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OBJETIVOS:
MARCO TEÓRICO
Los lados de los cuadrados pequeños son, en ambas cámaras, de 0'05 mm. Los
lados de los cuadrados grandes en la cámara de Neubauer son de 0'25 mm. La
altura entre el cubreobjetos y la cámara central es de 0'1 mm.
Normalmente se utiliza la cámara de Neubauer (los cuadrados grandes para el
recuento de leucocitos, y los pequeños para el de hematíes).
Una vez realizado el recuento, los resultados deben expresarse en número de
células por milímetro cúbico.
Donde:
A = número de células contadas
V = volumen del cuadrado (en mm3)
F = factor de dilución
MATERIALES Y MÉTODOS:
MATERIALES:
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Medio de cultivo (Luria – Bertani): Triptona 10 g, extracto de levadura 5 g, NaCl 5
g, agua destilada.
Material de laboratorio:
Probeta (1000 ml), pipeta (10 ml), piceta, balón (1000 ml), papel aluminio, mechero
Bunsen, hipoclorito de sodio 2.5%, alcohol, guantes de látex, micropipetas, puntas,
cámara de Neubauer, eppendorfs, propipeteador.
Equipo de laboratorio: Autoclave, cámara de siembra, shaker, espectrofotómetro,
microscopio, refrigerador.
ACTIVIDADES:
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X X
X X
Gráfica las curvas de crecimiento: Para realizar las curvas de crecimiento tomar
los datos de densidad óptica y de recuento celular. Las gráficas realizarlas en Excel
con los siguientes criterios: Tiempo vs. Densidad óptica (en escala normal y en
escala logarítmica), Tiempo vs. Recuento celular (en escala normal y en escala
logarítmica) y Densidad óptica vs. Recuento celular.
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CUESTIONARIO
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PRÁCTICA Nº 2
OBJETIVOS
MARCO TEÓRICO:
Gram parte de los principios aplicados al cultivo de bacterias son extrapolables a los
cultivos celulares de los eucariotas. De hecho, bastantes técnicas de trabajo con
bacterias han sido aplicadas al cultivo de eucariotas. Sin embargo, es frecuente que
las células eucariotas pierdan parte de sus propiedades cuando son extraídas de
los órganos que se encuentran y que su proliferación requiera la utilización de
condiciones especiales, incluyendo los cultivos histotípicos.
Las poblaciones de células, tanto procariotas como eucariotas, presentan un tipo de
crecimiento característico llamado crecimiento exponencial. Este tipo de
crecimiento esta muy bien estudiado y modelizado, y en el pueden diferenciarse
varias fases: latencia, exponencial, estacionaria y de muerte.
C3.72H6.11O1.95N0.61S0.017P0.035K0.056
MATERIALES Y MÉTODOS:
MATERIALES:
Cepas: Sacharomyces .
Medio de cultivo YPD (Sherman et ál. 1985), cuya composición es la siguiente
Reactivos g/l
Extracto de levadura 10 g/l
Proteosa peptona 20 g/l
Glucosa 20g/l
Material de laboratorio: Probeta (1000 ml), pipeta (10 ml), piceta, balón (1000 ml),
papel aluminio, mechero Bunsen, hipoclorito de sodio 2.5%, alcohol, guantes de
látex, micropipetas, puntas, cámara de Neubauer, eppendorfs, propipeteador.
Equipo de laboratorio: Autoclave, cámara de siembra, shaker, espectrofotómetro,
microscopio, refrigerador.
ACTIVIDADES
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con papel aluminio y se autoclava a 120º C (1 atm de presión) durante 20 minutos.
Se guarda en el refrigerador a 4º C.
Donde:
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A = número de células contadas
V = volumen del cuadrado (en mm3)
F = factor de dilución
CUESTIONARIO
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¿De que sirve el conocimiento de elaboración de la curva de crecimiento en la
Ingeniería Genética?
BIBLIOGRÁFIA:
Bothwell AL, Yancopoulus G.D., Frederick W.A. Methods for Cloning and Analysis of
Eukaryotic Genes. 1990. Boston: Jones and Bartlett Publishers, 1990.
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