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poblaciones microbianas
Crecimiento a nivel individual. Crecimiento de
poblaciones: medida de masa y nº de células.
Crecimiento balanceado. Cinética de crecimiento. Curva
de crecimiento en sistema cerrado (batch, discontínuo)
Introducción al crecimiento microbiano
• Puntos de vista del estudio:
– Individual: Ciclo celular
• Replicación DNA y segregación de
cromosomas
• Síntesis de nuevos materiales
• Coordinación de la replicación y la
división celular
– Poblacional
• Cinética del crecimiento
• Parámetros cinéticos: tiempo de
generación (g), tasa de crecimiento
• Factores ambientales que afectan
al crecimiento
– Físicos
– Químicos
Crecimiento bacteriano
• Aumento en el # de células más que en su tamaño
• Mecanismo fisión binaria
– Duplicación de DNA
– Duplicación de macromoléculas, monómeros, iones
– Síntesis de membranas y pared celular
– División celular
• Tiempo de generación variable (prom. 1 ‐ 3 hr)
– Depende de factores genéticos, nutricionales y ambientales
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Fisión binaria
• Fase C
• n = 1
• Fase D
n=?
Medida del número de individuos (I)
• Métodos directos:
– Cámara de Neubauer o Petroff‐Hauser (para levaduras y
células mayores que las bacterianas)
– Contadores electrónicos de partículas (contador Coulter)
• Métodos indirectos:
– Métodos turbidimétricos (ópticos):
• Espectrofotómetro (mide luz transmitida)
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Cuenta en Cámara
Método turbidimétrico
El espectrofotómetro mide la turbidez
como la cantidad de luz que desvía un
cultivo, en unidades de absorbancia
(DO)
Contadores electrónicos de
partículas (contador Coulter)
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Medida del número de individuos (II)
• Métodos directos:
– Recuento de UFC = viables por siembra de
muestras de diluciones en placas de Petri
– Recuento de UFC a partir de grandes volúmenes
de suspensiones diluidas:
• se hacen pasar por filtros de nitrocelulosa o
equivalentes (ej.: sistema Millipore®), y se incuban
sobre medio sólido
Dispersión sobre
Medio líquido en sobrefusión superficie
Filtración por membrana de Millipore® de una
muestra (en muestras muy diluidas)
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Medida del crecimiento por masa
celular (I)
• Métodos directos:
– Determinación del peso húmedo
– Determinación del peso seco
– Determinación del N total
– Determinación de algún componente característico:
• ADN, ARN
• Proteínas
• ATP
• Clorofilas (en fotosintéticos)
Medida del crecimiento por biomasa (II)
• Métodos indirectos:
– Consumo de nutrientes
• QO2 (consumo de oxígeno)
• QCO2 (consumo de dióxido de carbono)
– Productos del metabolismo
• Producción de ácidos orgánicos
• Producción de CO2
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Cuando se inoculan células a un medio de
cultivo?
Crecimiento balanceado (=equilibrado)
• El número de células, cantidad de biomasa,
concentración de proteínas, ácidos nucléicos, etc.
evolucionan en paralelo (cambian en la misma forma)
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Cinética de crecimiento en cultivo discontínuo (batch)
Importancia?
Ecuación 1 N= No x 2n
Ecuación 2 n= T_
td
No N
2n
Ec. 1. N= No x 2n
No = # de células al inicio
N = # de células después de “n” generaciones
n = # de generaciones o duplicaciones
Ec. 3 N = N0 2T/td
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Si se inoculan N bacterias que se duplican cada 3 horas en un medio de cultivo
fresco... después de 3 h tendremos 2N bacterias, en otras 3 horas 4N..
N = N0 2T/td
Las ecuaciones exponenciales son difíciles de manejar gráficamente, se
transforman en una recta, aplicando logaritmos en los dos términos y
resulta:
Ecuación 4 ln N = ln N0 + (T/td) ln 2
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Ejercicios:
4. Cuánto tiempo tardará una población inicial de 6x102 para llegar a 1.3 x
104bacterias?
R2=1.31x105
R3= 5
R4=33 h
Ecuación 5
Ln N – Ln N0 = μ
t
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Para calcular el Td, consideramos que N=2N0
2N0 = N0 eμtd
Ln2+LnN0 = LnN0 +μtd
Crecimiento en sistemas cerrados
líquidos
• El más habitual en laboratorio
• Cultivo en frascos, tubos, etc.
• No hay aporte nuevo de nutrientes ni es
posible eliminar los productos de desecho del
cultivo
• Se desarrolla a través de una curva
característica de crecimiento
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Cultivo continuo
(sistema abierto)
• Cultivo balanceado que se mantiene por
tiempo indefinido, por un flujo de nutrientes
contínuo; que incluye:
– Una cámara de cultivo de volumen constante
– A la que llega un suministro de nutrientes desde
una cámara reservorio
– Desde la cámara de cultivo se elimina parte del
cultivo y de sustancias tóxicas por un dispositivo
de rebosadero
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