INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL
INTERDISCIPLINARIA DE
BIOTECNOLOGÍA

Ingeniería Enzimática
TEORÍA

Tarea
MÉTODOS DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
4BV1

Alumno:
Solache López Humerto Sared

Profesor:
Díaz Contreras Raúl Ricardo

18 de marzo de 2019

Segundo Parcial
 Índice

Introducción…………………………………………………………………………. 3
Método colorimétrico………………………………………………………………. 4
Método Hidrolisis…………………………………………………………………... 4
Método variación de Ph…………………………………………………………… 4
Método coagulación de la leche…………………………………………………. .5
Anexos de métodos………………………………………………………………... 6
Conclusión…………………………………………………………………………… 7
Bibliografía…………………………………………………………………………... 7
 Introducción

Medición de la actividad enzimática

El estudio de la actividad enzimática implica el análisis de la velocidad de actuación de la enzima,
conocida con el nombre de cinética enzimática. La velocidad de catálisis de una enzima podría
determinarse como velocidad a la que se forma el producto, o como velocidad a la que desaparece el
sustrato.
La concentración de sustrato afecta de manera muy importante a la velocidad de la enzima. Cuando
se mantiene constante la concentración de la enzima, se comprueba que al aumentar la concentración
de sustrato la velocidad de la enzima crece linealmente, disminuyendo el incremento paulatinamente
hasta alcanzar una meseta que corresponde a un valor de velocidad que es la velocidad máxima.
La actividad catalítica de las enzimas se mide en condiciones estándares, con concentración saturante,
y temperatura de 37ºC. La unidad de actividad enzimática (U) se define como la cantidad de enzima
que cataliza la formación de 1 µM de producto por minuto. Las medidas de concentración de enzima
que en medios naturales son del orden de 10-8 a 10-12 M pueden también expresarse como unidades
enzimáticas por unidad de volumen (U/ml).
Para la medición de la actividad de una enzima hay diferentes métodos que serán seleccionados de
acuerdo a la necesidad de la situación, así como el contexto de la misma, ya que la selección de un
método puede ir en función de los recursos disponibles y del tiempo en el que se necesite un resultado.
 Métodos para medición de la actividad enzimática
Colorimétrico TCA Y BAPA

Método colorimétrico
Se basa en el cambio de absorción (en el rango visible) de una reacción después de una reacción
química.
Precipitados de TCA
Se trata en hidrolizar un sustrato como la caseína, en seguida llevar a precipitado a la proteína con
TCA (ácido tricloro acético), una vez formado el precipitado se realiza el filtrado, se lee el sobrenadante
(aminoácidos) por espectofotometría a 280 nm.
BAPA
El BAPA (Benziol-arginina-paranitroanilina) en presencia de proteasa se descompone, obteniéndose
p-nitroanalina que tiene una coloración amarilla. El cambio de la coloración y la intensidad depende de
la actividad enzimática.
Hidrólisis (BAEE)
Consiste en la hidrólisis de un sustrato sintético BAEE (N-Benzoil, L-arginina-Etil éster hidroclorhídrico)
es un método titulométrico. Es un método titrimétrico.
Métodos titrimétricos
Se efectúa la medida del volumen de una disolución de concentración conocida que es necesario para
consumir exactamente el constituyente buscado, o con otra sustancia equivalente químicamente a él.
Estos métodos implican una reacción estequiométrica definida. Pueden subdividirse por el tipo de
reacción puesta en juego (de neutralización, de pre-cipitación, redox, etc.) y por los métodos de
indicación del punto final (indi-cadores coloreados, métodos eléctricos).
Por variación de Ph
Este método lo referimos a la variación del pH en presencia de la actividad enzimática. Permite calcular
una actividad mayor o menor de una enzima, sin embargo, no se puede obtener una relación
linealizada para el cálculo cuantitativo.
Para la realización de este método, considero que podría realizarse en un medio cuyo Ph debería ser
llevado a neutro, aunque de igual manera existe el hecho de que, aunque la variación del Ph no
representa directamente una afectación en la actividad enzimática. Sí es un hecho que el Ph modifica
la concentración de protones que pueden alterar la estructura de la enzima y del sustrato, y de igual
manera pueden actuar como substrato o como producto en la reacción, en estos casos, los protones
afectan la velocidad de la reacción.
Cabe mencionar que un cambio brusco de Ph puede alterar el carácter iónico de los grupos amino y
carboxilo en la superficie proteica, afectando de esta manera a la actividad catalítica de una enzima.
 Coagulación de la leche (Balls-Hoover)
Para entrar en tema con este método se hablará de actividades de la enzima papaína y son las
siguientes:
Endopeptidasas
Aminopeptidasas
Dipeptidil peptidasas
Exo peptidasas
Endo peptidasas
La función de la papaína es la ruptura de enlaces peptídicos a través de una triada catalítica con una
cistina deprotonada. Es una enzima relativamente resistente al calor, con un rango de temperatura
óptima de 60-70 °C.
El método para la medición de la actividad enzimática se enfoca en la capacidad de la enzima en
coagular la leche. En un laboratorio podríamos seguir los siguientes pasos, teniendo en cuenta en la
variación en la aplicación del método sería interesante.
La determinación de realiza con leche deshidratada, el medio en cual se lleva a cabo la reacción es
agua, una vez agregada la leche deshidratada y la enzima papaína, se agita bien la muestra y se toma
el tiempo en el cual la leche pasa a una etapa a de coagulación.

Para obtener una mejor referencia a estos métodos o facilitando su observación se obtuvo por
bibliografía las siguientes actividades enzimáticas medidas por algunos de los métodos ya
mencionados.
 Conclusión
Se Investigaron los diferentes métodos para la determinación de la actividad enzimática, concluyendo
con que para la selección de un método dependerá de la precisión buscada, así como de la precisión
permitida por los recursos disponibles, en cuestión de tiempo, podría aplicar el mismo caso, sin
embargo, toda medición de la actividad enzimática requiere tiempo para que la actividad se lleve a
cabo correctamente hasta el punto que pueda mostrar resultados dentro del rango de lo confiable.
De igual manera la selección de la enzima a evaluar debe afectar en la selección del método ya que
las condiciones para su actividad deben entrar en lo “óptimo”, sin embargo, la medición de la actividad
enzimática no siempre implicará que se lleve a cabo en su mejor medio posible de actividad. Podría
querer obtener resultados de la actividad enzimática en sus peores condiciones de actividad.

Bibliografía
http://www.unne.edu.ar/unnevieja/Web/cyt/cyt/2000/8_exactas/e_pdf/e_021.pdf
http://navarrof.orgfree.com/Docencia/QuimicaAnalitica/Analitica3.htm
Libro:
Emilio H. (1986) BIOQUÍMICA E. HERRERA. Madrid España
Nueva Editorial Interamericana.