la intensidad de la radiación

incidente que es causada por la dispersión y es análogo a una medición de
absorción.

Cuando un haz de radiación de intensidad I0 pasa a través de un medio no

absorbente que dispersa la luz, la intensidad transmitida I está dada por la
expresión:
T= turbidez o coeficiente de turbidez

b= Longitud de la trayectoria

T puede ser relacionada con la concentración de las partículas de dispersión

como consecuencia se aplica una relacion a la ley de beer

La ecuación se emplea en el análisis turbidimétrico exactamente de la misma

forma que la ley de Beer se utiliza en análisis fotométrico

La nefelometría se basa en la medición de la radiación dispersa por las

partículas de la muestra en ángulo recto con la viga. El detector se coloca fuera
de la trayectoria de la radiación incidente de la fuente.

Para las mediciones nefelométricas, una ecuación describe la relación entre la

intensidad de la radiación dispersa, la intensidad de la radiación incidente, y la
concentración de las partículas que causan la dispersión:

El valor K es constante sólo para un instrumento en particular y cuando las

condiciones experimentales se controlan cuidadosamente. La intensidad de la
radiación dispersa es directamente proporcional tanto a la intensidad de la
radiación incidente y a la concentración del analito.

La señal difundida detectada puede surgir de las partículas de interés, sino

también del polvo, de fondo difuso, o de otras moléculas (por ejemplo,
proteínas y lípidos) en la muestra.

La reflexión y la dispersión de los componentes ópticos del instrumento

también pueden contribuir a la señal de fondo. El mejor rendimiento se obtiene
en soluciones diluidas, donde la absorción y reflexión son mínimas.

En estas condiciones, la relación entre la concentración de partículas de

dispersión y la intensidad de luz dispersada es casi lineal en un amplio intervalo
de concentración.
Efecto del tamaño de partícula en la dispersión

La fracción de la radiación dispersa en cualquier ángulo en sistemas coloidales depende del

tamaño y la forma de las partículas responsables de la dispersión. Aquellas variables que
influyen en el tamaño de partículas durante la precipitación también afectan a ambas
mediciones turbidimétricos y nefelométricos.

Existen algunos factores que pueden afectar a los resultados y que deben ser controlados tales
como la concentración de los reactivos que se usan para preparas las suspensiones, el pH, la
fuerza ionica total, la temperatura de la solución son de importancia critica y deben de ser
controlados cuidadosamente.

Con la finalidad de estabilizar las suspensiones y prevenir la sedimentación de las partículas se

añade un coloide protector.

La ausencia y presencia de coloides también afectan el tamaño de las partículas.

Efecto de la longitud de onda de dispersión

La longitud de onda seleccionada para las mediciones también tiene un efecto importante en
la dispersión.

Se ha demostrado que el coeficiente de turbidez T varia respecto la longitud de onda de

acuerdo con la ecuación

Donde S es una constante para un sistema dado, la cantidad t depende del tamaño de las
partículas y tiene un valor de 4 cuando las partículas de dispersión son significativamente mas
pequeñas que la longitud de onda de la radiación, para las partículas con dimensiones
similares a la longitud de onda t tiene el valor de 2.

Equipo

Las mediciones turbidimétricas se realizan por lo general con simples fotómetros filtrantes,
mientras que los instrumentos para las mediciones nefelométricas son similares en diseño a
fluorometros simples.

Ambos instrumentos comprenden una fuente de luz que emite en la región visible un
compartimiento celular, un detector y un dispositivo de lectura.

En el aparato utilizado para las determinaciones nefelometricas el detector esta colocado a 90

grados con respecto a la trayectoria de la radiación incidente.
Aplicaciones de métodos de dispersión

Los métodos turbidimétricos o nefelométricos se utilizan ampliamente en el análisis de agua,

para la determinación de la turbidez, y para el control de procesos de tratamiento. Además, la
concentración de una variedad de iones se puede determinar usando reactivos de
precipitación adecuados para formar suspensiones. Asi mismo, también se han utilizado para
medir partículas en suspensión en los gases, como el smog y la niebla.

El análisis de inyección de flujo (FIA)

Es un método simple y alternativo para los procedimientos por lotes. En una

FIA básica las muestras se introducen en el sistema a través de la inyección
que es una válvula, dispersa en el soporte dentro del conducto de los tubos.
Más comúnmente, el reactivo se añade continuamente a través de un punto de
confluencia situado el puerto de inyección y antes de una bobina donde tiene
lugar la reacción. Finalmente, el roducto de reacción alcanza el flujo a través
del detector donde la detección genera la señal

En 1990, Ruzicka y Marshall [6] propusieron una nueva técnica de flujo,

secuencial de análisis de inyección (SIA), basado en los mismos principios de
la FIA, y concebido como una sola bomba, una sola válvula y un único sistema
de canales. La EIS se basa en la aspiración secuencial de muestras bien
definidas y de reactivos a través de una válvula de selección en una bobina de
retención. El flujo es entonces se pretende invertir, propulsar y dispersar
mutuamente estas zonas apiladas a través de la bobina de reacción y dirija el
producto de reacción al detector.

En comparación con la FIA, estos sistemas permiten un ahorro considerable de

reactivos y una disminución significativa en el residuo químico producido,
porque sólo las cantidades requeridas son aspiradas y el portador no se
bombea continuamente.

La principal diferencia entre las metodologías FIA y SIA se refiere a la forma en

que se mezclan las soluciones de muestra y portador / reactivo en el interior de
los tubos. Mientras que en FIA las soluciones se mezclan más comúnmente en
la confluencia de puntos, dando lugar a un gradiente de concentración del
analito en un fondo constante de reactivo, en SIA la mezcla eficiente es más
difícil de conseguir debido a la ausencia de puntos de confluencia.

La turbidimetría ha sido ampliamente utilizada como método de detección en el

análisis de flujo.

Además de automatizar los métodos turbidimétricos discontinuos, las técnicas

de flujo como FIA, SIA, MCFIA, y MSFA, dentro de otros, incluso permitió la
mejora del rendimiento analítico de estos detectores. Sin lugar a dudas, la FIA
es la la técnica más utilizada.

Turbidimétrico y aplicaciones de flujo de análisis nefelométricas

En las secciones siguientes, se da la descripción de aplicaciones

turbidimétricos y nefelométricos utilizando métodos de flujo.

El procedimiento de sulfato de bario turbidimétrico a FIA para la determinación

de sulfato en aguas naturales y digestiones de plantas utilizando diversos tipos
de sistemas de fluencia con más de un flujo de reactivo o portador.

PbSO4 formación coloidal en etanol-agua fue propuesto como un método

turbidimétrico para la determinación de sulfato en aguas naturales también se
aplico en la determinación del total de azufre en las plantas que utilizan
siembra de cristales como un enfoque alternativo para mejorar la tasa de
crecimiento de cristales en flujo análisis turbidimétrico.
Un problema relacionado con el procedimiento turbidimétrico de sulfato de
bario es la posible interferencia a la longitud de onda 420 nm causada por la
suspensión sólidos, la presencia de sustancias orgánicas y el color intrínseco
de los muestras. Con el fin de minimizar esta dificultad, Van Staden propuso un
FI con filtración de muestras prevalente. Las interferencias son
automáticamente eliminado utilizando un filtro de carbón activo situado entre el
muestreador y el sistema de válvulas de muestreo. Sistemas de inyección de
flujo nefelométrico para la determinación de sulfato por precipitación como el
sulfato de bario. Un líquido sin ventanas célula óptica con un reactor sin
paredes para inyección de flujo turbidimétrico y La determinación nefelométrica
del sulfato ha sido desarrollada por Liu y Dasgupta.

En 2003, Jakmunee desarrollado un flujo de luz simple y de bajo costo a través

de la dispersión de la luz detección para determinar la concentración de masa
de partículas. La metodología se basó en la detección nefelométrica, utilizando
un puntero láser como una fuente de luz y un fotodiodo como sensor de luz.

Potasio

Torres y Tubino propusieron un sistema de inyección de flujo turbidimétrico

para la determinación del potasio después de la precipitación con Na-TPB
(sodio tetrafenilboron) en condiciones alcalinas. Con el fin de determinar
concentraciones bajas de potasio, se añadió continuamente solución de potasio
al soporte. Un sistema turbidimétrico FI fue desarrollado por Lima para la
determinación de nitrógeno total y potasio en muestras vegetales utilizando una
espectrofotómetro como detector. Una solución de Na-TPB preparada en PVA
fue utilizado como agente precipitante para la determinación de potasio. Un gas
se incluyó el proceso de difusión en el colector para separar los iones amonio
del resto de la muestra y para permitir el análisis pareado. El total de potasio
se llevó a cabo la determinación sobre las soluciones que quedaban en la
corriente donante.

Nitrógeno

En 1856 Nessler introdujo un reactivo compuesto de yoduro de mercurio (II) y

yoduro de potasio en solución alcalina para la determinación cualitativa y
cuantitativa de amoníaco. Desde entonces, el reactivo de Nessler ha sido
ampliamente referido como la prueba más sensible para el amoníaco; sin
embargo, sólo es preciso si se controla cuidadosamente una serie de
condiciones. Un sistema FIA turbidimétrico para la determinación de amoníaco
en bajas concentraciones utilizando el reactivo de Nessler se desarrolló por
primera vez por Krug El método se basó en la reacción entre el amoníaco y el
reactivo de Nessler con la formación de un precipitado marrón medido a 410
nm.

Con el fin de investigar la viabilidad de la destilación isotérmica en el flujo

análisis de inyección, Zagatto propuso un sistema de FI turbidimétrico con el
reactivo de Nessler para la determinación de nitrógeno total en material vegetal
El enfoque de las zonas de fusión se empleó para añadir el reactivo de Nessler
en forma discreta para evitar la deriva basal.

En 1997 Lima y demás personas desarrollaron un sistema FI turbidimétrico

para la determinación de nitrógeno total y potasio en muestras vegetales
utilizando una espectrofotómetro como detector, se utilizo tetrafenilboro de
sodio (Na-TPB) como agente precipitante y poli (alcohol vinílico) (PVA) como
tensioactivo. Los iones de amonio se retiraron de la muestra por difusión de
amoniaco del donante al aceptor. La determinación de nitrógeno total llevado a
cabo en la solución en la corriente aceptora después de su inyección en el
trayecto de flujo turbidimétrico donde la precipitación de amonio tetrafenilboron
ocurrió.

Fosfato

Burns. desarrollado un colector FI con una cámara de mezcla para

determinación de fosfato con molibdato y cristal violeta. La sal insoluble de
colorante azul se mantiene en solución coloidal con PVA y se mide a 560 nm.
El sistema se aplicó a la determinación de fosfato en muestras de suero y
después de mineralización apropiada a compuestos orgánicos y para plantar
materiales.

Un sistema FIA simple, rápido y de bajo costo fue propuesto por Diniz Para la
determinación turbidimétrica del ortofosfato en material vegetal digerido. La
determinación se basó en la precipitación de ortofosfato con zinc en medio
tampón (pH 6,0). Se añadió PVA en todas las soluciones como una solución
coloidal protector para aumentar tanto la sensibilidad como la reproducibilidad
y, en consecuencia, para reducir el tiempo de lavado. El ortofosfato se
determinó en la concentración rango de 5 a 60 mg P L21 con una frecuencia
analítica de 180 h21.

En 2001, Simonet propuso dos sistemas SIA para la turbidimetría

determinación de fosfato en muestras de orina. Este método se basó en la
cristalización de fosfato cálcico y sobre la acción inhibitoria de fosfato sobre la
cristalización de carbonato de calcio. Como las muestras de orina con alto
contenido de calcio pueden interferir en el método basado en la cristalización
de fosfato cálcico, se utilizó una resina de intercambio catiónico incorporado en
el colector.

Cloruro

El método espectrofotométrico de tiocianato de mercurio / hierro (III) no a sido

recomendado debido a la cantidad de tóxicos que se utilizan por lo tanto el
procedimiento turbidimétrico de nitrato de plata con la formación de cloruro de
plata se vuelve atractivo ya que es ambientalmente menos dañino y se
implementa fácilmente en el análisis de flujo. Zaitsu fue de los primeros en
proponer un procedimiento turbidimétrico FI para la determinación de cloruro
en agua de río. El método se basó en la medida a 440 nm de una suspensión
de cloruro de plata en nitrógeno en medio ácido. Se requirió una etapa previa
de separación que implicaba intercambio iónico. El método era aplicable para
concentraciones de cloruro de hasta 14 mg L21.

En 1997, Sartini también presentó un procedimiento de FI que consistía en la

precipitación de cloruro para la determinación turbidimétrica automatizada de
cloruro en aguas de río hasta 10 mg L21.

Mesquita desarrolló un sistema SIA usando el cloruro de plata para la

determinación turbidimétrica del cloruro en diferentes tipos de agua, donde la
concentración de cloruro difiere significativamente. La novedad de este trabajo
comparado con los demás es la posibilidad de determinación sobre una
amplia gama de concentración, con un sistema único, además el considerable
ahorro de reactivos.

Carbono total

Este es uno de los parámetros más importantes para adquirir conocimientos

sobre la calidad del agua y sus parámetros, sin embargo, es muy complejo y
lleva mucho tiempo. Con el fin de hacer más pequeño el lapso de tiempo Paniz
propuso un sistema turbidimétrico FI con un micro reactor de transferencia gas-
líquido para la determinación de TOC y sus fracciones en muestras
industriales. Las muestras se descomponen en viales de vidrio en un horno
microondas y se inyecta una fracción de CO2 en un gas portador y se bombea
a un micro reactor de vidrio. Este dispositivo fue desarrollado especialmente
para asegurar una reacción cuantitativa con una solución de hidróxido de bario.
Con modificaciones menores, el sistema permite la determinación de diferentes
fracciones de carbono.
Determinación de sustancias orgánicas

Las sustancias orgánicas se pueden determinar turbidimétricamente ya sea

como ion asociados con voluminosos colorantes orgánicos o quelatos
metálicos o como sus quelatos con iones metálicos. La turbidimetría, en la
mayoría de los casos, evita la extracción líquido / líquido, los procedimientos y
aplicaciones de disolventes orgánicos. Los métodos de turbidimetria son más
rápidos y más simple que las metodologías convencionales.

Métodos no cinéticos

Calatayud y Falco desarrollaron un sistema FI turbidimétrico para la

determinación de clorhidrato de levamisol, un isómero levo de hidrocloruro de
tetramisol de la familia de fármacos antihelmínticos, en muestras
farmacéuticas. Se basa en compuestos de asociación iónica y se ocupa de la
cuantificación de levamisol con tetraiodómero (II) como agente precipitante.

Calatayud propuso una metodología FI con detección turbidimétrica basado en

la formación de un par de iones entre clorohexidina y timol azul que evitó el
paso de extracción. Los estudios de clorhexidina-colorante y clorhexidina-Cu
(II) se realizaron para determinar el mejor precipitado para esta determinación.

Con el fin de establecer el precipitado más adecuado para esta determinación,

se evaluaron varios sistemas de tintes de difenilhidramina. También se
estudiaron varias sustancias interferentes.

En 1990, Calatayud y Pastor propusieron un procedimiento FIA con

turbidimetría para la determinación de clorhidrato de amitriptilina en productos
farmacéuticos preparados. El método se basó en la formación de una
asociación de iones compuesto con púrpura de bromocresol y extracción
líquido-líquido.

La dipirona es un polvo cristalino blanco, soluble en agua y etanol, que

presenta propiedades anestésicas y antipiréticas. Se desarrollo por Marcolino
Jr, y otras personas, en el 2005 un procedimiento FI utilizando un reactor de
fase sólida con AgCl inmovilizado en una resina de poliéster para determinar la
dipirona formulaciones farmacéuticas. La determinación se basa en la
reducción de Ag iones del reactor de fase sólida a Ag0 por dipirona. La
suspensión de Ag0 producida se transporta por la solución portadora y
turbidimetricamente se detecta a 425 nm la concentración de dipirona
inyectada es proporcional a la cantidad de Ag0 producida.
Métodos cinéticos

Algunas sustancias orgánicas actúan como inhibidores de la moléculas con

estructuras químicas similares (o un volumen ligeramente componente de
cristal molecular). El efecto inhibidor puede ser asignado a interacciones
selectivas con la molécula extraña en puntos específicos en la cristalización
sustancias que inducen cambios marcados en la tasa de cristalización a
concentraciones muy bajas de inhibidor. Estos procesos han encontrado
aplicación en química analítica, principalmente en la determinación de
aminoácidos Varios estudios relativos a la determinación de diferentes
aminoácidos utilizando la metodología de análisis de flujo turbidimétrico, como
alternativas a las técnicas espectrofotométricas, de cromatografía líquida y de o
detección electroquímica. La alta selectividad y sensibilidad de procesos de
inhibición del crecimiento de los cristales hacen que estos sistemas sean la
resolución enantiomérica de las sustancias inhibidoras.

Ballesteros desarrollo un método turbidimétrico FI para la discriminación de los

enantiómeros L- y D-lisina mediante la acción inhibitoria de la L-lisina sobre la
cristalización del ácido L-glutámico. Un sistema de flujo multidetección
incluyendo un bucle abierto-cerrado y un solo detector permite la determinación
de parámetros cinéticos para la cristalización del ácido L-glutámico en
presencia de 2 - propanol. La L-lisina se puede determinar así en presencia de
D-lisina concentración u otros aminoácidos sin necesidad de una separación
previa. Los método propuesto para la determinación de la L-lisina en los
preparativos.

Hosse, propuso un sistema FI para la discriminación enantiomérica de ácido L-

y D-aspártico que permite la multidetección turbidimétrica de la señal producida
en la cristalización de histidina a partir de una solución. El método se aplicó a la
determinación de L-aspártico en preparaciones farmacéuticas y la resolución
de un ácido racémico de ácido L, D-aspártico.

En 1998 Rodríguez, desarrolló un método turbidimétrico FI para la

determinación secuencial de L- y D-histidina en muestras sintéticas, que
contiene ambos enantiómeros en relaciones de concentración variables. El
método se basó en la velocidad de crecimiento de cristales del ácido L- y D-
glutámico causada por la adsorción de especies extranjeras (de L- y D-
histidina, respectivamente) en un punto específico de la superficie de cristal. El
método se basó en la disminución de la cristalización de oxalato de calcio
velocidad de reacción en presencia de ácido fítico. Esta tasa de cristalización
se ha evaluado a partir del aumento de la turbidez con el tiempo.
Reacciones inmunológicas

La interacción antígeno-anticuerpo es una asociación bimolecular similar a una

interacción enzima-sustrato, con una diferencia importante: no conduce a una
modificación química irreversible en el anticuerpo o en el antígeno.

La primera determinación cuantitativa de proteínas basadas en una

inmuniprecipitina reacción fue reportada por Heidelberger y Kendall en 1935.
La importancia actual de la técnica de inmunoprecipitina para el análisis de
proteínas ha sido enfatizado por el desarrollo de un analizador de
inmunoprecipitina automatizado y el posterior uso de la nefelometría láser para
aumentar la sensibilidad del método. La FIA ofrece una atractiva alternativa de
alta velocidad y bajo la instrumentación existente para el estudio de las
reacciones de inmunoprecipitina.

Las reacciones de inmunoprecipitación utilizando FIA con zonas de fusión

fueron aplicada a la determinación de la inmunoglobulina G (IgG) en suero
muestras de suero y antisuero de IgG humana.

En 1984, un estudio de una reacción modelo de inmunoprecipitina entre

concanavalina A y manano de levadura usando un flujo de parada controlado
por un microordenador zonas de fusión. El sistema descrito podría utilizarse
rutinariamente para inmunoprecipitina en laboratorios clínicos, IgG en suero
humano y también para estudiar aspectos cinéticos de tales reacciones.