MEDIOS DE SOPORTE.

La muestra debe situarse en o sobre un medio soporte, principalmente para

evitar perturbaciones mecánicas y corrientes de convección durante la
separación.

 Medios de baja fricción: La muestra queda sobre la superficie y avanza

a lo largo de ella, con escasa fricción, por lo que el mecanismo principal
de separación es la magnitud de la carga de cada componente de la
muestra.
 Medios de alta fricción: Estos medios están formados por polímeros que
forman una malla, matriz o red tridimensional a través de la cual deben
avanzar las moléculas de la muestra, que queda embebida en el medio
de soporte electroforético.

1. Agarosa: polisacárido, producto purificado de algas rojas.

 La agarosa es apropiada para electroforesis porque es
prácticamente neutra, se puede combinar con la transferencia de
Southern, PCR, y fluorescencia.
 La cadena se compone de residuos alternantes de D-galactosa y
3,6-anhidro-L-galactosa, con cadenas laterales de 6-metil-D-
galactosa.
 La agarosa adopta una estructura tridimensional de doble hélice
cuya cavidad central es suficientemente grande como para
acomodar agua. Estas cadenas forman un gel estable usado como
matriz.
Al preparar el gel, la agarosa y el buffer se calienta hasta disolver la agarosa.
La solución se vuelve en un contenedor hasta que se enfría y se gelifica, luego
de cargada la muestra el gel entero se sumerge en una solución buffer y se
aplica un campo eléctrico para realizar la corrida.
2. Poliacrilamida
Los geles de poliacrilamida constituyen un excelente medio de soporte
para separaciones electroforéticas, dado que reúnen una serie de
propiedades idóneas: transparencia, elasticidad, porosidad controlable y
compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos.
 Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerización de la
acrilamida por acción de un agente entrecruzador ('cross-linking'),
la bis-acrilamida en presencia de un iniciador y un catalizador.
Como iniciador se suele utilizar TEMED (N,N,N,N'-
tetrametilnediamina) y como catalizador el ión persulfato (S2O8 - )
que se añade en forma de persulfato amónico.
 La velocidad de polimerización viene determinada por la
concentración de persulfato (catalizador) y TEMED (iniciador), el
TEMED causa que el persulfato de amonio produzca radicales
libres que a si vez causan la polimerización.
 El porcentaje total de acrilamida/bisacrilamida determina el rango
de separación del gel. Habitualmente los geles se denominan en
función del % de acrilamida/bisacrilamida que contienen. Así, la
mayoría de las proteínas se separan bien en el rango de 5 a 10%.
Un menor porcentaje (mayor tamaño de poro) es mejor para
separar proteínas de gran tamaño.
 Existen dos tipos de geles, el de concentración (Es un gel de malla
abierta, que tiene como finalidad concentrar la muestra en una
banda angosta antes de que entre en el gel de separación) y el de
la separación.

 En función del estado de las proteínas (nativo o desnaturalizado) a

lo largo del proceso electroforético éstas se clasifican en
electroforesis nativas o desnaturalizantes:
o Una electroforesis desnaturalizante, la más común, es la
que somete a las proteínas a migración asegurando la
completa desnaturalización (pérdida de la estructura
tridimensional). En esta situación la migración es
proporcional a la carga y al tamaño de la molécula pero no
 a su forma. El agente desnaturalizante más empleado es el
sodiododecilsulfato o SDS, un detergente.
o Una electroforesis nativa es la que somete a las proteínas
a migración sin desnaturalización. En esta situación las
proteínas migran en función de su carga, de su tamaño y de
su forma. Además, se mantienen en ciertos casos las
interacciones entre subunidades y entre proteínas,
separándose los complejos. Los sistemas tampón (buffer)
empleados en estos casos son: tris-glicina (rango de pH 8.3
a 9.5), tris-borato (rango de pH 7.0 a 8.5) y tris-acetato
(rango de pH 7.2 a 8.5).
La electroforesis en geles de poliacrilamida en presencia de SDS (SDS-
PAGE) Permite obtener una estimación de la masa molecular de las
proteínas separadas – técnica más usada.
3. Electroforesis en papel.

es una técnica muy util por su facilidad y su rapido desarrollo, esta se

emplea en la separación de sustancias de bajo peso molecular como
proteínas (aminoácidos).

No requieren preparación, tampoco tiene carga que interfieran con la

separación de la muestra. La muestra se aplica directamente al papel.
Desventajas

 Si el papel es fino, se puede desgarrar con facilidad.

 Si el papel es grueso, las bandas se distorsionan.

 Se produce interacción entre las proteínas y los grupos hidroxilos

de la celulosa del papel, por lo tanto, la migración se frena.

 Calidad del papel: 90% de celulosa absorción de agua y

conductividad eléctrica.

 Efecto electro osmótico ánodo-cátodo

4. Electroforesis en acetato de celulosa.

Se usa para la separación y caracterización de proteínas y otras
moléculas. El soporte consiste en tiras delgadas de acetato de celulosa,
con propiedades de adsorción mínimas, por lo que se evita la formación
de colas y los solutos pueden ser separados en bandas bien definidas.
Otras ventajas son:
 La separación es muy rápida
 Se pueden analizar cantidades de muestra pequeñas
 Las tiras pueden hacerse transparente.
 La tira se puede disolver, recuperando los componentes separados
 Presentan un fondo bajo cuando se separan compuestos
radiactivos

Entre sus desventajas figuran que captan poca agua y son más
susceptibles a la evaporación que el papel. Son también más susceptibles
al flujo electro-endosmótico.
Bibliografía

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https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/6798/mod_resource/c
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3. Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida [Internet]. [cited

2019 Mar 4]. Available from: https://bioquibi.webs.ull.es/practicas/4.pdf

4. Electroforesis de proteinas de suero en acetato de celulosa. [Internet].

[cited 2019 Mar 4]. Available from:
http://www3.uah.es/bioquimica/Sancho/farmacia/practicas/electroforesis.p
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