Extracción y amplificación del ácido desoxirribonucleico (ADN) a

partir de una muestra celular

Resumen: En el presente trabajo se tubo como objetivo principal realizar la extracción de ADN, ya que
este es un ácido nucleico responsable de codificar toda la información genética que compone a un
organismo viviente, para ello se uso la técnica de PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) esta es
una técnica de amplificación selectiva de un fragmento de DNA que aumenta el número de copias de una
secuencia definida con la finalidad de su estudio y caracterización .

1. Introducción
En la actualidad, el estudio de la variación
genética, entre las poblaciones se plantea
mediante marcadores moleculares, segmentos
de ADN son o sin función conocida, que
proporcionan información sobre la variación
alélica y permiten distinguir individuos, para
explicar procesos ecológico-evolutivos
(Schlötterer, 2014). Estos marcadores se
obtienen con técnicas como PCR (Polymerase
Chain Reaction) y una secuenciación, lo cual
hace posible analizar la variación en la molécula
del ADN con un detalle sin precedentes
(Hudson, 2015; Schlötterer, 2014). La
aplicación de técnicas moleculares inicia con la
extracción de ADN; y la obtención exitosa de
datos confiables y reproducibles depende de la
extracción de ADN puro e íntegro.
El proceso de extracción de ADN, constituye el
primer paso para llevar a cabo diferentes
estudios que involucren a la biomolecular de
ADN procedente de cualquier organismo vivo.
Los pasos necesarios para la correcta extracción
del ADN por medio de un procedimiento
químicos son:
1. Lisis de las células o virus. Las sales
caotropicas ayudan a romper la
estructura tridimensional de
macromoléculas como las proteínas o
los ácidos nucleicos consiguiendo sus
desnaturalización. La adición de un
detergente como SDS es necesaria a
menudo para eliminar las membranas.
2. Degradación de la fracción proteica
asociada al ADN. Se consigue
mediante la adición de una proteasa. La
fracción proteica puede precipitarse
mejor con la ayuda de sales
como el acetato de amonio o
el acetato sódico.
3. Purificación.
Consta de tres fases
 Precipitación del ADN.- El ADN es
insoluble en alcohol, por lo que su
puede precipitar etanol frio o
isopropanol y recuperar mediante una
centrifugación. El alcohol del
sobrenadante se llevara las sales
añadidas previamente.
 Lavado de pellet.- Se realiza con
alcohol frio volviendo a centrifugarse.
 Recuperación.- El sedimento se puede
resuspender en H2O o tampón, tras ser
secado completamente.
La extracción consiste en el aislamiento y
purificación de moléculas de ADN y se basa en
las características fisicoquímicas de la molécula.
El ADN está constituido por dos cadenas de
nucleótidos unidas entre sí formando una doble
hélice. Los nucleótidos están integrados por un
azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una
base nitrogenada (adenina, guanina, timina o
citosina). La unión de los nucleótidos ocurre
entre el grupo fosfato y el azúcar, mediante
enlaces fosfodiéster, dando lugar al esqueleto de
la molécula. Las bases de cadenas opuestas se
unen mediante puentes de hidrógeno y
mantienen estable la estructura helicoidal.
(UNAM)
2. Materiales y métodos
El método utilizado para la extracción de ADN
fue PCR, para el cual se utilizaron distintos
materiales, sustancias y equipos, tales como:
micropipetas de volumen variable, micropuntas
de diferente tamaño, tubos de 15 ml,
microtúbulos de 1,5 ml o 2 ml y gradillas;
sangre en una porción de 2 ml, 4 ml de PBS, 1
ml de Agua destilada, 4 ml de TKM1, 50 ul de
IGPAL CA-630, 320 de TKM2, SDS al 10%,
120 ul de CINa 5M, etanol al 99.9% y al 70% y
20 ul de TE-Buffer; y vórtex, centrifuga y
microcentrífuga, respectivamente.
Una vez terminados todos los pasos se procedió
a dejar las muestras en incubación para poder al
siguiente día hacer uso de las mismas y des esta
manera poder calcular el ácido nucleico
coeficientes de concentración y la pureza, a
través de un espectrofotómetro nanodrop

Ya obtenidos los datos se procede a su

respectivo análisis

Figura 3: Curva de concentración de DNA

obtenida mediante el uso de un Espectrómetro
NanoDrop. Concentración de DNA de 25,2
ng/µl

Mediante el uso del Espectrómetro NanoDrop,

lo resultados de esta primera muestra fueron:

7A1 7A2
Concentración 9,6 25,2
ng/µl
Figura 1: Ejemplo de muestra de curva de A260 (10 mm 0,192 0,504
concentración de DNA obtenida mediante el uso path)
de un Espectrómetro NanoDrop. A280 (10 MM 0,120 0,268
path)
3. Resultados 260/ 280 1,60 1,88
260/ 230 0,26 0,32

Curva de concentración de DNA:

Tabla 1: Coeficientes de concentración de ADN
Muestra 7A1 de ambas muestras.

Tabla 2: valores indicativos de pureza en

muestras de ADN.

Los valores obtenidos en ambas muestran son:

7A1 7A2
- 260/ 280 1,60 1,88
Figura 2: Curva de concentración de DNA - 260/230 0,26 0,32
obtenida mediante el uso de un Espectrómetro Puesto que los resultados obtenidos son
NanoDrop. Concentración de DNA de 9,6 distintos a los valores normales de pureza, se
ng/µl. puede decir que las muestras fueron afectadas
por algún factor externo, alguna falla durante el
Muestra 7A2 procedimiento de extracción e incluso una mala
medición de las sustancias que se usaron.

4. Discusión de los Resultados
Mediante espectrofotometría se puede
determinar la concentración y la pureza de una
muestra de ADN basándose en la capacidad de
absorbancia de un compuesto presente en una
solución a una longitud de onda determinada.
En el presente trabajo, se realizó la extracción
del ADN a partir de sangre periférica y se
obtuvieron las concentraciones de ADN que
poseía cada muestra.
En el caso de la muestra 7A1, con una
concentración de 9,6 ng/µl, los valores de ADN
obtenidos fueron: en el radio de 260/280, 1,60 y
en el radio de 260/230 fue 0,26, estos datos
están fueron del rango normal de pureza del
ADN. En el caso de su gráfica, podemos
observar que no presenta los picos ni valles que
son característicos en una muestra típica de
ácido nucleico (Fig. 1).
En el caso de la muestra 7A2, cuya
concentración fue 25,2 ng/µl, los valores
obtenidos fueron: en 260/280, 1,88 y en
260/230, 0,32, valores que también se
encuentran fuera del rango normal de pureza. Su
gráfica presenta casi las mismas características
que la muestra 7A1.
Los resultados obtenidos en ambas muestras
reflejan que el DNA sufrió una contaminación,
al encontrarse por debajo de los valores
normales. Esto puede deberse a un factor
contaminante externo o a una mala medición de
las sustancias usadas, entre otras posibles fallas.
Comparando las gráficas, se tiene que un valor
de absorbancia muy alto de 230 nm con
respecto a la muestra es indicativo de
contaminantes como carbohidratos, péptidos,
fenoles, urea, ácido húmico o isotiocianato de
Guanidina en la muestra. También puede ser el
resultado de usar una solución incorrecta al
hacer la medición en blanco.
5. Conclusiones
 Al comparar los dos estudios podemos
comprobar que empleando la misma
técnica hay variaciones en las muestras
ya sea por contaminación de material,
mal empleo de técnicas o no seguir un
protocolo establecido. En ambos casos
hubo contaminación.
 El conocimiento de las técnicas de
extracción de ADN es de gran
importancia, ya que, estos constituyen
el primer paso para el desarrollo de
distintos estudios que involucren a esta
biomolecula, además porque ayudaran
al desarrollo de nuevas competencias
en cuanto a procesos ecológico-
evolutivos.
 La PCR ha facilitado también el
diagnóstico de enfermedades
hereditarias, permite también evaluar el
riesgo de padecer transtornos
autoinmunes.
6. Recomendaciones
 Antes de ingresar al laboratorio hacer
el aseo correcto de las manos y usar la
vestimenta adecuada para el ingreso a
este.
 Llegar puntual a las instalaciones de
esta manera aprovechar al máximo el
tiempo en el laboratorio
 Después de terminar con la práctica es
necesario dejar las cosas y los
instrumentos utilizados en correcto
orden y limpiar el lugar de trabajo.
7. Bibliografía
Bibliografía
Schlötterer, C. (2014). The evolution of
mlecular makers-just a matter of fashion?
Nature Reviewa , 63-69.
Hudson, M. E. (2015). Secuencing brakthroighs
for genomic ecology and evolutionary biology.
Molecuar Ecology , 3-17.
UNAM, L. d. (Ed.). Protocolo de Laboratorios.
Mexico.
Osorio, J., Pachajoa, H., & Hurtado, P. (2013).
Concentración y pureza del ADN de muestras
sanguíneas en papel Whatman FTA
almacenadas entre 1 a 3 años. Revista
Estolamologia , 35-38.
BANCO NACIONAL DE ADN CARLOS III.
(22 de Mayo de 2018). PROGRAMA CONTROL
DE CALIDAD DE MUESTRAS. Obtenido de
Universidad de Salamanca:
http://www.bancoadn.org/docs/programa-
control-calidad-muestras.pdf