MICROBIOLOGÍA DE COSMETICOS

Javier Candelo Montaño

Jhosed Yamid Bastidas
Diego Alejandro Alzate
Javiercandelo1997@gmail.com
Universidad Santiago de Cali, facultad de ciencias básicas, Laboratorio de
Microbiología general
Santiago de Cali 28 Mayo 2017

El trabajo en un laboratorio de Microbiología de cosmeticos implica la exposición

a microorganismos y algunos pueden ser potencialmente patógenos. La
aplicación correcta de las reglas de seguridad e higiene determina la seguridad
de las personas que se encuentren en el laboratorio

Utilizar siempre bata de laboratorio, esto evitará que en un momento dado

ciertas sustancias químicas entren en contacto directo con la piel y con las
prendas de vestir.

El uso de guantes, tapabocas y lentes de protección es opcional en la mayoría

de los casos, pero es obligación emplearlos si se va a manipular muestras
biológicas potencialmente peligrosas para la salud.

Cuestionario
Para que se hacen las diluciones
Que características tienen los agares DRBC, Manitol, Mc Conkey, Centrimide y
APC y porque son selectivos
Que es un medio de cultivo y qué características tiene
Porque el medio de cultivo Fluorocult permite resultados con fluorescencia y
porque debe observarse con luz ultravioleta
Cuál es el fundamento de las diluciones

INTRODUCCIÓN
La microbiología es la ciencia que estudia los microorganismos, seres vivos muy
pequeños que están por debajo del poder resolutivo del ojo humano. Las bacterias
representan más del 90% de todo el material vivo de la Tierra. Para conseguir su
multiplicación en el laboratorio es preciso aportar determinados nutrientes y
condiciones ambientales para cada tipo particular.
La razón principal por la que es importante determinar los efectos en los
cosméticos y de la acción de estos microorganismos en la afectación de la salud,
siendo causante principal de muchas enfermedades
Es supremamente importante conocer los procedimientos y técnicas que se
emplean para determinar la incidencia de los microorganismos en los cosmeticos,
por lo que el conocimiento y la aplicación práctica de métodos para la detección
rápida de microorganismos es el objetivo del curso teniendo en cuenta que hoy en
día, es la forma más rápida de obtener información que permitan la toma de
decisiones
Cuando se toman las muestras de los cosméticos a analizar hay varios factores
que se deben tener en cuenta para evitar la contaminación o que pueden afectar
los resultados en un recuento; tales como temperatura de incubación, método
empleado, pero lo que asegura buenos resultados, es el cuidado que se tenga
para obtener y preparar una buena muestra que servirá como inoculo preciso y fiel
reflejo del número de microorganismos presentes.

OBJETIVOS:
 Analizar el papel y significado de los microorganismos en la naturaleza y en
los cosmeticos
 Evaluar los riesgos de la contaminación microbiológica en un cosmetico
 Aplicar los métodos más usados en microbiología para el crecimiento y
aislamiento de microorganismos
 Realizar las pruebas bioquímicas en microbiología para la identificación de
cepas conocidas de enterobacterias para lograr una correcta identificación
de género y especie.
.

PREPARACIÓN Y DILUCIÓN DE LAS MUESTRAS DE COSMETICOS:

MATERIALES:
 Cajas Petri
 Tubo de ensayo con tapa de rosca
  Micro pipeta con puntas estériles
 Aza estériles
 Baja lenguas estéril
 Probeta
 Autoclave
 Pinza
 Espátula estéril.
 Medio: Agar Plate Count
 1g Muestra para análisis
 9ml de agua peptonada+Twin80


METODOLOGIA:
En las disoluciones utilizadas para evaluar presencia ausencia: se tiene en cuenta
la presentación del cosmético se va a usar si es sólido o líquido. A partir de esto
las disoluciones se hacen con 1g de cosmético en 9ml de agua peptonada y twin
80, en caso tal que el cosmético sea grasoso usar 1ml de aceite mineral y 1ml de
miristato de isopropilo
En materiales estériles solo se debe introducir el material en 9ml de agar Cts.
Para hacer disoluciones de agua residual se utiliza el agar florocult en 9 ml de este
agar añadir y 100ml de la muestra de agua

Para validar soluciones estériles se utiliza el Caldo de cultivo Tioglicolato para

anaerobios y Tripticasa soya para aerobios en esta prueba se utilizan dos tubos de
ensayo para cada caso y se agrega 1 ml de muestra

RECUENTOS MESO AEROBIOS

OBJETIVO:
 Determinar la presencia de microorganismo meso aerobios.
 Emplear el recuento por Ufc/gr de mesoaerobios.
 Adquirir destreza para la siembra en profundidad.

MATERIALES:
  Medio: Agar Plate Count
 Cajas Petri
 1g Muestra para análisis
 9ml de agua peptonada+Twin80
 Tubo de ensayo con tapa rosca

El intervalo de temperaturas en el que crecen los microorganismos es muy amplio:

de – 34º C a > 90º C. En función de esto se encuadra a los microorganismos en
tres grupos
Los que crecen entre 20 – 30º C, con una temperatura óptima de crecimiento está
entre 30 – 40º C: mesófilos

METODOLOGÍA:
En un tubo de ensayo agregar 9ml de agua peptonada+Twin80, luego añadir 1g
del cosmético. Una vez hecha la dilución añadir 1000 µl de esta en una caja Petri
estéril y enseguida añadir el medio de cultivo para el análisis. Se puede agitar
haciendo círculos con el fin de esparcir la muestra por el agar este proceso se
denomina siembra en profundidad

RECUENTO ESTIMADO POR TECNOLOGIA STANDARD

Un recuento bajo de aerobios mesófilos no implica o no asegura la ausencia de
patógenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa
presencia de flora patógena.
Un recuento elevado puede significar:
 Excesiva contaminación de la materia prima
 Deficiente manipulación durante el proceso de elaboración
 La posibilidad de que existan patógenos, pues estos son mesófilos
 La inmediata alteración del producto
El recuento de mesófilos nos indica las condiciones de salubridad de algunos
cosméticos, es decir se evalúa la presencia de microorganismos presentes en el.
El objetivo de realizar este análisis es conocer el número de microorganismos
aerobios mesófilos en el cosmético, un método de recuento en placa y siembra en
profundidad. Los recuentos se pueden hacer por dos métodos, uno es el
tradicional, que es contando la cantidad de colonias por el NMP (número más
probable) en la caja Petri que es una forma de obtener datos cuantitativos a partir
de las disoluciones y el otro método es por placas de petrifilm que es un medio de
cultivo listo para ser empleado, un agente gelificante soluble en agua fría, y un
tinte indicador de color rojo que facilita el recuento de las colonias. Las Placas
Petrifilm AC se utilizan para el recuento de la población total existente de bacterias
aerobias en productos y superficies. (ASESORES)

PRACTICA DE RECUENTO
Se utiliza aquella dilución donde haya crecimiento bacteriano que contenga entre
30 y 300 colonias.

Cuente las colonias y el número encontrado deberá multiplicarlo por el reciproco

de Ia dilución que utilizo para hacerlo.

Pueden presentarse ciertas variaciones en los cultivos realizados. Lo importante

es saber que cuando se puedan encontrar diluciones que contengan entre 30 y
300 colonias si el recuento es preciso, se informa como Recuento Standard.
(Bejarano)
Normas para interpretar y reportar el recuento estándar en placa

EXPRESION DE LOS RESULTADOS:

El recuento bacteriano se debe expresar con 2 dígitos y el resto en potencias de
10. Como no siempre el conteo de colonias produce valores como por ejemplo 10-
20-50-8O-300 etc. es necesario aplicar algunas correcciones.
Con la finalidad de convertir el número hallado en uno con 2 dígitos. Ejemplos:
Si el recuento se realizó en la dilución 10-3 y fue de 138 colonias, el tercer dígito
por ser mayor que 5 permite adicionar 1 unidad al 2o. o sea que el recuento seria
190.000= 14 x 104.
Si el recuento fue de 124, por ser el 3o dígito menor que 5 se anula y se expresa
120.000= 12 x 104.
PRENCIA AUSENCIA (HONGOS, ETAPHILO, COLIFORMES Y PSEUDOMONA)

OBJETIVO
 Determinar y evaluar la presencia de microorganismos en los cosméticos
 Aprender técnicas que permiten evaluar la contaminación de los cosméticos

MATERIALES:
Mechero
Cajas de Petri
Asas de vidrio estériles

METODOLOGÍA:

Se realiza siembra en superficie

Este proceso se caracteriza porque durante la incubación las colonias crecen en la
superficie del agar.
1. Se utilizan placas previamente preparadas que contienen el medio de cultivo
solidificado (unos 15 mL/placa).
2. Se deposita en la superficie del agar 1 mL de la muestra o de cada dilución.
3. Luego de realizada la descarga de la muestra, se procede a extenderla sobre
toda la superficie de las placas, usando un asa de Drigalski estéril.
4. Esperar 2 ó 3 minutos a que se seque el inóculo.
5. Se llevan las placas a incubar y se procede de la misma manera que en el caso
anterior.
Para hongos se utiliza el agar DRBC
Para staphylococus agar Manitol
Para coliformes agar Mc Conkey
Para Pseudomonas agar Centrimide
Para mesoarobios agar Apc
 PRUEBA PARA SOLUCIONES (COLIFORMES MEDIO FLOROCULT)

OBJETIVOS
 Aprender a realizar pruebas que permiten identificar microorganismos en
soluciones
 Aprender a identificar la E.Coli mediante luz ultravioleta
 Comparar las diferentes pruebas y generar un criterio que permita escoger
en que caso debe utilizarse cada una

MATERIALES:
Mechero
Encendedor
Luz UV
Solución estéril
Caldo de cultivo Fluorocult

METODOLOGÍA:
Se utilizan 90 ml de caldo de cultivo Florocult
Agregar 10 ml de agua (muestra)
En 24 horas se analiza

EXPRESION DE LOS RESULTADOS

Un cambio de color a azul verdoso significa presencia de coliformes
En caso de ser positivo para coliformes se observa con luz ultravioleta si es
fluorescente significa que hay presencia de E. coli

PRUEBAS PARA MATERIALES ESTERILES EN CTS

OBJETIVOS
  Conocer el fundamento de las pruebas para materiales en el laboratorio
 Utilizar y conocer técnicas que permiten evaluar la esterilidad de soluciones
 Comparar las diferentes pruebas y generar un criterio que permita escoger
en que caso debe utilizarse cada una

MATERIALES:
Material estéril
Pinzas y tijeras esterilizadas
Mechero
Encendedor
Caldo Tripticasa de soya

METODOLOGÍA:
Se toma el caldo Tripteina soya en un envase con tapa, puede ser de jugo hit, se
flamea la boca del envase
Se agrega el material estéril con mucha precaución para no tocar el material
Flamear la boca del envase y tapar

EXPRESION DE LOS RESULTADOS:

Un cambio en la presentación del medio o turbiedad es una respuesta negativa
Si no hay cabios la esterilidad es positiva

PRUEBAS PARA SOLUCIONES ESTERILES

OBJETIVOS
 Comprobar la esterilidad de soluciones
 Utilizar y conocer técnicas que permiten evaluar la esterilidad de soluciones

  Comparar las diferentes pruebas y generar un criterio que permita escoger
en que caso debe utilizarse cada una

MATERIALES
4 Tubos de ensayo
Micro pipeta con puntas estériles
Mechero
Encendedor
Medio de cultivo Tioglicolato
Medio de cultivo Tripticasa de soya

METODOLOGÍA:
Se toman 4 tubos de ensayo 2 con medio de cultivo tioglicolato y dos con
tripticasa de soya
Se toma 1 tubo con medio tioglicolato y 1 con medio tripticasa de soya
Agregar 1 ml de muestra a cada tubo y encubar a 25 °C
Tomar otros dos tubos uno con medio tioglicolato y otro con medio tripticasa de
soya
Agregar 1 ml de muestra a cada uno y encubar a 37°C

RESULTADOS
Se observa el tubo de ensayo se identifica como negativa la presencia de gas o se
presenta turbio

EXPRESION DE LOS RESULTADOS:

En una evaluación de presencia ausencia los resultados se expresan como
positivos o negativos
Referencias

(s.f.). Obtenido de
https://www.invima.gov.co/images/pdf/intranet/dirdecosmeticos/capacitaciones_entren
amientos/Presentaciones/Junio%202013/LIMITE%20MICROBIANO%20LMM%20-
%20INVIMA.pdf

aerobios, P. P. (s.f.). Obtenido de http://multimedia.3m.com/mws/media/444944O/petrifilm-

aerobic-count-plate-interpretation-guide-spanish.pdf

ASESORES, A. C. (s.f.). ANÁLISIS DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESÓFILOS. Recuperado el 26

de 05 de 2017, de http://www.analizacalidad.com/docftp/fi189arm2004-4(2).pdf

Bejarano, L. D. (s.f.). Guia de laboratorio de microbiologia II.

INVIMA, I. n. (s.f.). Obtenido de

https://www.invima.gov.co/images/pdf/intranet/dirdecosmeticos/capacitaciones_entren
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Rugama, F. A., & Castillo, Y. (s.f.). Un enfoque práctico para la inocuidad alimentaria. Recuperado
el 27 de 05 de 2017, de https://avdiaz.files.wordpress.com/2010/02/documento-
microbiologia.pdf