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Ciclo celular y crecimiento de 

poblaciones microbianas
Crecimiento a nivel individual. Crecimiento de 
poblaciones: medida de masa y nº de células. 
Crecimiento balanceado.  Cinética de crecimiento. Curva 
de crecimiento en sistema cerrado (batch, discontínuo)

Introducción al crecimiento microbiano 

• Puntos de vista del estudio:
– Individual: Ciclo celular
• Replicación DNA y segregación de 
cromosomas
• Síntesis de nuevos materiales  
• Coordinación de la replicación y la 
división celular

– Poblacional
• Cinética del crecimiento
• Parámetros cinéticos: tiempo de 
generación (g), tasa de crecimiento
• Factores ambientales que afectan 
al crecimiento
– Físicos
– Químicos

Crecimiento bacteriano
• Aumento en el # de células más que en su tamaño
• Mecanismo  fisión binaria
– Duplicación de DNA
– Duplicación de macromoléculas, monómeros, iones 
– Síntesis de membranas y pared celular 
– División celular
• Tiempo de generación variable (prom. 1 ‐ 3 hr)
– Depende de factores genéticos, nutricionales y ambientales

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Fisión binaria

• Fase C

• n = 1

• Fase D

n=?

Medida del número de individuos (I)

• Métodos directos:
– Cámara de Neubauer o Petroff‐Hauser (para levaduras y 
células mayores que las bacterianas)
– Contadores electrónicos de partículas (contador Coulter)

• Métodos indirectos:
– Métodos turbidimétricos (ópticos):
• Espectrofotómetro (mide luz transmitida)

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Cuenta en Cámara

Método turbidimétrico
El espectrofotómetro mide la turbidez
como la cantidad de luz que desvía un
cultivo, en unidades de absorbancia
(DO)

La célula bacteriana dispersa la luz, de


manera que no es detectada por el
detector sensible a la luz.

La curva estandar relaciona la DO con


el #células/mL. Una vez que se
obtiene, esta curva puede usarse para
convertir cualquier medida de DO en
#células/mL.
Por ejemplo, a partir de esta curva, una
lectura de 1,6 unidades de DO significa que el
cultivo contiene 1x108 células /mL.

Contadores electrónicos de
partículas (contador Coulter)

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Medida del número de individuos (II)

• Métodos directos:
– Recuento de  UFC = viables por siembra de 
muestras de diluciones en placas de Petri
– Recuento de UFC a partir de grandes volúmenes 
de suspensiones diluidas:
• se hacen pasar por filtros de nitrocelulosa o 
equivalentes (ej.: sistema Millipore®), y se incuban 
sobre medio sólido

Dispersión sobre
Medio líquido en sobrefusión superficie

Filtración por membrana de Millipore® de una 
muestra (en muestras muy diluidas)

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Medida del crecimiento por masa 
celular (I)
• Métodos directos:
– Determinación del peso húmedo
– Determinación del peso seco
– Determinación del N total
– Determinación de algún componente característico:
• ADN, ARN
• Proteínas
• ATP
• Clorofilas (en fotosintéticos)

Medida del crecimiento por biomasa (II)

• Métodos indirectos:
– Consumo de nutrientes 
• QO2 (consumo de oxígeno)
• QCO2 (consumo de dióxido de carbono)
– Productos del metabolismo
• Producción de ácidos orgánicos
• Producción de CO2

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Cuando se inoculan células a un medio de 
cultivo?

Crecimiento balanceado (=equilibrado) 
• El número de células, cantidad de biomasa,
concentración de proteínas, ácidos nucléicos, etc.
evolucionan en paralelo (cambian en la misma forma)

• El incremento por unidad de tiempo de los


constituyentes de la población es un valor constante:

• y el nº de células, la masa u otros componentes se


duplican en un mismo lapso de tiempo
Let’s take look at animation
http://www.biology.arizona.edu/biomath/tutorials/Applications/Population.html

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Cinética de crecimiento en cultivo discontínuo (batch)

Importancia?

Considerando que el cultivo tiene un crecimiento equilibrado en


la ecuación 1. “N” puede representar cualquiera de estos
factores.

Ecuación 1 N= No x 2n

No = número inicial de células


N= número de células después de n generaciones
n= número de generaciones

Como n= número de generación y td es el tiempo que transcurre,


en cualquier tiempo de cultivo (T) se puede calcular

Ecuación 2 n= T_
td

No N

2n

Ec. 1. N= No x 2n
No = # de células al inicio
N = # de células después de “n” generaciones
n = # de generaciones o duplicaciones

Ec. 2 n= T Tiempo de crec. Exp.


td tiempo de duplicación

combinando las ec. 1 y 2:

Ec. 3 N = N0 2T/td

1. Conociendo n y T se puede calcular td = tiempo de


generación (g) para diferentes poblaciones bacterianas
creciendo exponencialmente en diferentes condiciones de
crecimiento.

2. Los Tiempos de generación son buenos indicadores del


estado de salud fisiológico de una población bacteriana.

3. Se utilizan frecuentemente para evaluar el efecto + o – de


algún tratamiento sobre el cultivo bacteriano

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Si se inoculan N bacterias que se duplican cada 3 horas en un medio de cultivo
fresco... después de 3 h tendremos 2N bacterias, en otras 3 horas 4N..

Modelo de crecimiento en escalera Se considera que hay


crecimiento sincrónico que
se ajusta a un modelo
geométrico de crecimiento
es decir que el aumento de
la población se dá en
puntos discretos (3, 6, 9,
12, etc. horas) . Pero en la
práctica aún en las
condiciones óptimas de
crecimiento esto no se
obtiene, porque?

•Porque las bacterias generalmente


pueden encontrarse en diferentes
etapas del proceso de división celular
por lo que el cultivo no está
sincronizado.

•Incluso si se iniciara con 1 sola


célula, la sincronicidad se mantendrá
solamente por algunas generaciones.

•Así, se observa que la gráfica de


crecimiento es de tipo exponencial,
que permite utilizar modelos con
funciones exponenciales para cálcular
parámetros de crecimiento y
predecirlo a diferentes tiempos.

 N = N0 2T/td
Las ecuaciones exponenciales son difíciles de manejar gráficamente, se
transforman en una recta, aplicando logaritmos en los dos términos y
resulta:

Ecuación 4 ln N = ln N0 + (T/td) ln 2

Donde (T/td)=µ = constante o tasa de crecimiento

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Ejercicios:

1. Si se inoculan 1.2 x103 bacterias en un medio de cultivo y después de 4 horas de


incubación creciendo exponencialmente se obtienen 1.8 X105 bacterias.
n=?
g =?
td=?

2. Cuántas bacterias habrá en un cultivo después de 18 horas si este se inocula con


1x102 bacteria que tiene un td= 3 horas

3. Con cuántas bacterias deberá inocularse un medio de cultivo si queremos tener


81,920 bacterias después de 12 horas?

4. Cuánto tiempo tardará una población inicial de 6x102 para llegar a 1.3 x
104bacterias?
R2=1.31x105
R3= 5
R4=33 h

Otra forma de representar la cinética es considerando el incremento


en el número de células (dN) en un intervalo corto de tiempo (dt).
En este caso, la ecuación que describe la cinética es la siguiente:

Ecuación 5

Una recta con m=k=µ

A la (μ), y se le conoce como constante de crecimiento (tasa de


crecimiento). Se puede calcular , despejando

Ln N – Ln N0 = μ
t

También se transforma en la siguiente función exponencial:

Ecuación 6 y 7 N = N0 eμt = X = X0 eμt

Es la ecuación general del crecimiento exponencial.

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Para calcular el Td, consideramos que N=2N0
2N0 = N0 eμtd
Ln2+LnN0 = LnN0 +μtd

Ln2+LnN0 - LnN0 = μtd

Ln2+LnN0 - LnN0 = μtd


Ln 2 = td
μ
Ejercicio:
Si a un t0 = 2h se cuantifican N = 9.6x102 células/mL
Y a t = 8h: N = 4.7x106
Calcular el valor de µ y Td µ =1.42 h-1
Td = 0.48 horas

Crecimiento en sistemas cerrados 
líquidos
• El más habitual en laboratorio
• Cultivo en frascos, tubos, etc.
• No hay aporte nuevo de nutrientes ni es 
posible eliminar los productos de desecho del 
cultivo
• Se desarrolla a través de una curva 
característica de crecimiento

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1

Cultivo continuo
(sistema abierto)
• Cultivo balanceado que se mantiene por 
tiempo indefinido, por un flujo de nutrientes 
contínuo; que incluye:
– Una cámara de cultivo de volumen constante
– A la que llega un suministro de nutrientes desde 
una cámara reservorio
– Desde la cámara de cultivo se elimina parte del 
cultivo y de sustancias tóxicas por un dispositivo 
de rebosadero

Medio fresco Válvula para


desde reservorio controlar el flujo
f (en ml/h)

Pérdida neta células:


-dx/dt = x·D D = f/v
Crecimiento bruto: (en h-1)
dx/dt = x· μ
v
Crecimiento neto: dx/dt =
x· μ - x·D = = x (μ-D) x
En equilibrio μ = D; luego
dx/dt = 0 y x se hace
constante
f (en ml/h)

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