 El comportamiento celular es regulado por numerosas y variadas señales extracelulares.

 Las señales se unen específicamente a receptores e inician una respuesta en la célula blanco.
 Cada tipo celular expresa una combinación de receptores particular que lo caracteriza y que determina la
naturaleza y el rango de señales extracelulares que puede detectar o sensar.
 Los receptores convierten las señales extracelulares en señales intracelulares (transducción de la señal).
 Las señales intracelulares se propagan a través del citoplasma y eventualmente el núcleo.
 Las señales exhiben rangos de duración y distribución espacial diferentes y característicos.
 La propagación requiere de cambios de estado en las moléculas señal.
 Los cambios de estado de las moléculas señal se acoplan en tiempo y espacio, organizando vías de
señalización que a su vez se interconectan formando redes.
 Las moléculas señal predominante son proteínas que poseen una estructura y función modular.
 Proteínas adaptadoras y “scaffolds” utilizan múltiples dominios de interacción para ensamblar
complejos de señalización y anclarse a un compartimiento subcelular.
 Ciertas proteínas actúan como interruptores o “switches” moleculares y controlan la activación de múltiples
vías o subredes. Representan centros de conexión/distribución o “hubs” en el interactoma.
 Los complejos de señalización facilitan la compartimentalización y la especificidad de los eventos.
 Redes de señalización regulan los diferentes sistemas moleculares funcionales de la célula,
por ej. el secretor, el citoesqueleto, el transcripcional, etc.
 Múltiples estímulos (señales) regulan el comportamiento celular

proliferation

survival
apoptosis

Hanahan & Weinberg, Cell 2000

La transferencia de información entre componentes involucra
cambios de estado

El cambio de estado es inducido

por un evento (“input”) y produce
una respuesta (“output”).

cambio de estado controlado por cambio de estado controlado

un par de enzimas antagónicas (positiva o negativamente)
que modifican al substrato por múltiples modificaciones
Existen varias posibilidades de cambios de estado
Las proteínas pueden modificarse post-traducción por la
adición covalente de diversos grupos funcionales
Las modificaciones post-traducción pueden alterar la estructura,
interacción, localización y estabilidad de las proteínas

PO3=

OH

(a) Serina y fosfoserina; (b) lisina

y N-acetil lisina se muestran en
formato de varillas con la
superficie molecular superpuesta.
Tanto el fosfato como el grupo
acetilo incrementan el tamaño de
la cadena lateral. El potencilal
electrostático de la superficie es
indicado en rojo (negativo) y en
azul (positivo). La fosforilación
introduce una fuerte carga
negativa mientras que la
acetilación disminuye la carga
positiva de los respectivos
residuos no modificados.
Frecuentemente múltiples cambios de estado están acoplados

tirosina quinasa Src

Los sistemas de procesamiento de información operan de
manera análoga a diferentes escalas

(redes)
 bacterias
- sensado de nutrientes (plasticidad metabólica, ej. operon lac)
- quimiotaxis (movilidad direccionada, ej. sistema Che)
- “quorum sensing” (respuesta a la densidad poblacional, ej AHLs)

 eucariotas unicelulares (levaduras, Dictyostelium)

- sensado de feromonas (apareamiento o “mating”)
- quimiotaxis (migración direccionada)

 eucariotas pluricelulares
- gran complejidad de señales (hormonas, citoquinas, adhesión,
factores de crecimiento, etc)
 Señales reguladoras de migración en bacterias (quimiotaxis)
Bacterias flageladas responden a gradientes de moléculas atractoras o repelentes
adoptando diferentes patrones de migración: direccionado (A) y al azar (B).

A: movimiento direccionado
Receptores quimiotácticos (sensores)
(rotación de flagelos en
detectan moléculas tóxicas que actúan sentido anti-horario)
como repelentes. El receptor activa una
histidin-quinasa CheA (auto-fosforilación)
y la transferencia del fosfato a CheY
(regulador). CheY fosforilado interacciona adaptador
con el motor del flagelo induciendo su histidin-kinasa
rotación en sentido horario. La fosfatasa
CheZ defosforila CheY y termina la
señalización. Otros mecanismos regulador
regulatorios (no mostrados) producen
adaptación. B: movimiento no direcionado
fosfatasa (rotación de flagelos
en sentido horario)

sentido
horario

motor del
flagelo

Alberts et al, BMC 2002

 Señales de confinamiento o densidad poblacional “quorum sensing” (QS)

Bacterias Gram- sintetizan y secretan moléculas que actúan como autoinductores, un ejemplo son las moléculas de acil
homoserina lactonas (AHLs) sintetizadas por la enzima AHL sintasa (LuxI). En condiciones de confinamiento o alta densidad
bacteriana, la concentración de AHLs supera un umbral requerido para unirse a una proteína que actúa como receptora
(LuxR), que se une al ADN y regula la expresión de numerosos genes blanco que responden al “quorum sensing”.

S-Adenosyl Metionina (SAM)

AHL
+ acyl Acyl Carrier Protein (ACP)

Genes regulados por QS están

relacionados con virulencia,
producción de antibióticos, etc.

Sistema LuxI/R de Vibrio fischeri

Li & Nair, Protein Sci 2012
Señales inductoras de migración direccional en Dictyostelium (quimiotaxis)

En ausencia de nutrientes las amebas de Dictyostelium (musgo) secretan cAMP de modo intermitente. El cAMP
estimula receptores acoplados a proteínas G en la superficie de células vecinas y promueve una respuesta
migratoria quimiotáctica que facilita la agregación de células y el subsecuente desarrollo de un cuerpo fructífero.

cuerpo
fructífero

ameba
receptor acoplado
a proteínas G
patrones espiralados de migración

cAMP

regulación del
citoesqueleto,
migración,
transcripción
hopf.chem.brandeis.edu/.../spiral/index.html
Señales reguladoras de crecimiento direccional
(quimiotropismo) en levaduras
Células haploides de levadura secretan un factor de apareamiento
específico (feromona) a o a que estimula receptores acoplados a
proteínas G en células que secretan el factor alternativo. El receptor
activo regula la expresión de ~ 200 genes y también cambios en el
citoesqueleto que promueven el crecimiento direccional.
no estimuladas estimuladas

(polarización)

pheromone

Ste24

Pak Ste20 (WASP)

MAPKKK Ste11
Ste5

MAPKK Ste7

MAPK Fus3 cytoskeletal rearrangement,

polarized growth

cell division arrest

Ste: “sterile” mutants Alberts et al, BMC 2002; Lodish et al, MCB 2004
 Señales inductoras de motilidad direccional en neutrófilos (quimiotaxis)

Péptidos con N-formil-metionina (fMLP) secretados por bacterias estimulan receptores acoplados a proteínas G
en la superficie de neutrófilos induciendo una respuesta quimiotáctica, y la liberación de microbicidas.

liberación de una pequeña

sensado de cantidad de formil-Met-Leu-Phe
Información (fMLP) con una micropipeta.
espacial
formil-péptidos se unen a receptores FPR acoplados
a proteínas G presentes en monocitos y neutrófilos.
lamela

respuesta:
polarización

respuesta:
migración
hacia la fuente
de péptido

respuesta biológica: polarización y motilidad,

producción de ROS, secreción de proteasas
video disponible a:
http://www.biochemweb.org/fenteany/research/cell_migration/movement_movies.html
Alberts et al, BMC 2002
 Plantas. Tropismo
Respuesta al sombreado

La respuesta al sombreado
es controlada por moléculas
fotoreceptoras, ej. fitocromos.
luz normal luz normal

Los fitocromos alternan entre

2 estados regulados por luz
roja (660 nm) y roja lejana (~730 nm)
luz roja (R)

Pr, inactivo Pfr, activo

luz normal luz normal
↑PIFs luz roja lejana (FR) ↓PIFs
Las disminución de la relación R/FR
promueve la forma Pr y se induce la
respuesta de las plantas al sombreado.
Esto involucra la expresión de diversos
genes nucleares regulados por factores
de transcripción (Phytochrome-Interacting
Factors, PIFs).
Las plantas de la derecha son sujetas al sombreado (baja relación rojo/rojo lejano).
Responden elongando sus tallos y los pecíolos, y variando la posición de las hojas.
 Una señalización compleja guía el crecimiento axonal en el desarrollo

Factores tróficos estimulan la supervivencia neuronal y la elongación axonal; moléculas de adhesión

y de direccionamiento (repelentes y atractoras) controlan el tropismo de los axones hacia su blanco.

Thanos & Mey, BBRC 2001

 Múltiple señalización en el microambiente de una célula tumoral

1) Fibroblastos secretan factores (ej. HGF/SF)

que estimulan receptores c-Met en las células
tumorales y promueven la migración. 3

2) Células tumorales secretan factores (VEGF y

bFGF), que estimulan a receptores en las 1
3
células endoteliales e inducen angiogénesis.

3) Fibroblastos y células endoteliales 4

2
secretan enzimas latentes como MMPs y uPA,
5
que son activadas en contacto con el
invadopodio de la célula tumoral, y degradan
la ECM y los ectodominios de las caderinas,
promoviendo la invasión celular.

4) La degradación de la ECM libera factores 3 6

como el TGFb y el EGF que promueven
angiogénesis y proliferación de la célula tumoral.

5) La degradación de la ECM expone sitios

RGD que estimulan integrinas celulares
promoviendo la migración.

6) La activación de vías de señalización en la

célula tumoral estimulan proliferación (ras, b-
catenina), motilidad (FAK, MLCK) y supervivencia
(PI3K/Akt).

Liotta & Kohn, Nature 2001

 Mecanismos involucrados en la señalización
intercelular/intracelular

 Síntesis de señales (proteínas, péptidos, esteroides, etc)

 Propagación (rango de acción espacio-temporal)
 Detección  receptores de la célula blanco
 Respuesta (a nivel celular, molecular)
 Eliminación de la señal y terminación de la respuesta
 En los organismos pluricelulares las señales extracelulares
se propagan en diferentes rangos temporales
minutos, horas milisegundos, segundos
señalización endócrina señalización sináptica, Uniones en hendidura: permiten
- lenta (difusión, transporte vascular) parácrina, autócrina el pasaje rápido de pequeñas
- hormonas en baja concentración - rápida moléculas señal entre células
- receptores de álta afinidad - neurotransmisores en álta adyacentes. Ej: Ca++ y cAMP
concentración
- receptores de baja afinidad

Las señales rápidas y de acción local

tienen en general una vida media
funcional corta, a causa de diferentes
mecanismos: inestabilidad,
degradación enzimática, captación,
inmobilización/enmascaramiento,
modificación, etc.

Alberts et al, BMC 2002

 Las señales extracelulares actúan en diferentes rangos espaciales

AUTOCRINE

Ej. Células presentadoras de Ej. Factores de

antígenos y linfocitos T . crecimiento (FGF), citoquinas, NO.

Permite coordinar la función de grupos de células,

p. ej. La agregación de las amebas de Dictyostelium
mediada por el cAMP, o la expansión monoclonal
de linfocitos T activados por interleuquina-2.

Ej. Insulina sintetizada por células

b del páncreas.

Alberts et al, BMC 2002

La dinámica de la señalización codifica información
y genera respuestas biológicas específicas
EGF NGF

activity

TNFa LPS

activity

-irradiation UV-irradiation

levels

Purvis & Lahav, Cell 2013

La rapidez de la señalización depende de la dinámica y
organización de las vías/redes

Las escalas temporales de las respuestas dependen de

la complejidad de las vías intracelulares involucradas.

Alberts et al, BMC 2008

 La duración o persistencia de una señal depende de su tasa de
recambio o “turnover” en la célula

El tiempo de recambio o “turnover” de las

señales puede influir sobre la rapidez,
magnitud y persistencia de la respuesta.

tiempo de recambio

tasa de magnitud del

señal ↑producción/↓degradación cción total (molec/cel) duración (seg) cambio 1 seg posterior
100 molec/seg 1000 10 x10 ↓ 1000 + 100 - 1000 = 100
10 molec/seg 1000 100 x10 ↓ 1000 + 10 - 100 = 910
x10 ↑ 1000 + 1000 – 100 = 1900
x10 ↑ 1000 + 100 – 10 = 1090
La combinación de señales extracelulares usualmente
determina la respuesta celular

Cada tipo celular expresa una

combinación de receptores específica,
que determina el rango de señales
capaces de inducir una respuesta.

Alberts et al, BMC 2002

 Los sistemas de señalización celulares muestran un comportamiento
análogo a compuertas lógicas (“logic gates”)
Las compuertas lógicas especifican una respuesta (“output”) binaria dependiendo de la combinación de 2 estímulos (“inputs”).
 Ejemplo: Promotores pueden integrar señales de múltiples vías/redes de
señalización
En linfocitos T activados por células presentadoras de antígenos, una respuesta importante de la señalización
de TCRs (“T-Cell Receptors”) es la activación del promotor de la citoquina IL-2 y la subsecuente expresión de
IL-2. IL-2 promueve supervivencia y proliferación de los linfocitos T activos. El promotor de IL-2 actúa como una
compuerta “AND” integrando señalización de 2 vías distintas que activan factores de transcripción diferentes.

NFAT: Nuclear Factor of Activated T cells

AP-1: Activator Protein-1
 Diferentes señales extracelulares pueden converger en la activación
de vías de señalización intracelulares comunes

(= Adrenalina, secretada por la gl. adrenal)

(secretada por el páncreas)
(secretada por la hipófisis)
“mensajero primario”

Los receptores para cada hormona son “mensajero secundario”

diferentes pero actúan a través de mecanismos
de señalización intrcelular similares:
ej. activando proteínas G Adenilato cliclasa.
 Una señal puede desencadenar respuestas diferentes dependiendo de
los receptores estimulados y la maquinaria molecular asociada

acetilcolina, molécula señal

síntesis: choline degradación:
acetyltransferase acetylcholine esterase

célula muscular
cardíaca célula muscular lisa
célula muscular
Gq-Ca2+
esquelética

acetilcolina
acetilcolina Na+
Gβ - ↑K+out
receptores contracción
relajación
muscarínicos,
(GPCRs)
receptores
nicotínicos
↑Na+ in ↑Ca2+
célula de glándula salival (ion channels)
contracción
Gq-Ca2+

acetilcolina

secreción
Alberts et al, BMC 2002
 El número y afinidad de los receptores celulares pueden cuantificarse

Los receptores son proteínas que se unen específicamente a la

molécula señal (= ligando) e inician una respuesta en la célula blanco.

constante de
disociación en
el equilibrio:

[L] x [R]
Kd =
[L-R]

En las células, los receptores poseen una capacidad de unir al ligando saturable (A); la unión del ligando a sitios
inespecíficos no es saturable dentro del mismo rango de concentración (C). La unión específica (B) resulta de restar la unión
inespecífica a la unión total (A) – (C). De la curva B se puede determinar el número de receptores por célula y su afinidad o
fuerza de unión por el ligando (Kd). El valor de Kd equivale a la concentración de ligando que satura el 50% de los receptores en
el equilibrio. El valor de Kd refleja la afinidad de un receptor por el ligando. A menor valor de Kd mayor afinidad.

Lodish et al 5Ed
La respuesta celular máxima puede alcanzarse a concentraciones
no saturantes de ligando

Lodish et al 5Ed
La afinidad es una propiedad absoluta y depende La especificidad es una propiedad
de la fuerza de unión entre las moléculas. relativa y dependiente del contexto.
Superficies complementarias de interacción

Interacción péptido-dominio proteico

 La respuesta a incrementos de una señal puede ser gradual o abrupta

hyperbolic sigmoidal
curve curve Las respuestas biológicas
ultra-sensibles ignoran o
filtran estímulos por debajo
de un valor umbral ( ).

Diversos mecanismos
producen una respuesta
ultrasensible. Un ejemplo
es el requerimiento de la
unión cooperativa de
múltiples moléculas de
ligando para provocar a
respuesta.
 Control de la respuesta: Sistemas biestables
Retroalimentación positiva. CAM kinase II

sistema biestable
on

off
Retroalimentación positiva (transición G1/S)

Los sistemas biestables alternan entre

dos estados estables (on/off); generan fosforilación
una respuesta sostenida (memoria) estimulación + +
ante estímulos o señales transitorias. duplicación
inactivo activo del ADN
Control de la respuesta: Adaptación y comportamientos oscilatorios

phosphorylation
activates the
phosphatase

El feedback negativo atenúa la

magnitud de la respuesta
(adaptación) y en ciertas
respuesta de
condiciones genera respuestas
atenuación oscilatorias.

respuesta
oscilatoria
 Mecanismos de desensibilización o adaptación

Las células tienen la capacidad de adaptarse o desensibilizarse (disminución de la respuesta) ante la

exposición prolongada a un estímulo. Diversos mecanismos pueden participar en la respuesta adaptativa.

Mol Biol Cell 2008

 La agregación de receptores es un mecanismo que controla
la sensibilidad, el tipo y la magnitud de la respuesta

La oligomerización de los receptores de Fc y TCR inducida por la unión al ligando induce la partición de los
receptores en rafts lipídicos (1) donde son fosforilados por kinasas (2). Los receptores fosforilados reclutan kinasas
citosólicas adicionales (ej. Syk, ZAP) (3) que fosforilan proteínas adaptadoras (ej. LAT) (4) y amplifican la señal.

macrophage or
dendritic cell

mast cell

T cell

Secuencia que muestra la formación de una sinapsis inmunológica. Simons & Toomre, NRMCB2000
péptido-MHC (verde) y la molécula de adhesión ICAM (rojo).

La agregación de receptores restringe su

difusión en la membrana y facilita la
activación simultanea de múltiples
moléculas de señalización intracelulares.

Grakoui et al Science 1999

 La agregación de integrinas refuerza la adhesión y la señalización
ligando multivalentes, fuerzas
Fibras de actina (rojo) ancladas a las
adhesiones focales (verde, flechas).

kinasa inactiva
kinasa activa señalización
YAP es una proteína reguladora de la transcripción
Acumulación de fosfotirosina cuya actividad depende de mecanotransducción.
en adhesiones (flechas).
umbral umbral
Tamaño de adhesión

Activación de YAP
Adaptado de Elosegui-Artola et al Nature Cell Biol 2016
 En las placas neuromusculares los receptores de acetilcolina
se agregan y maximizan la transmisión de la señal en la sinapsis

Durante el desarrollo, los terminales nerviosos de las motoneuronas

secretan el proteoglicano agrina, el cual contribuye a la agregación
de los receptores de acetilcolina (puntos rojos) en las fibras musculares.

Terminales axonales de motoneuronas y

agregación de receptores de acetilcolina (flechas)
en las placas neuromusculares.
 Los receptores pueden localizarse en la superficie o en el interior celular

Ejemplos: receptores de adhesión (integrinas, caderinas, etc),

de factores de crecimiento (EGFR, PDGFR, etc),
hormonas (insulina, glucagón, etc), citoquinas (interferon, Ejemplos: receptores de hormonas esteroideas,
interleuquinas, etc) tiroideas, retinoides, vitamina D, óxido nítrico
(NO), fitocromos, etc.

Alberts et al, BMC 2008

 Los receptores de hormonas esteroideas son intracelulares
Hormonas esteroideas (cortisol, retinoides, vitamina D, hormonas sexuales)

Los receptores poseen una estructura modular y en ausencia de ligando interaccionan con proteínas
inhibidoras. La unión de la hormona al receptor desplaza las proteínas inhibidoras y el receptor en
combinación con proteínas co-activadoras regulan la transcripción de numerosos genes blanco.

cortisol

Sintetizado a partir
de colesterol, es una
molécula hidrofóbica
que difunde a través de
la membrana plasmática.

AD: activation domain

DBD: DNA Binding Domain Los receptores de glucocorticoides (GR), mineralocorticoides (MR), progesterona
LBD: Ligand Binding Domain (PR) y andrógenos (AR) comparten una estructura de dominios similar.

Lodish et al MCB 2004

 El receptor del óxido nítrico es una enzima intracelular

NOS NOS

L-Arginine

El NO es sintetizado a partir de arginina. El NO es una molécula

pequeña que difunde a través de la membrana plasmática.

El receptor de NO es
una guanilato ciclasa
soluble.
PLC ↑cGMP PKG ↓Ca++ ↓MLC
señalización parácrina
↓Ca++

Alberts et al, BMC 2008

Los receptores de superficie
difieren en estructura y en los
mecanismos de transducción de
la señal intracelular
cambio en el potencial
de la membrana
 Las células integran señalización de múltiples receptores de superficie

La complejidad de los procesos regulatorios depende de la organización y dinámica de los componentes involucrados.

Glucosa
integrinas EGFR IR
Glut4

(min) exocitosis
respuesta PI3K
Src/FAK
Grb2 rápida
Glut4
(seg, min) Akt rab

pax/p130Cas Vía de
señalización
respuesta (varios pasos) redistribución de Glut4
Ras
rápida Rho/Rac/Cdc42
+
(seg, min) GTPasas

citoesqueleto
de actina Erk 20min
respuesta
ciclinas D, c-myc lenta
(horas, días)
 Las señales intracelulares se propagan empleando diferentes mecanismos

- modificaciones covalentes
- cambios conformacionales
- interacciones moleculares
- cambios de localización

La fosforilación de fosfoinosítidos induce la La fosforilación de

formación de complejos de señalización. receptores induce la
formación de complejos
de señalización. ligand
bound

ras active
kinase

inactive enzymes

ras PLC
propagación
de la señal

propagación
de la señal
Alberts et al., MBC 2008; Lodish et al MCB 2004
Las señales intracelulares se propagan empleando diferentes mecanismos
Los mecanismos moleculares involucrados en la transmisión de señales no son mutuamente excluyentes,
por ej. las modificaciones covalentes y las interacciones moleculares inducen cambios conformacionales.

Cambios alostéricos/interacciones
Modificaciones covalentes

Ras Raf

milisegundos

Cambio alostérico: cambio estructural inducido

por la interacción con otra molécula.
Lodish et al MCB 2004
Interruptores moleculares actúan como compuertas (“gates”)
en las vías de señalización

Los interruptores moleculares alternan entre dos estados o conformaciones: activo, en

el cual transmiten la señal a efectores, e inactivo, en el cual no transmiten la señal.

interruptores moleculares

(GEFs) (GAPs)

Alberts et al, BMC 2002

 Cambios conformacionales de las GTPasas. Ejemplo: Ras

Las GTPasas presentan partes móviles o “switches” que interaccionan con GDP o GTP. (a) En la forma
inactiva de la GTPasa Ras, el GDP interacciona solo con el switch I. (b) Los GEFs aceleran la disociación
del GDP. Por ej. una alfa hélice (naranja) del GEF Sos desplaza el switch I y facilita la liberación del GDP.
(c) El GTP interacciona simultaneamente con los switches I y II y estabiliza la conformación activa de Ras.

GDP

Lodish et al MCB 2004

Las actividades de las GTPasas pueden visualizarse por FRET

GTPasa inactiva (GDP) La interacción entre Rho-GTP y

emisión el dominio de unión a Rho (RBD)
acercan al donor y aceptor
permitiendo detectar FRET.

Rho RBD excitación emisión

excitación GDP
del donor Rho RBD del aceptor
GTP

FRET
GTPasa Rho Las GTPasas de la familia de
max
Rho se anclan y activan en la
membrana plasmática. Los
sensores de FRET
monitorean la actividad
relativa de GEFs y GAPs.
min

Los efectores son proteínas que

solo interaccionan con la forma
activa de la GTPasa. La
interacción modula su actividad.
La transmisión de las señales depende de diversas proteínas modulares

Módulo o dominio representa una secuencia polipeptídica que se pliega independientemente en una
unidad funcional, típicamente de 35-250 aminoácidos. Uno o varios dominios pueden estar presentes
en las proteínas; aquellas involucradas en señalización usualmente contienen varios dominios.

Alberts et al, BMC 2008

Proteínas modulares con dominios de reconocimiento

Los dominios de interacción reconocen secuencias

peptídicas cortas, y en ciertos casos, con modificaciones
pos-traducción. hy: indica residuos hidrofóbicos

Pawson & Scott, Science 1997

SH2 y PTB reconocen péptidos

conteniendo fosfotirosina.
Secuencias adyacentes
determinan la especificidad.

Pawson & Nash, TICB 2001

 Los dominios SH2 y PTB se unen específicamente a
secuencias cortas que contienen fosfotirosina
Existen ~ 115 dominios SH2 Receptores activos fosforilados en tirosina reclutan
(~ 100 aa) en el proteoma humano. proteínas de señalización conteniendo dominios SH2

kinasa
inactiva

SH2

kinasa
activa

La secuencia óptima de reconocimiento

del dominio SH2 de Src es pYEEI
La interación intramolecular del SH2
inhibe la enzima.
Kraskouskaya et al, 2013
La afinidad del dominio SH2 está determinada por la pTyr y la especificidad
por la secuencia contexto

fosfopéptido
Cys
Superficies de los dominios SH2 de PLC, Src y Grb2 pYIIPLPD
(mostradas en azul) interaccionan con péptidos
fosforilados (en amarillo). La fosfotirosina se localiza a
la derecha (flecha) e interacciona con residuos básicos
del SH2. Note que los SH2 de PLC, Src y Grb2 difieren
en la especificidad de los fosfopéptidos que unen.

Tyr
fosfopéptido
pYEEI
El reemplazo de Cys por Tyr en el dominio SH2 de la PLC
cambia la especificidad de reconocimiento, haciéndose similar Thr
a la del dominio SH2 de Src. El reemplazo Thr Trp en SH2-Src
cambia la especificidad haciéndose similar al SH2 de Grb2.

fosfopéptido
PLC: Fosfolipasa C
Src: quinasa de tirosina pYVNV Trp
Grb2: proteína adaptadora

Pawson & Nash, Genes Dev 2000

 Los dominios SH3 reconocen secuencias cortas ricas en prolinas
Aproximadamente 600 dominios SH3 (~ 60 residuos de longitud) existen en el proteoma humano.
El péptido ligando del tipo (PxxPxR/K) adopta una conformación de a-hélice triangular.

Otros dominios, denominados WW

(~ 40 aa) y EVH (~110 aa) también
reconocen motivos ricos en prolina
en secuencias específicas
diferentes a las de los SH3.

Modelo que ilustra la interacción del péptido

PPALPPK del GEF C3G (en azul) y el SH3
de la proteína adaptadora Crk. Dos surcos
formados por residuos aromáticos en el SH3
(bordó/violeta) acomodan un dipéptido XP.
Un bolsillo adyacente determina la
especificidad, acomodando la lisina/arginina
y residuos vecinos.

Li Biochem J. 2005
 Los dominios PDZ reconocen péptidos del terminal carboxilo en
numerosos receptores
Los dominios PDZ (~90 aminoácidos) se encuentran en más de 600 proteínas. Reconocen secuencias
cortas (~ 3-5 aa) del terminal carboxilo y que terminan en un residuo hidrofóbico. Algunos dominios
PDZ reconocen la secuencia Ser/Thr-X-F, donde F es el residuo hidrofóbico del terminal carboxilo.

Superficie del dominio PDZ de la

proteína“scaffold” PSD-95 y el péptido
KQTSV (representado con varillas). Las
regiones de la superficie que contactan
con el péptido se muestran en colores.
P0 corresponde a la posición del residuo
crítico del terminal carboxilo.

PDZ: acrónimo de las primeras letras de las proteínas PSD-95, DlgA y ZO-1, donde se descubrió el dominio PDZ.
Lodish et al MCB2004
 Los dominios PH interaccionan con fosfoinosítidos fosforilados

Los dominios PH (~120 aa) se encuentran en ~ 300 proteínas en humanos. Los dominios PH reconocen
específicamente fosfoinosítidos fosforilados (PIPs) en la membrana plasmática y en otros compartimientos.
Algunos PH reconocen selectivamente PIP3,4 y PIP3,4,5, que son productos de la enzima PI3K. Las
proteínas con estos dominios PH selectivos cambian de localización en respuesta a un estímulo específico.
capa de
A B cadenas
hidrocarbonadas
PIP
capa de
grupos polares

capa de
fosfatos

PH
Visualización de la relocalización de la GFP fusionada al dominio PH de la kinasa Akt.
La estimulación con insulina activa la enzima PI3K y aumenta el nivel de PIP3,4,5 en
la membrana, produciendo la relocalización de la GFP-PH a la superficie (flecha).
Este efecto es bloqueado por Wortmanina, un inhibidor de PI3K.

Britton et al Dev Cell 2002

PH: Plectrin Homology

 Las proteínas adaptadoras poseen varios módulos de interacción y
contribuyen a ensamblar complejos de señalización específicos

Grb2 es una proteína adaptadora que acopla el

EGFR activo con el GEF de ras Sos y la vía de
señalización que activa la MAPK. Grb2
Esquema de funcionamiento de una proteína adaptadora posee un dominio SH2 y dos dominios SH3.

ras
G
D
P
vía 1

Signaling
vía 2
enzymes

Proteínas adaptadoras y “scaffold” suelen usarse como

sinónimos, ambas carecen de actividad enzimática y poseen ras
una estructura modular con múltiples dominios de interacción. G
G T
Algunos autores reservan el término “scaffold” para proteínas D P
P
que actúan como plataformas de interacción estables, y que
facilitan la señalización en una región subcelular relativamente
definida. Por ej. PSD95 en la sinapsis neuronal. activación
de MAPK
 Proteínas “scaffold” compartamentalizan la señalización
Las proteínas de señalización se ensamblan en complejos específicos facilitados por su compartimentalización
en organelas, colocalización en membranas, citoesqueleto, etc. Los “scaffold” organizan los complejos de
señalización en el espacio y aseguran la propagación eficiente de las señales intracelulares.

Good et al., Science 2011

 AKAPs son “scaffolds” que organizan la señalización dependiente de PKA
en compartimientos específicos

Regulación del calcio en el cardiomiocito

membrana plasmática

adrenalina

(AMPAR)

cAMP
cAMP

PKA

AKAP79 facilita la transmisión sináptica en el hipocampo

y asocia las enzimas PKA y PKC con los receptores de
Múltiples AKAPs facilitan la señalización
glutamato y adrenalina en la membrana plasmática.
dependiente de PKA en cardiomiocitos. La PKA
regula diversos canales de calcio en la membrana
plasmática y en el retículo sarcoplásmico.

AKAPS: A-Kinase Anchoring Proteins

 “Scaffolds” secuestran proteínas de señalización. Ej. b-catenina

Las proteínas scaffold Axina y APC secuestran a b-catenina en un complejo. Las quinasas GSK-3b y CK1 fosforilan
a β-catenina en el complejo marcándola para su ubiquitinación por UbL y degradación en el proteosoma. El factor
extracelular Wnt estimula una vía de señalización que inhibe a las proteínas scaffold, permitiendo la acumulación de
b-catenina y su translocación al núcleo donde se asocia a factores de transcripción y regula la expresión génica.

UbL: Ubiquitina Ligasas

Mol Biol Cell, 2008
 “Scaffolds” promueven una eficiente transmisión sináptica
La proteína scaffold PSD-95 emplea varios dominios de interacción (PDZ, SH3, GK) para anclar
y acumular receptores de neurotransmisores en los complejos post-sinápticos.

Neuronas en cultivo SV
anti-PSD95 y actina
pre-sinapsis
dendrita con spinas sinápticas

VGCC

post-sinapsis
(espina sináptica)

SV, vesículas sinápticas; VGCC, canales de calcio activados por voltaje;

NMDAR, AMPAR, mGluR, son receptores de neurotransmisores en la postsinapsis.
Li & Sheng, NRMCB 2003
 “Scaffolds” estabilizan complejos que activan MAPKs específicas

En células de mamíferos las proteínas En levaduras las proteínas scaffold Ste5 y Pbs2 ensamblan
scaffold JIP y Ksr ensamblan complejos vías de señalización que controlan la respuesta al
que activan a las MAP kinasas JNK y Erk, apareamiento y al estrés hiperosmótico, respectivamente.
respectivamente.

activación por estrés (ej. ER), activación por factores

citoquinas (TNF), etc. de crecimiento (ej. EGF).

Raf
MAPKKK

MEK Ksr
MAPKK

(MAPK) Erk
(MAPK) (MAPK)

(MAPK)

fosforilación de Rsk programa

fosforilación de c-jun
y TCF. Activación de transcripcional
y activación de la programa
genes asociados a de respuesta al
respuesta al estrés. transcripcional
la proliferación. estrés hiperosmótico.
que activa el
Pawson & Nash Genes Dev 2000 apareamimento.
Lodish et al MCB 2000
 RECEPTORES ACOPLADOS A
PROTEÍNAS G Y SUS EFECTORES
Los receptores acoplados a proteínas G constituyen la familia más numerosa de receptores, con
~ 800 genes en el genoma humano. Son activadas por moléculas diversas (péptidos, proteínas,
lípidos, aminoácidos). Comparten una estructura similar y activan una gran variedad de
proteínas G en el genoma humano, con 27 subunidades Ga, 5 Gb y 13 G.

as estimula la adenilato ciclasa

proteínas G heterotriméricas
a inhibe la adenilato ciclasa
subunidad a ai activa la fosfolipasa Cb
q
a12/13 regula canales de Na+/K+
subunidad β

subunidad 
 Bases estructurales del mecanismo de señalización del receptor

ligando

intracelular

sitios hidrofóbicos

Receptor β-adrenérgico inactivo (izquierda) y activo, unido al ligando (derecha). Cambios en la red de interacciones mantenida
entre hélices de trans-membrana, producidos por la unión del ligando (marrón), se propagan en cambios estructurales de
mayor magnitud en el dominio citoplasmático, exponiendo regiones hidrofóbicas que interaccionan con la proteína G.

https://www.nobelprize.org/nobel_prizes/.../2012/advanced-chemistryprize2012
La estimulación del receptor activa una proteína G específica que
modula la actividad de efectores

Lodish et al MCB2004
Proteínas G diferentes regulan la actividad de diversas proteínas efectoras
y la concentración
G Subclass* Effect
de segundos mensajeros
Associated Effector 2nd Messenger
a
Ga Subclass* Effect Associated Effector
Protein 2nd Messenger
Protein
G subclass* Effect Effector 2nd messenger/effect

Gs (activación) Adenylyl cyclase cAMP

Gs Adenylyl cyclase cAMP
Ca2+ channel Ca2+
Ca2+ channel Ca2+
(inhibición) Na+ channel Change in
Na+ channel Change inpotential
membrane
membrane potential
Gi Adenylyl cyclase cAMP
Gi Adenylyl cyclase cAMP
K+ channel Change in
K+ channel Change inpotential
α subunit Ca2+ channel
membrane
membrane potential
Ca2+
Ca2+ channel Ca2+
Gq Phospholipase Cb IP3, DAG
Gq Phospholipase C IP , DAG
Go Phospholipase Cb IP3, 3DAG
Go Phospholipase C IP , DAG
Ca2+ channel Ca2+3
Ca2+ channel Ca2+
Gt cGMP cGMP
Gt cGMP
phosphodiesterase cGMP
phosphodiesterase
Gb Phospholipase Cb IP3, DAG
Gb Phospholipase C IP3, DAG
Adenylyl cyclase cAMP
K+Adenylyl
channelscyclase membranecAMP potencial
* A given G may be associated with more than one effector protein. To date, only one
a
* A given G may be associated with more than one effector protein. To date, only one
major Gsa has a been identified, but multiple Gqa and Gia proteins have been described. In
majorcases
some Gsa has
(notbeen identified,
indicated in thisbut multiple
table) Gqaproteins
effector and Gia are
proteins have by
regulated been described. In
coincident
some cases (not
binding to Ga and Gb.indicated in this table) effector proteins are regulated by coincident
binding= to
KEY: Ga and Gb?. = inhibition. IP3 = inositol 1,4,5-trisphosphate; DAG = 1,2-
stimulation;
KEY: = stimulation; ? = inhibition. IP3 = inositol 1,4,5-trisphosphate; DAG = 1,2-
diacylglycerol.
diacylglycerol.
 Tipos de segundos mensajeros involucrados en señalización por GPCRs

La unión del ligando (primer mensajero) al receptor acoplado a proteínas G (GPCRs) promueve el incremento
(o disminución) en la concentración de moléculas de vida media corta denominados segundos mensajeros.

activa PKA activa PKG y abre activa PKC abre canales de

canales catiónicos calcio en el RE
en bastones de la retina

Ca 2+
controla la actividad
de kinasas, fosfatasas

GPCRs: G-Protein Coupled Receptors

 La subunidad Gas activa la adenilato ciclasa y estimula la síntesis
de cAMP a partir de ATP

síntesis del cAMP

La adenilato ciclasa es una proteína de membrana multipaso

La adenil ciclasa interacciona con la alfa hélice 3

del switch II de la subunidad Gas-GTP.

Fosfodiesterasas específicas degradan el AMPc y

por lo tanto controlan el rango espacial y temporal de
la señalización dependiente de AMPc.
La adenil ciclasa puede ser modulada positiva y negativamente
en la misma célula

La actividad relativa de subunidades Ga estimuladoras e inhibidoras

determinan los niveles del segundo mensajero cAMP.

Lodish et al MCB2004
Toxinas bacterianas inhiben irreversiblemente proteínas G que
activan la Adenilato Ciclasa (ej. toxina del cólera)

Cholera toxin

Gas
CFTR es un canal de Cl- que se expresa
en intestino y en otros órganos. La PKA
fosforila el dominio regulador (R) de CFTR
e incrementa la permeabilidad al Cl-.
Adenilato
cyclase

cAMP

PKA

CFTR

En células intestinales
produce una pérdida de
CFTR: Cystic Fibrosis Transmembrane
Na+ and Cl- Conductance Regulator
Algunas respuestas mediadas por la estimulación de la subunidad Gs
y el incremento en AMPc

Algunos tipos celulares desencadenan la misma respuesta al incremento de AMPc independientemente

de la naturaleza de la señal extracelular, por ej. la degradación de triglicéridoses en células adiposas es
inducida por cuatro hormonas diferentes.
 El segundo mensajero cAMP activa la proteína-quinasa A (PKA)

Las subunidades reguladoras (R) inhiben a las subunidades catalíticas (C) de la enzima. Los dominios R además
interaccionan con proteínas scaffold (AKAPs), que restringen espacialmente la actividad de PKA. La unión del cAMP
(ligando activador) a las subunidades R es cooperativa e induce la disociación y activación de las subunidades catalíticas.
La PKA exhibe una respuesta hipersensible (abrupta).

cAMP

R C

R C

AMP/ATP

La actividad de fosfodiesterasas que degradan el AMPc regulan negativamente la activación de PKA.

AKAPs: A-Kinase Anchoring Proteins Alberts et al, BMC 2002

 La translocación de las subunidades catalíticas de PKA al núcleo
estimulan la transcripción de múltiples genes

La subunidad C activa es pequeña y se transloca al

núcleo por difusión. En el núcleo fosforila a CREB.
La actividad de PKA finalliza por la unión de un
inhibidor que la exporta al citosol.

Los genes regulados por vías de señalización

dependiente de cAMP poseen en su promotor
un sitio CRE. PKA fosforila el factor de
transcripción CREB nuclear, promoviendo su
asociación con el coactivador CBP/P300 y la
regulación de la expresión de genes blanco
(ej. somatostatina, glucagón, insulina, etc).
CREB es defosforilado por la fosfatasa PP-1.

Cinética de la activación transcripcional

CREB
dephosphorylation

CRE: c-AMP Response Element

CREB: CRE Binding
CBP: CREB Binding Protein Lodish et al MCB2004
En el citosol, la PKA regula diferentes procesos bioquímicos
(ej. catabolismo del glucógeno en hepatocitos y miocitos)
glucagón
El glucagón es una hormona peptídica
secretada por el páncreas que
promueve el incremento de glucosa
sanguínea oponiéndose al efecto de la GCPR
insulina.

AC

glicógeno
active sintasa inactive cAMP

active
PKA

Lodish et al MCB2004
Los procesos de señalización organizados en cascada pueden amplificar
la señal extracelular inicial en varios órdenes de magnitud

(adrenalina)

Lodish et al MCB2004
La activación de la PKA puede visualizarse en la célula viva mediante FRET
FRET: Fluorescence Resonance Energy Transfer
no FRET excitación FRET excitación
433 nm emission
emisión 433 nm
El biosensor de FRET consta de la YFP, emisión
476 nm
un péptido substrato de la PKA, un dominio de
unión al substrato fosforilado en serina (14-3-3),
y la CFP. Para medir FRET, las células se PKA
iluminan con luz que excita a la CFP (433 nm) y
se registra la emisión de luz de la YFP (527 nm). S

La PKA fosforila residuos Ser/Thr dentro de la

Arg/Lys-rich site
secuencia consenso: X-Arg-(Arg/Lys)-X-(Ser/Thr)-F.

Respuesta celular del biosensor. La droga (Fsk) activa la vía adenil ciclasa  cAMP  PKA.
Esta activación es abolida cuando la serina del substrato de PKA se reemplaza por alanina (S475A).

escala que representa

los valores de FRET
con diferentes colores.

Zhang et al PNAS 2001

 La actividad de PKA es restringida espacialmente por
proteínas “scaffold” denominadas AKAPs

Las AKAPs (A-kinase anchoring proteins) son una familia de proteínas “scaffold” que anclan la PKA a
subcompartimientos celulares específicos, restringiendo espacialmente la actividad de la enzima. La
concentración de cAMP y la activación de PKA es limitada por la acción de fosfodiesterasas (PDE).

Representación de un complejo de señalización

formado por una AKAP típica. Una región de la
AKAP (1) interacciona con las subunidades
R de la PKA, otro dominio (2) retiene
el complejo a una estructura citoplasmática
específica (ej. centrosoma, membrana del Golgi,
etc) y otros sitios (3) se asocian con fosfatasas
o kinasas implicadas en la vía de señalización.

AKAP asociada a membranas de endosomas y Golgi

 La subunidad Gaq activa la enzima fosfolipasa C, isoforma b, que
hidroliza el PIP2 y produce los mensajeros secundarios IP3 y DAG

La estimulación de los receptores de IP3

exhibe una respuesta ultrasensible.

antagonista

IP3: Inositol 1,4,5-triphosphate

DAG: diacyl glycerol

Marchant & Taylor, CB 1997; Alberts et al, BMC 2008

 Reacción catalizada por la enzima PLCb y 

La fosfolipasa C se asocia a membrana plasmática mediante dominios de unión a lípidos como PH y C2. La isoforma 
de la PLC se asocia a receptores tirosina-quinasa de transmembrana activos (ej. EGFR) mediante dominios SH2.

PLC

5
1 4

La PLCb/ cataliza la hidrólisis de PIP2 produciendo IP3 y DAG.

Alberts et al, BMC 2002

 El DAG y el calcio son requeridos para activar la PKC

El dominio C2 de la PKC requiere de calcio para su interacción con los fosfolípidos de la membrana.
En la membrana los dominios C1 de PKC interaccionan con el DAG causando un cambio
conformacional que desplaza el pseudo-substrato inhibidor del sitio catalítico y activa la enzima.

dominio C2
catalytic site Ca2+

Existen numerosas isoformas de PKC implicadas en la regulación de diversos procesos celulares. La PKC
fosforila e inhibe receptores acoplados a proteínas G, al EGFR, otras isoformas activan la vía de la MAPK, etc.
 Mecanismos de retroalimentación positiva y negativa
generan patrones espacio-temporales de Ca2+ en el citoplasma

La fertilización del ovocito

por el espermatozoide
activa la vía de
PLC->IP3->Ca+2

El incremento de Ca2+ en el citosol induce

la apertura de más canales de Ca+2 en el
ER (retroalimentación positiva).

El Ca2+ regula la apertura de

los canales dependientes de
IP3 de manera bifásica,
niveles bajos promueven la
apertura mientras que niveles
altos la inhiben.
Superado un umbral de concentración de
Ca2+ en el citosol se induce el cierre de
canales de Ca+2 en el ER
(retroalimentación negativa).

Alberts et al, BMC 2006

El incremento del calcio citosólico inducido por señalización es
rápidamente revertido

La concentración basal de Ca2+ en el citosol es ~200 nM debido a la actividad de

proteínas transportadoras de calcio de la membrana plasmática, RE y mitocondrias.

medio extracelular

citosol citosol

Alberts et al MBC 2008

 Las variaciones espacio-temporales de la concentración de calcio
intracelular pueden visualizarse en células vivas

espectro de excitación de Fura-2 Gradiente de concentración de calcio

(rojo max., azul mín) en dendritas de
El compuesto fluorescente Fura-2 permite una neurona de Purkinje estimulada.
determinar los niveles de calcio intracelular. dendritas
La unión a Ca2+ incrementa la excitación de
la molécula específicamente a 340nm. El
gráfico muestra el incremento de la
fluorescencia de excitación en el rango de
Ca2+ entre 0 y 1,35 mM.

Vasopresina induce oscilación de Ca2+ soma

en hepatocitos. La frecuencia de picos
es proporcional a la concentración de axón
hormona.

La secuencia muestra la propagación de un pico de calcio intracelular en

respuesta a la estimulación de receptores acoplados a proteínas Gaq. Los
máximos niveles de calcio se muestran en anaranjado y los mínimos en azul.

Biochemistry, Berg, Tymoczko, Stryer,

MBC 2008
 Calmodulina es una proteína citosólica reguladora activada por calcio
El aumento de Ca2+ >500 nM induce su unión cooperativa a calmodulina, 4 iones Ca2+ se unen por molécula
de calmodulina e inducen la conformación activa que le permite interaccionar y activar diversas enzimas.

calmodulina
activación de
CaM-KII
CaM-KII autofosforilada
activa ya no depende de
Ca2+/calmodulina y fosforila
otras moléculas de CaM-KII
aun después de disociarse
de Ca2+/calmodulina .
(retroalimentación positiva)

autofosforilación
Varias enzimas son activadas por complejos calmodulina-calcio. Ej:
- MLCK  MLC  contracción actino-miosina
- fosforilasa kinasa  glucogenólisis
-CaM-KII  tyrosine hydroxylase  catecolaminas (Adrenalina, DA, etc)
- cAMP fosfodiesterasa  5´- AMP
- Ca2+ -ATPasa  disminución del Ca2+ citosólico
- calcineurina  NFAT
- NO sintasa  NO (nitric oxide)
Ca2+/calmodulina estimula la NO sintasa y la producción de NO

El óxido nítrico (NO) es un gas que actúa como mediador local (acción paracrina).
Difunde a través de la membrana y se une y activa proteínas receptoras intracelulares
con actividad de guanilato ciclasa. El cGMP formado activa la PKG y esta inhibe la
interacción actina-miosina promoviendo la relajación de la célula muscular lisa.

Lodish et al MCB2004
La subunidad Gat activa una fosfodiesterasa de cGMP en fotoreceptores
Transducina o Gat participa del mecanismo de transducción de la señal lumínica en bastones y conos de la retina.
cromóforo
eventos 2 y 4 amplifican la propagación de la señal.

trans-retinal

cis-retinal rodopsin
(opsin + retinal) Gat
dark current
Na+

En obscuridad, cGMP abre canales catiónicos

produciendo la depolarización de la membrana
y la generación de una corriente. La activación
de rodopsina induce la degradación del cGMP,
el cierre de los canales catiónicos y la
hiperpolarización de la membrana.
Na+

hiperpolarización

(glutamate)

Lodish et al MCB
Las subunidades Gb regulan canales de potasio en el músculo cardíaco

La acetilcolina induce la relajación del músculo cardíaco (A) uniéndose a receptores muscarínicos,
los cuales activan una proteína G. El complejo Gβ se une y regula la apertura de canales de potasio
provocando la hiperpolarización de la membrana plasmática.

A. músculo cardíaco

hiperpolarización

hiperpolarización

Relajación
Lodish et al MCB2004
 Diversos mecanismos regulan la sensibilidad de los receptores
acoplados a proteínas G
Los GPCRs pueden desensibilizarse por:

• fosforilación (PKA, PKC, GRK)  reversible

• internalización (b-arrestinas)  reversible
• degradación en lisosomas  irreversible

Las arrestinas se unen a los

receptores fosforilados y
GRKs son quinasas que se activan al interaccionar
bloquean la asociación y
con GPCR activos. Por lo tanto GRKs fosforilan e
activación de la proteína G.
inactivan solo a los GPCRs activos. Los receptores
también pueden ser fosforilados por PKA y PKC en
condiciones de estimulación prolongada.

Otros mecanismos que terminan la señalización iniciada por las proteínas G son: la hidrólisis del GTP en la proteína G, evento
que es acelerado por los mismos efectores o por proteínas RGS (Regulator of G protein Signaling) que actúan como GAPs.

GPCR: G-Protein Coupled Receptors

GRK: GPCR-coupled Receptor Kinases
Las Beta arrestinas son proteínas scaffold que facilitan el ensamble de
componentes involucrados en la endocitosis y señalización

Las b-arrestinas interaccionan con AP2 y clatrina promoviendo la endocitosis y la disminución del
número de receptores en la superficie. Los receptores internalizados pueden ser defosforilados y
reciclados a la superficie o degradados en los lisosomas. Algunos receptores endocitados unidos a
arrestinas activan vías de señalización dependientes de quinasas citosólicas como Src y JNK.

Lodish et al MCB2004
RECEPTORES ASOCIADOS A
QUINASAS CITOSÓLICAS

 receptores de citoquinas (interferón, eritropoietina, interleukinas)

 receptores de adhesión (caderinas, integrinas, CAMs)
 receptores de células T (TCR)
 Receptores de citoquinas activan tirosina-quinasas citosólicas: JAK

Las JAKs constituyen una familia de tirosina quinasas citosólicas asociadas constitutivamente a receptores de
citoquinas (1). En ausencia de estimulación JAK es inactiva. La estimulación de los receptores induce la
autofosforilación y activación de la JAK asociada (2), la cual fosforila tirosinas en el dominio citosólico del receptor (3).

inactive active JAK

(Ej. EpoR, prolactin R)

citoquinas: son una familia de proteínas extracelulares que regulan el crecimiento y

diferenciación de tipos celulares específicos, particularmente del sistema hematopoyético
e inmune. Ej. Eritropoietina  maduración de eritrocitos; IL2  proliferación de células T.

JAK: JAnus Kinase o Just Another Kinase

Lodish et al MCB2004
 JAKs fosforilan a los factores de transcripción STATs

Las STATs permanecen latentes en el citosol hasta su

activación, la cual ocurre cuando se unen al receptor
fosforilado, a través de su dominio SH2, y son
fosforiladas por JAK. STATs fosforiladas se disocian
del receptor, y dimerizan mediante interacciones SH2-
fosfotirosina recíprocas. Los dímeros STATs exponen
NLS y se translocan al núcleo donde activan la
transcripción de numerosos genes blanco.

STAT: Signal Transducers and Activators of Transcription

Lodish et al MCB2004
 La estimulación de receptores de citoquinas activa
varias vías de señalización paralelas

La activación del receptor de eritropoyetina (EpoR) activa 4 vías de señalización

paralelas que regulan la transcripción de diferentes grupos de genes. La consecuencia
de esta señalización es la amplificación y diferenciación de precursores de eritrocitos.

(F. de transcripción)

(adaptadores)

(enzima)

Akt FOXO Transcription of genes

that inhibit survival,
(enzima)
proliferation and growth.

Todas estas proteínas se asocian

al receptor fosforilado en tirosina
mediante sus dominios SH2

FOXO: Forkhead Box O, transcription factor

Lodish et al MCB2004
 Fosfatasas y SOCS terminan la señalización de citoquinas

Mecanismos rápidos (defosforilación) y lentos (síntesis de SOCS) controlan

la duración de la señalización intracelular inducida por citoquinas.

Dentro del repertorio de genes blanco activados por

SHP1 es una fosfatasa de tirosina que en condiciones
basales está autoinhibida en el citosol. Interacciona con
el receptor fosforilado mediante dominios SH2, evento
que induce su activación y defosforilación de JAK. Otras
fosfatasa también defosforilan a JAK y STATs.
STATs están los que codifican para proteínas SOCS.
Mediante dominios SH2 las proteínas SOCS se unen
a las JAKs y receptores fosforilados. Las proteínas
SOCS además interaccionan con E3 ubiquitina ligasas
y promueven la ubiquitinación y degradación de JAKs
y los receptores en los proteosomas.

SOCS: Suppresor Of Cytokine Signaling Lodish et al MCB2004

 Receptores de adhesión activan tirosina-quinasas citosólicas

Src y FAK se autofosforilan y activan en

respuesta a la estimulación y agregación
EGFR
integrinas de integrinas. Src y FAK fosforilan
adaptadores que propagan la señal por
vías que promueven: 1) proliferación a
través de la vía de Ras y MAPK; 2)
PTPs SH2/3 inhiben la apoptosis a través de la vía de
Src/FAK SH2 PI3K y AKT; y 3) promueven la migración
Grb2 celular a través de la activación de rho
GTPasas (rho, rac y Cdc42). La
SH3
SH2 señalización de integrinas sinergiza con
PI-3K pax/p130Cas la de ciertos receptores de factores de
Ras crecimiento, por ej. el EGFR.
Rho/Rac/Cdc42
Akt GTPasas
Varias fosfatasas (PTPs), ej. PTP-
BL y SHP2 defosforilan e inactivan
citoesqueleto
de actina Erk a Src y FAK, respectivamente.

ciclinas D, c-myc
 La estimulación de FcR y TCR en el sistema inmune
induce la activación de tirosina quinasas

La estimulación de los receptores de Fc (FcR) en mastocitos y de los TCR en células T induce su partición en
rafts lipídicos (1) y su fosforilación por tirosina-quinasas de la familia de Src (Lyn, Lck, Fyn) (2), Syk y
ZAP70 (3). Todas estas quinasas poseen dominios SH2 que reconocen secuencias fosforiladas (ITAM:
Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motif) y contribuyen a la propagación de la señal intracelular.

pY pY
SH2 SH2
PLC PLC

T cell
↑PLC  ↑Ca2+  histamine secretion
↑PLC  ↑Ca2+  Calcineurin  NFAT
PKC  NF-B
DAG  GEF  Ras-MAPK  AP-1

Simons & Toomre, NRMCB2000

RECEPTORES CON ACTIVIDAD
ENZIMATICA INTRINSECA

 receptores con actividad de tirosina quinasa (ej. EGF, NGF, Ephr)

 receptores con actividad de Ser/Thr quinasa (ej. TGFb)

Los receptores con actividad de quinasa tienen un dominio extracelular que une
el ligando y un dominio intracelular con actividad catalítica. Los ligandos son
péptidos o proteínas solubles o asociados a la membrana plasmática.
El genoma humano codifica para ~ 60 receptores de transmembrana
con actividad tirosina-quinasa distintos, agrupados en 20 familias

Hunter, Nature 2001

 La unión del ligando al dominio extracelular induce la activación y
autofosforilación del dominio tirosina-quinasa citosólico

Los receptores no estimulados poseen una actividad de tirosina-quinasa basal (1). La unión del ligando provoca la
dimerización y autofosforilación del receptor (2), evento que activa el dominio catalítico y promueve la fosforilación de
varias tirosinas del dominio citosólico, generando sitios de unión para proteínas de señalización con dominios SH2 o PTB (3).

dimerización y auto- fosforilación de

fosforilación de Tyr tirosinas adicionales
del dominio catalítico

Lodish et al MCB2004
 El receptor activo es autofosforilado en varios sitios

El EGFR fosforilado en tirosina (pY) induce el reclutamiento de varias moléculas de señalización

del citoplasma y que contienen dominios SH2 y/o PTB. Por ejemplo, la fosfolipasa C, la
tirosina quinasa Abl, las proteínas adaptadoras Grb2 y Shc, y la ubiquitina ligasa Cbl.

EGFR Cbl

PLC Abl Grb2 Grb2 Shc PLC

pY
dominio pY pY pY pY pY pY
catalítico
992 1045 1068 1086 1148 1173
dominio dominio intracelular
extracelular

membrana

cinética de
activación
del EGFR actividad de
fosfatasas

Kholodenko et al
J. Biol Chem 1999
0 1 2
Time (min)
 Fosfatasas defosforilan y inactivan el receptor

Diferentes proteína tirosina-fosfatasas (PTPs) son reclutadas al receptor

fosforilado mediante dominios de interacción proteína-proteína específicos.

PTPs
EGFR

pY
dominio pY pY pY pY pY pY
catalítico
992 1045 1068 1086 1148 1173
dominio
extracelular dominio intracelular

membrana
 La endocitosis es un mecanismo de desensibilización de los receptores
tirosina quinasas
En ausencia de ligando, el EGFR se endocita con una cinética 5-10 veces más lenta que cuando está unido
al EGF (ligando). Aproximadamente un 50% del complejo EGF-EGFR endocitado es derivado a lisosomas.

reciclado

degradación
Cbl es una ubiquitina ligasa que agrega
una ubiquitina al EGFR endocitado
(monoubiquitinación), marcándolo para
su degradación en lisosomas. Este
mecanismo disminuye transitoriamente
la capacidad de las células para
responder al estímulo extracelular.
 Algunos RTK señalizan a través de la PLC

La fosfolipasa C se une varios RTKs fosforilados (ej. EGFR, PDGFR) mediante dominios SH2. El
receptor activo fosforila y activa la PLC promoviendo la síntesis de los segundos mensajeros IP3 y DAG
a partir de PIP2. El aumento de Ca2+ citosólico y el DAG activan la PKC, y el Ca2+ activa la calmodulina.

La PLC se encuentra
autoinhibida en el citosol. La
activación depende de su
relocalización a la membrana, la
fosforilación y cambios
↑PKC conformacionales.

↑Ca2+

↑calmodulina

Estructura modular de la PLC

Cooper, Biol Cel. 2002

 RTKs de factores de crecimiento señalizan vía la PI3K
Las enzimas PI3K son heterodímeros que consisten de una subunidad reguladora
(p85) y una subunidad catalítica (p110). Receptores tirosina quinasa de factores de
crecimiento como el EGFR, IR, IGFR, FGFR, PDGF, etc señalizan vía esta enzima.

membrana
plasmática

PIPK PIPK

En estado de estimulación basal

3 3 3 la PI3K se encuentra
dominios
autoinhibida en el citosol. La
PH
interacción de los dominios SH2
de la subunidad reguladora p85
con receptores o adaptadores
fosforilados activan de manera
alostérica la enzima.

PI3K: Phosphoinositide 3-Kinase

 Los productos de PI3K son requeridos para activar enzimas citosólicas

Akt (=PKB) es una Ser/Thr quinasa citosólica que en estado basal adopta una conformación inactiva,
estabilizada por la interacción del dominio PH con residuos del dominio catalítico. La síntesis de PIP3
por PI3K promueve el reclutamiento y anclaje a la membrana de PKB y PDK1, mediado por el dominio
PH de ambas enzimas. La interacción con la membrana induce cambios conformacionales en Akt que
sumados a la fosforilación por PDK1activan a la enzima.

PI-3K PH PH PH

PI3K: Phosphoinositide-3 kinase

PDK1: Phoshoinositide-Dependent Kinase-1
PKB/Akt: Protein Kinase B/producto del oncogen v-akt
Lodish et al MCB2004
 La vía de señalización de PI3K-AKT regula varios procesos

La activación de la vía PI-3K  Akt promueve crecimiento y supervivencia. La fosfatasa PTEN antagoniza el efecto de PI3K y
defosforila los lípidos fosforilados (PIP3) productos de PI3K. Por lo tanto la actividad de PTEN atenúa la activación de Akt.

PH PH

Cell
growth

PTEN
(fosfatasa)
mutaciones de PTEN
promueven el desarrollo
de cáncer
Bcl2
Bcl2
Bcl2

PTEN: Phosphatase and TENsin homologue

mTOR: Ser/Thr kinasa
Tsc: GAP de Rheb FOXO genes pro-apoptóticos
Rheb: GTPasa activadora de mTOR (ej. FasLR, BIM, etc)
PI-3K: Phosphoinositide-3 kinase active Akt
PDK1: Phoshoinositide-Dependent Kinase-1
PKB/Akt: Protein Kinase B/producto del oncogen v-akt
BAD y BIM: SH3 only proteins (proapoptóticas) Alberts et al MBC 2000
mTOR es una Ser/Thr kinasa que promueve supervivencia y crecimiento

mTOR forma 2 complejos multiproteicos, mTORC1 y mTORC2, los cuales integran señalización de diferentes
procesos o “inputs”. Por ejemplo, quinasas activadas por receptores de factores de crecimiento, convergen en
la activación de la GTPasa Rheb, la cual a su vez activa el complejo mTORC1. La activación de los complejos
mTORC1 y 2 regula la función de numerosos substratos involucrados en el crecimiento y supervivencia celular.

(↑Akt FOXO)
(S6K, eIF4
↑síntesis de
proteínas) (Rho/Rac activity)

Laplante & Sabatini, Cell 2012

Varios RTKs estimulan proliferación a través de la vía de Ras-Erk

La unión del ligando provoca la

dimerización y autofosforilación
de los receptores.

Sos promueve el intercambio

del GDP por GTP en Ras.
Ras-GTP activo se disocia La unión de Grb2
de Sos. al receptor activo
recluta Sos a la
membrana.

Lodish et al MCB2004
La GTPasa Ras es activada en la membrana plasmática

Ras se ancla a la membrana plasmática por ácidos grasos agregados post-traducción.

Mutantes de ras que no pueden anclarse a la membrana son incapaces de activar al
efector Raf. Esto es en parte porque los GEFs de Ras activan a Ras en la membrana.

membrane

cinética de activación de Ras

estimulando las células con EGF.

concentration
Ras-GTP
cytosol

10 20 30
Time (min)

adaptado de Bidkhori et al PlosOne2012

Raf
 Ras activa una cascada de quinasas que incluye la MAP kinasa Erk

GEF

1. En estado basal Ras asociada a la membrana es inactiva. La quinasa Raf

existe en una conformación inactiva en el citosol y no interacciona con Ras.
2. La activación de Ras recluta a la quinasa Raf a la membrana. Cambios
conformacionales, fosforilación y defosforilación de Raf activan la quinasa.
3. Raf fosforila y activa a la quinasa MEK.
4. MEK es una quinasa dual que fosforila y activa a la MAPK Erk.

En organismos multicelulares existen 3 subfamilias de MAPKs:

- Erk ("Extracellular regulated kinases")
- JNK ("c-Jun N-terminus kinase")
- p38

Lodish et al MCB2004
 La activación de la MAP quinasa requiere de la fosforilación dual
de una treonina y una tirosina en el segmento activador

N lobe

activation
segment
cinética de activación de Erk
estimulando las células con EGF.

C lobe

Activity
segment
10 20 30 40
Time (min)
Lodish et al MCB2004
adaptado de Bidkhori et al PlosOne2012
 Complejos de activación de MAP kinasas específicas
depende de proteínas scaffold
En levaduras las proteínas adaptadoras Ste5 y Pbs2 organizan vías
En células de mamíferos las proteínas de señalización en respuesta a estímulos diferentes. Ste5 recluta una
adaptadoras JIP1 y Ksr coordinan la activación combinación de proteínas involucradas en la respuesta de apareamiento
de la MAP kinasa JNK y Erk, respectivamente. mientras que Pbs2 desencadena la respuesta al estrés hiperosmótico.

activación por estrés (ej. ER), activación por factores

citoquinas (TNF), etc. de crecimiento (ej. EGF).

Raf
MAPKKK

MEK Ksr
MAPKK

(MAPK) Erk
(MAPK) (MAPK)

(MAPK)

fosforilación de c-jun fosforilación de Rsk programa

y activación de la y TCF. Activación de transcripcional
respuesta al estrés. programa de respuesta al
la proliferación. transcripcional estrés hiperosmótico.
Pawson & Nash Genes Dev 2000
que activa el
apareamimento.
Lodish et al MCB 2000
MAPK activa se transloca al núcleo donde fosforila factores de transcripción

Las MAPK activas fosforilan substratos en el citosol y

en el núcleo. Varios de los substratos nucleares son
factores de transcripción, por ej. TCF (¨Ternary
Complex Factor¨) y SRF (¨Serum Response Factor¨).
TCF y SRF fosforilados forman complejos triméricos
que se unen a secuencias promotoras y estimulan la
expresión de genes de expresión temprana como por
ej. c-Fos y c-Jun.
La regulación extracelular de diferentes procesos fundamentales en
S. cerevisiae es mediada a través de distintas MAP kinasas

Alberts et al MBC 2002

RTKs decodifican señales de crecimiento, diferenciación y guía en neuronas

Interacciones de efrinas (ephrins) en la membrana de células gliales con

El NGF promueve la supervivencia
y el crecimiento axonal (diferenciación)
en neuronas simpáticas.
sus receptores Eph (RTK) en axones contribuyen al establecimiento de
mapas de conectividad en el sistema nervioso. Por ej. el mapa retino-
tectal en el sistema visual. Axones de neuronas nasales de la retina se
conectan con neuronas del tectum posterior en el cerebro y neuronas de
la retina temporal con neuronas del tectum anterior.

nasal nasal

NGFR
temporal
temporal
- NGF anterior

tectum

posterior

EphR

+ NGF

PTK domain
NGF: Nerve Growth Factor
 Eph RTKs participan en la decodificación de señales o moléculas guía
durante el crecimiento axonal

Las efrinas inhiben el crecimiento axonal.

La activación de la GTPAsa Rho promueve
Experimento in vitro que muestra la selectividad de crecimiento de los axones la contracción de actina-miosina produce el
de diferentes regiones de la retina sobre membranas del tectum. Se colapso del cono.
generaron bandas o calles con fracciones de membranas del tectum posterior
(P) y anterior (A). Sobre estas fracciones se sembraron neuronas de la retina
temporal (a la izquierda) y neuronas de la retina nasal (a la derecha).

Ephexin es un
GEF de RhoA
Los receptores RTK usualmente activan diversas vías
de señalización paralelas

Adipocitos transfectados
con GLUT4-GFP. Note la
translocación a la membrana
después de la estimulación.

Saltiel & Kahn Nature 2001

 Quinasas y GTPasas integran señales de distintos receptores

ECM

integrins

FAK
Src

Rho/Rac

MLCK
PD

proliferación, apoptosis, diferenciación, metabolismo, motilidad, etc

PD: phosphodiesterase

Alberts et al MBC 2008, modific

 Los receptores de TGF-b poseen un dominio de Ser/Thr-kinasa
en su dominio intracelular
TGF-β es una familia de ~ 40 proteínas
diméricas secretadas, que actúan generalmente
de manera parácrina, y regulan proliferación,
apoptosis y diferenciación. La unión de TGF-b a
los receptores RI y RII induce la fosforilación y
SARA activación de RI por RII. RI activo une y fosforila
MH2 factores de transcripción inactivos asociados a
MH1 la membrana denominados R-Smads 2 y 3. Los
R-Smads fosforilados se disocian de los
receptores, forman complejoc con Co-Smads
(ej. Smad4) y se translocan al núcleo donde
junto a factores de transcripción adicionales
regulan la transcripción de genes blanco.

La proteína “scaffold” SARA interacciona con

los receptores y las R-Smad, facilitando la
fosforilación de las R-Smad. La disociación
de R-Smad fosforiladas forman complejos
con Smad 4 y exponen una NLS que es
reconocida por b-importinas.

Expresión de genes anti-proliferativos (inhibidores de

proteasas, inhibidores de Cdks como p21, p27. p57),
supresión de c-myc.

TGF: Transforming Growth Factor; SARA: Smad Anchor for Receptor Activation
Alberts MBC, 2008
 Flujos de componentes de señalización de la vía de TGF-b

Las flechas naranjas indican la

activación del receptor. Los
complejos de TGF-β/RI/RII activos
se endocitan por 2 vías, una
dependiente de clatrina (en verde)
que facilita la translocación nuclear
de R-Smad, y otra dependiente de
caveolina (marrón) que promueve
la ubiquitinación y degradación.
Las flechas violetas indican
transporte nucleo-citoplasmático.
Los grupos fosfatos y la ubiquitina
se representan por círculos verdes
y rojos, respectivamente.

Entre los genes activados por Smads están los que codifican para Smads inhibidoras o I-Smads.
Las I-Smads compiten con las R-Smads por la unión al receptor activo, interaccionan con
factores de ubiquitinación Smurf, promoviendo la degradación de receptores y Smads en
proteosomas, y también reclutan fosfatasas que defosforilan a los receptores y Smads.

Smurf: Smad ubiquitination regulatory factors)

 Ciertos receptores activan la proteólisis regulada
de inhibidores citoplasmáticos.
El NF-B es un factor de transcripción heterodimérico expresado en la mayoría de las células y que en condiciones
basales es secuestrado en el citosol por el inhibidor I-Ba. Citokinas inflamatorias como el TNFa e interleukina-1
estimulan receptores que activan una cascada de quinasas citosólicas (TAK1  IKK) que fosforilan al inhibidor I-Ba
en sitios (fosfodegrones) reconocidos por una E3 ubiquitina ligasa que lo marca para su degradación en proteasomas.
El NF-B libre expone una NLS que le permite translocarse al núcleo y regular numerosos genes.

TAK1:
TGFβ-Activating El inhibidor I-Ba
Kinase-1 enmascara una NLS
en NF-B.

(IKK)

Lodish et al MCB2004
 La vía de señalización de Wnt inhibe la proteólisis de b-catenina
En ausencia de estimulación b-catenina es reclutada a un complejo con axina y APC donde es fosforilada por las kinasas
casein kinasa I y GSK-3b. El residuo fosforilado es reconocido por una E3 ubiquitina ligasa que marca la b-catenina para su
degradación en el proteosoma. El factor extracelular Wnt estimula al receptor frizzled (B), y activa una vía que inhibe la
formación del complejo, permitiendo la acumulación de b-catenina en el citosol y su translocación al núcleo donde regula la
expresión de numerosos genes involucrados en proliferación y diferenciación.

El co-receptor LRP se asocia al

complejo Wnt/Frizzled y posteriormente
recluta y es fosforilado por CK1 y GSK3.
La fosforilación es requerida para
reclutar las proteínas “scaffold”
Dishevelled, axin y APC al complejo y su
inactivación.
 Delta-Notch regulan diferenciación neural

Notch y Delta son proteínas de transmembrana involucradas en un mecanismo de diferenciación celular denominado
“inhibición lateral”. En Drosophila este mecanismo es empleado para regular la diferenciación de neuronas sensoriales en
la epidermis de la mosca. La expresión del ligando Delta en la superficie de precursores neuronales interacciona con el
receptor Notch en las células adyacentes, induciendo la proteólisis de Notch y la generación de un fragmento intracelular
que se transloca al núcleo e inactiva la expresión de genes proneurales y promueve la diferenciación epitelial.

Parte del tórax de Drosophila mostrando

un grupo de células mutantes con Delta
inactivado. Por lo tanto la inhibición
lateral no ocurre y todas las células
del grupo se diferencian en sensoriales.
Lodish et al MCB2004; MBC Alberts et al 2002
 Sistema de señalización en plantas
Respuesta al etileno

Los receptores regulan

negativamente la vía de
señalización

Triple respuesta mediada por el etileno

en el crecimiento de plántulas. La
EIN: Ethylene INsensitive
obstrucción (barra amarilla) induce la
generación de etileno el cual estimula
el 1) acortamiento, 2) engrosamiento, y
3) curvatura del tallo o raíz, protegiendo
el tejido de crecimiento apical.

El etileno es un gas que actúa como un importante factor regulador del crecimiento y mecanismos de defensa en plantas. Los
receptores de etileno son proteínas de transmembrana localizadas en el retículo endoplásmico. En ausencia de etileno los
dominios citosólicos de los receptores interaccionan y activan una quinasa de Ser/Thr denominada CTR. CTR fosforila y promueve
la degradación de factores de transcripción (EIN) que activan la respuesta transcripcional al etileno. La unión del etileno al receptor
inhibe la activación de CTR, lo cual permite que los factores EIN se acumulen y regulen la expresión/represión de cientos de genes
controlados por etileno. La deleción de EIN produce un fenotipo insensible al etileno (Ethylene Insensitive).
 Sistema de señalización por auxinas

auxina: ácido indolacético

Auxina es una hormona que promueve

la elongación de las células vegetales.
En ausencia de auxina el factor de
transcripción ARF que media la
respuesta a auxina interacciona con
proteínas represoras (Aux/IAA) que
suprimen su actividad. La auxina
interacciona con receptores nucleares
que inducen la degradación del
represor en proteosomas.

ARF: Auxin Response Factor

 Sistema de señalización en plantas
Sensado de luz
Los fitocromos median el crecimiento y desarrollo
de las plantas en respuesta a luz roja.
Las fototropinas regulan el fototropismo, apertura
de estomas y localización de cloroplastos. Son
Ser/Thr kinasas asociadas a membranas, los
dominios LOV sensan la luz a través de flavin
mononucleótidos (FMN). La absorción de luz induce
cambios conformacionales que activan la kinasa.

Los fitocromos son Ser/Thr-kinasas diméricas que se activan con luz

roja (650-670nm) y se inactivan con luz roja lejana (705-740 nm). La
activación resulta de su autofosforilación. Los fitocromos activos se
translocan al núcleo donde interaccionan con proteínas reguladoras de la
transcripción. Los criptocromos y fototropinas son otros fotosensores Kimura & Kagawa, COPB 2006
proteicos que responden a la luz azul (320-500 nm).