Pruebas de identificación:

Esquema de trabajo para la identificación de una

Pruebas de Identificación cepa bacteriana:

de Bacterias 1. Obtener un cultivo puro

2. Gram de la bacteria en estudio

Se determina:

Forma de la bacteria
Forma de agrupación
Presencia de esporas y otras características morfológicas de
Claudia Mérida interés

Cultivo de la bacteria para su aislamiento

Determinar las características nutricionales

Pruebas de identificación: Pruebas de identificación:

Esquema de trabajo para la identificación de una Esquema de trabajo para la identificación de una
cepa bacteriana: cepa bacteriana:

4. Realización de pruebas primarias:

Determinar el género, grupo de géneros o en algún caso familia a
Realización de otras pruebas (secundarias):
la que pertenece una bacteria aislada.
Entre estas pruebas se encuentran: A efectos de llegar a especie. Estas dependerán del género
Gram o familia determinado.
Catalasa Entre estas se encuentran:
Oxidasa
OF producción de pigmentos
Fermentación de glucosa producción de indol
Esporas
Crecimiento en aerobiosis y anaerobiosis
producción de coagulasa, etc.
Movilidad

1
Pruebas de identificación:

Bioquímicas
Pruebas de Identificación
Serológicas

Automatizadas (Pruebas bioquímicas) BIOQUÍMICAS

Métodos Moleculares (PCR)

Pruebas bioquímicas: Pruebas bioquímicas:

Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente Triple azúcar Herro (TSI)
utilizadas para diferenciar bacterias. Agar Lisina Hierro (LIA)
Sulfuro, Indol, Movilidad (SIM)
Estas pruebas se fundamentan en demostrar si Movilidad, Indol, Ornitina (MIO)
el microorganismo es capaz de fermentar Movilidad, Indol, Urea (Ureasa) (MIU)
azúcares, la presencia de enzimas, la
degradación de compuestos, la producción de Citrato
compuestos coloreados, entre otras. Voges-Proskauer
Rojo de metilo

2
 Pruebas de identificación Pruebas de identificación
API API
Creada en 1970, la gama API ha revolucionado completamente
el campo de la bacteriología Actualmente, la gama API es una de las gamas más
amplia disponible.
La gama API® introdujo una versión estandarizada y
miniaturizada de las técnicas existentes, incluidas las complejas
de realizar y de leer Incluye 15 sistemas de identificación que cubren
prácticamente todos los grupos de bacterias y más de
Con API®, la identificación bacteriana se volvió simple, rápida y 550 especies diferentes.
fiable

API® 20 E fue el primer sistema de identificación desarrollado Las nuevas galerías desarrolladas permiten identificar
que asociaba una galería de pruebas bioquímicas y una base de
datos bacterias cuya importancia aumenta paulatinamente
como:
El concepto innovador de API® también supuso el desarrollo de Corynebacterias, Campylobacter, Listeria, Neisseria,
un método de cálculo, conocido como la identificación numérica .
Este método ha permitido el desarrollo de programas , que hacen
la identificación más rápida y más precisa

3
 Pruebas de Identificación

SEROLÓGICAS

Pruebas Serológicas de Identificación de

Pruebas de identificación: Bacterias
Esquema de trabajo para la identificación de una cepa
bacteriana:
Las pruebas de aglutinación con partículas de látex
Para realizar identificaciones más rápidas, o cuando las pruebas han sido diseñadas para la identificación bacteriana y
bioquímicas no son concluyentes, se recurre al uso de antisueros
específicos caracterización de los mecanismos de resistencia más
frecuentes en la práctica clínica
Se usan sueros polivalentes y para la caracterización serológica se
usan sueros monovalentes dentro de cada tipo de antígeno
Son aplicables tanto sobre aislamientos en medios de
Existen en el comercio antisueros para caracterización de: cultivo como sobre muestra clínica directa
Salmonella sp
Shigella sp. Tienen una afinidad específica para los
E.coli
Haemophillus sp., etc.
microorganismos

4
Pruebas Serológicas de Identificación de
Bacterias

Pruebas de identificación

AUTOMATIZADAS
MICROSCAN

Preparación del panel

MicroScan PANELES CONVENCIONALES POSITIVOS Y NEGATIVOS

Es un equipamiento semiautomático para el diagnostico en Prepare el inóculo ajustado a 0.5 McFarland

microbiología, que permite determinar la identificación a nivel de
especie y la sensibilidad antimicrobiana in vitro de bacterias
aisladas a partir de muestras clínicas. 25 ml
Marca: Auto Scan-4, Dade Behring- Microscan 100 µl
Pluronic - D Agregue aceite si es necesario

Se utilizan con los paneles MicroScan que contienen medios, 3 ml Agite

diluciones seriadas de antibióticos y reactivos seleccionados salina Usando el RENOK
estéril
Vacíe a: Inocular/
Las concentraciones inhibitorias mínimas y las identificaciones Rehidratar el
bacterianas se determinan por cambios de color (lectura panel con 115 µl por pozo
espectrofotometrica de absorbancia), o grado de turbidez (lectura
de la absorbancia) en los pocillos de los paneles MicroScan Inoculador

Botella de Prompt
El Autoscan-4 lee individualmente el panel inoculado con la Incubar
suspensión bacteriana brindando en cinco segundos la
identificación del microorganismo y su susceptibilidad a una
amplia gama de antibióticos

5
 PREPARACIÓN DEL INÓCULO CON
PROMPT INOCULACIÓN DE PANELES

Método estandarizado
• 5 x10(5) UFC/mL 1) Desembolsar el 2) Imprimir y pegar
el código de 3) Tomar la colonia 4) Un prompt para ID y
Panel sensibilidad.
barras al panel
• Aprobado por la FDA

Más fácil que crear el 0.5

McFarland

5) Vaciar 6) Preparar una 7) Usar el Renok para 9) Cargar el panel

suspensión placa de pureza inocular panel
bacteriana al 8) Dispensar aceite
inoculador mineral

Los resultados de un
panel Positivo,
LECTURA DEL PANEL-REACCIONES BIOQUÍMICAS después de la
incubación de 18 horas
y la adición de
reactivos.

La identificación de las bacterias se basa en la actividad metabolítica,

los tipos de pruebas bioquímicas que producen son predecibles la
mayoría de las veces
Los pozos del panel contienen medios para la identificación: substratos
y/o inhibidores del crecimiento, que, dependiendo de las especies de
bacterias presentes, exhiben cambios de color (reacciones
bioquímicas cromogénicas) o incrementan la turbidez, después de la
La parte superior del panel contiene 27 pozos con pruebas
bioquímicas y nutrientes para que la bacteria crezca.
Los resultados de las pruebas bioquímicas en cada pozo se
usan para identificar el microorganismo.
Si una bacteria produce un producto o una enzima en particular,
el color del pozo cambia.

incubación

Los instrumentos automatizados leen las reacciones en el panel,

comparando los valores de los controles almacenados, envían los
datos y luego los analizan
Los resultados de un panel
Negativo después de la
Los paneles también pueden leerse manualmente incubación de 18 horas y la
adición de reactivos.

6
 Reacción en Cadena de
Pruebas de Identificación
la Polimerasa (PCR)
Métodos Moleculares
PCR

Reacción en Cadena de la Reacción en Cadena de la

Polimerasa Polimerasa

La reacción en cadena de la polimerasa, Con esta metodología se pueden producir

cuyas iniciales en inglés son PCR en el laboratorio múltiples copias de un
(“Polymerase Chain Reaction"), fragmento de ADN específico
es una técnica que fue
desarrollada por
Kary Mullis en 1986

7
Reacción en Cadena de la Reacción en Cadena de la
Polimerasa Polimerasa

Este proceso se La detección del producto de la Reacción en Cadena

lleva a cabo en un de la Polimerasa se realiza normalmente mediante
corrido electroforético.
equipo llamado
termociclador.

Este aparato realiza

los ciclos en los
tiempos y
temperaturas
programadas de
forma exacta.

8
 Reacción en Cadena de la Reacción en Cadena de la
Polimerasa Polimerasa

Electroforesis: PCR en tiempo real:

Preparación automatizada de muestra

Por ejemplo: Carga Viral de VIH en COBAS ampliprep

Reacción en Cadena de la
Polimerasa

PCR en tiempo real:

Amplificación y detección