Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Unidad de Aprendizaje: Sistemas de Control de Calidad

Enero – Julio 2018

Profesores responsables:

Hilda Pérez Cervantes

Aura P. Hernández Olicón
Ana María García Vázquez
Guadalupe Elizabeth Jiménez Gutiérrez

Alumna:
Reyes Espinoza Pilar Rosario

Práctica N.5

DETERMINACIÓN DEL VOLUMEN MÍNIMO DE LECTURA. OBSERVACIÓN DEL

“EFECTO MENISCO” Y EVALUACIÓN DEL EFECTO DE ARRASTRE Y ACARREO.

5QM2

Equipo: 16
Sección: 4

Fecha de entrega: Abril 6, 2018.

Introducción
Se considera como volumen mínimo, al mínimo volumen contenido en una cubeta a
partir del cual la lectura se estabiliza y no varía con el agregado de más líquido. Dicho
control nos asegura que toda la luz pase por la solución y no pase “por arriba” o por el
menisco, lo que produciría resultados erróneos. Este control es importante también
desde el punto de vista económico, pues cuanto menor sea el volumen mínimo, más
economía se puede lograr en el uso de reactivos. Es fundamental realizarlo cuando se
lo utiliza por primera vez y sobre todo cuando el aparato es nuevo pues muchas veces
el fabricante indica un valor mínimo inferior al real, lo que puede acarrear serios errores
en las determinaciones.
Efecto de acarreo, al efecto generado por la aparición o aumento de la señal del
analíto o estándar interno causado por la contaminación de muestras anteriores.

Objetivos
Determinar el volumen mínimo que un fotómetro puede utilizar, para obtener lecturas
confiables.
Evaluar la magnitud del efecto con que el menisco afecta las mediciones, cuando se
utilizan volúmenes inferiores al mínimo.
Determinar si un sistema analítico o equipo presenta o no el efecto acarreo, a partir del
empleo de soluciones coloridas de dos diferentes concentraciones, mediante un
procedimiento sencillo.

Fundamento.
Los fotómetros y espectrofotómetros utilizan celdas de diferente volumen, que van
desde menos de 200 μl hasta 3 ml. Por lo que es necesario investigar en cada equipo
el volumen mínimo necesario de a cuerdo al tipo de celda, para realizar la
determinación analítica sin que se afecte la lectura de absorbancia o transmitancia, por
la difracción del haz de luz en el efecto menisco.
La contaminación de reactivos entre determinaciones, provoca interferencias por el
efecto de acarreo, el cual se produce por un deficiente lavado de las celdas. Estas
interferencias pueden causar:

1. Que la concentración del mesurado anterior sea elevada y el residuo que queda
aumente la concentración.
2. Que la concentración sea baja debido a residuos de agua de lavado que diluye
la concentración de la muestra.
3. Que la matriz que contiene la reacción previa tenga la capacidad de afectar
alguna prueba siguiente.
Método
Resultados

BITÁCORA DE RESULTADOS FECHA: Marzo 23, 2018

Determinación del volumen mínimo de lectura, evaluación y observación del
Efecto acarreo.

Resultados y observaciones:
Efecto menisco.
Tabla No.1 Celda de volumen reducido
Volumen (μL) Absorbencia
0 0
50 0.005
100 0.005
150 0.009
200 0.007
250 0.058
300 0.255
350 0.305
400 0.53
450 0.812
500 0.934
550 1.32
600 1.024
650 1.024
700 1.024

Tabla No. 2 Celda de volumen completo

Volumen (μL) Absorbencia

0 0
100 0
200 0.009
300 0.014
400 0.099
500 0.099
600 0.21
700 0.244
800 0.531
900 0.812
1000 0.934
1100 1.032
1200 1.04
1300 1.045
1400 1.045
Espectrofotómetro: Biomedica
Marca: DLAB
Codificación del usuario: 1
Unidades: nanómetros
Longitud de onda en la que se hicieron las mediciones: 500nm.
Tipo de celda utilizada: volumen semireducido
Reactivo utilizado: Dicromato de potasio
Volumen seleccionado: 50 μL
Absorbencia en la que se observa el efecto menisco: 1.024
Volumen en el que se observa e efecto menisco: 550 μL
Volumen mínimo: 600 μL
Volumen necesario para obtener lecturas adecuadas: 600 μL

Efecto acarreo
Solución sin intercalar

Solución A Absorbencia Solución A Absorbencia

1 0.385 1 1.165
2 0.372 2 1.174
3 0.375 3 1.181
4 0.357 4 1.178
5 0.356 5 1.172
Media 0.369 Media 1.174
Desviación estándar 0.01108 Desviación estándar 0.00547
CV 3.0027 CV 0.4659

Reactivo utilizado: Agua destila y Dicromato de potasio al 8%

Longitud de onda a la que se hicieron las lecturas: 500nm
Concentración de la solución A: 0.08%
Concentración de la solución B: 0.32%

Formula del coeficiente de variación

CV= (Desviación estándar/ Media)(100)

Cálculos:

CV Sol. A= (0.01108/0.369)(100)= 3.0027

CV Sol. B= (0.00547/1.174)(100)= 0.4659

Soluciones intercaladas
 Solución A Absorbencia Solución A Absorbencia
1 0.375 1 1.098
2 0.452 2 1.129
3 0.433 3 1.085
4 0.4 4 1.076
5 0.411 5 1.089
Media 0.4142 Media 1.0954
Desviación estándar 0.0265 Desviación estándar O.01822
CV 6.3978 CV 1.6633

Soluciones sin intercalar Soluciones intercaladas

Sol. A Sol. B Sol. A Sol. B
Media 0.369 1.174 0.4142 1.0954
CV 3.0027 0.4659 6.3978 1.6633
% Error 12.249 -6.72

Cálculos

% Error=((Vo-Vr)/Vr)x100
% Error a=(0.4142-0.369)/0.369)x100=12.249
% Error b=((1.095-1.174)/1.174)x100=-6.72

¿El sistema analítico presenta efecto de acarreo?

Sí
Identificación de puntos críticos del sistema
analítico
 Celdas sucias
 Celdas con residuos de reactivos
utilizados anteriormente.
 Restos de agua
 Lavado incorrecto de las celdas.
 No utilizar agua destilada en el lavado
del material.
 Colocar un volumen inferior en la celda
al que el espectrofotómetro puede
detectar.
Acciones correctivas
 Lavar el material
 Utilizar agua destilada para enjuagar las
celdas
 Dejar secar bien las celdas y verificar que
no tengan restos de agua.
 Conocer el volumen mínimo para la lectura
en el espectrofotómetro.

Observaciones.
Los principales puntos críticos que se han encontrado son por errores por paret del analista
los cuales se pueden prevenir.

Acciones preventivas para los procedimientos.

Personal capacitado y conocedor de método analítico para así se puedan prevenir los
errores debido a realizar mal el procedimiento del análisis o desconocer el
funcionamiento del equipo.

Gráfico 1. Efecto Menisco en celdas con volumen reducido.

Gráfico 2. Efecto menisco en celdas de volumen completo.

1.2
A
b1
s
o
0.8
r
0.6
b
e
0.4
n
c
0.2
i
a0
100 200 300 400 500 600Volumen
700 (microlitros)
800 900 1000 1100 1200 1300 1400

No se presenta efecto menisco

Gráfico N.3 Efecto de arrastre

 1.4

1.2
Valor real

0.8 Solución A
Solución B
0.6 Solución A Intercalada
Solución B Intercalada

0.4

0.2

0
1 2 3 4 5

Pregunta extra
Volumen reactivo
Volumen requerido para realizar una determinación analítica de una muestra, de
determinado reactivo, para analizar una muestra y el resultado sea confiable.

Volumen muestra
Volumen requerido de una muestra de la cual se realizara una determinación analítica,
suficiente para que el análisis sea confiable.

Repercusiones clínicas
Efecto menisco
Como bien sabemos en el área clínica es sumamente delicado el dar un resultado no
confiable o erróneo, ya que se ve involucrado el estado de salud de pacientes.
El efecto menisco puede repercutir en los resultados alterando la concentración de
diversas sustancias analizadas, al no conocer el volumen mínimo con el que se puede
operar un espectrofotómetro en una celda ya sea de volumen completo o reducido,
puede provocar un efecto menisco que a su vez al ocasionará un valor elevado de la
absorbencia de la muestra, por ejemplo: en una determinación de glucosa el valor real
de la concentración en sangre puede ser de 282 mg/dl, pero al presentarse el efecto
acarreo el valor puede incrementar a mas de 350 mg/dl, éstos valores no son normales
para un paciente sano, por lo que involucra un riesgo mayor al tratarse de un paciente
diabético debido al control que llevan en sus valores de glucosa.
Efecto Acarreo
Este efecto por su parte puede provocar que la concentración de una sustancia cambie
su concentración, disminuya o incremente. Puede disminuir si la celda utilizada
contiene residuos del agua con la que fue lavada, esto hará que la muestra se diluya,
como ejemplo al realizar una prueba en el área de bacteriología para determinar el
número de UFC de determinada bacteria, al realizar diluciones el tubo ocupado tiene
restos de agua la dilución será un poco mayor, lo que al momento de realizar la lectura
de dicha muestra la carga bacteriológica resultada menor a la que realmente es. Por el
contrario en una muestra de sanguínea para medir el la concentración de colesterol en
sangre, la celda utilizada no fue lavada y la muestra anterior era de un paciente con
lipemia al realizar la lectura de la muestra del paciente sano, su valor será elevado
debido a residuos con alta concentración de la muestra anterior.

Selección de celda y espectrofotómetro

En base a los resultados obtenidos puedo decir que en caso de encontrarme con una
muestra de un paciente que requiera de una determinación sanguínea de equis
sustancia, si el paciente es un neonato, o una persona de la tercera edad que por lo
regular son a quienes es mas difícil extraer muestras de sangre y por lo tanto mi
muestra será miuy poca, a lla hora de obtener el suero, para que pueda obtener una
cantidad mínima que e espectrofotómetro pueda realizar una determinación debo de
utilizar una celda de volumen reducido y utilizaría el Espectrofotómetro Genesys 2. Ya
que con celda de volumen reducido el volumen mínimo que requiere es de 300 μL
volumen inferior al del resto de los equipos.
Ahora bien, si cuento con una gran cantidad de muestra, puedo utilizar celdas de
volumen completo y espectrofotómetros como el DLAB 1 y 3 que requieren de un
volumen mínimo de 1300 y 1500 μL en una celda de volumen completo.

Discusión
Para determinación de efecto menisco se utilizaron celdas de volumen reducido y de
volumen completo en el espectrofotómetro DLAB N.1 se determino en las celdas de
volumen reducido que tiene efecto menisco en el volumen de 550 μL con una
absorbencia de 1.32 UI, es el volumen en el cual se detecto la absorbencia más alta, y
fue obtenido antes de detectar las tres lecturas constantes por de bajo de ese valor,
que fueron de 1.024, como lo podemos observar en el Gráfico N.1. Lo cual nos indica
que el haz de luz incide en el menisco provocando que la luz se difracte, lo que da
como resultado una lectura de absorbencia elevado con los valores ya mencionados. El
celdas de volumen completo no se observo el efecto menisco, podemos corroborar
esto con el Gráfico N.2, la causa por la cual no logramos ver este efecto es debido a
que las alícuotas de la solución eran más grandes (100 microlitros), al adiciona el
volumen, sobrepaso el punto en el cual el haz de luz pudo haber detectado el volumen
exacto para que se lograra ver tal efecto. El volumen mínimo para la celda con volumen
completo es de 1300 μL ya que en este volumen alcanza una absorbencia constante de
1.045 UI.
En los resultados grupales para el volumen mínimo en celdas de volumen completo en
el espectrofotómetro el volumen es superior a 1000 μL volumen mínimo. En el Genesis
20 el volum3n mínimo fue de 1000 μL; DLAB 1 Y 2 de 1300 y 1400 respectivamente.
Para las celdas de volumen reducido el volumen mínimo requerido es menor que para
las celdas de volumen completo, para el Espectrofotómetro Genesys 4: 300 μL; para
DLAB 3 y 4 es de 650 y 750 μL respectivamente.

Para efecto acarreo en las 5 lecturas que se realizaron si intercalar de la solución A, el

resultado de la absorbencia es muy similar entre ellas, pero no son iguales con una
Desviación estándar de 0.01108. Las condiciones bajo las que se realizó las lecturas
fueron las mismas, por el mismo analista, por lo cual no se explica cómo es que los
resultados no son iguales, esto es a lo que le llamamos incertidumbre. También
podemos observar esto en las lecturas realizadas a la solución B sin intercalar con una
desviación estándar de 0.00547. Al observar los resultados de la absorbencia de las
lecturas A y B intercaladas observamos que la desviación estándar es mayor a la
obtenida en las lecturas sin intercalar con 0.0265 y 0.01822 respectivamente, con lo
que podemos notar el efecto de arrastre. Al realizar las lecturas intercaladas de las
soluciones se presenta el efecto arrastre debido a que al lavarlas éstas quedaron con
residuos de agua y también al no ser lavadas correctamente quedan con restos del
reactivo del cual se realizo el análisis anteriormente, por lo cual los valores en la
solución A se ven incrementados (La concentración es menor al de la solución B) y la
absorbencia de las lecturas de la solución B se ven ligeramente disminuidos.
El porcentaje de error en los resultados del grupo para las lecturas realizadas a las
soluciones intercalas en la A: 24.7% y en B: 6.14% que fueron los porcentajes de
error más altos en el equipo 15 con el Genesys 20, debido a que la solución con mayor
concentración es la B, el % Error será mayor en los resultados intercalados del la
solución B.

Conclusiones
Se determinó el volumen mínimo en diferentes espectrofotómetros de manera grupal, y
específicamente en equipo, del DLAB 1. Esto para obtener lecturas confiables.
Se evaluó el la magnitud del efecto menisco, la manera en que afecta las mediciones
cuando el volumen es inferior al mínimo.
Se determino la presencia del efecto acarreo en un sistema analítico cómo afecta un
análisis y también se describieron las acciones preventivas y correctivas.

Referencias:
 UBA, Catedra de física, Fundamentos de espectrofotometría. Disponible en :
http://virtual.ffyb.uba.ar/pluginfile.php/24792/mod_resource/content/2/M4/FUND_
M4_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA_V4.0.pdf

 EGOB, NORMA Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-2013, (Noviembre 20, 2013).