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Tinción de Ziehl-Neelsen:

Fundamento, Reactivos y
Técnica
Por
Katherine Briceño

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La tinción de Ziehl-Neelsen en una técnica de coloración para


identificar microorganismos alcohol-ácido resistentes (AAR). El nombre de
este procedimiento de microbiología hace referencia a sus autores: el
bacteriólogo Franz Ziehl y el patólogo Friedrich Neelsen.

Esta técnica es un tipo de coloración diferencial, lo que implica el uso de


distintos colorantes con la finalidad de crear contraste entre las
estructuras que se desean observar, diferenciar y posteriormente
identificar. La tinción de Ziehl-Neelsen sirve para identifica ciertos tipos
de microorganismos.

Tinción de
Ziehl-Neelsen
Algunos de estos microorganismos son micobacterias (por
ejemplo, Mycobacterium tuberculosis), nocardias (por
ejemplo, Nocardia sp.) y algunos parásitos unicelulares (por
ejemplo, Cryptosporidium parvum). Muchas de las bacterias pueden
clasificarse a través de una técnica común llamada tinción de Gram.

No obstante, algunos grupos bacterianos requieren otros métodos para


poder identificarlos. Técnicas como la tinción de Ziehl-Neelsen requieren
combinaciones de colorantes con calor para fijar el primero a la pared
celular.

Luego viene un proceso de decoloración que permite obtener dos


resultados: resistencia o sensibilidad a la decoloración por ácidos y
alcoholes.

Índice [Ocultar]
 1 Fundamento
o 1.1 Colorante secundario
 2 Reactivos
o 2.1 Colorante primario
o 2.2 Solución decolorante
o 2.3 Colorante secundario (contra-colorante)
 3 Técnica
o 3.1 Procedimiento de tinción ácido-rápida
 4 Referencias

Fundamento
El fundamento de esta técnica de tinción se basa en las propiedades de la
pared celular de estos microorganismos. La pared está formada por un
tipo de ácidos grasos llamados ácidos micólicos; estos se caracterizan por
presentar cadenas muy largas.

Cuando los ácidos grasos presentan estructuras muy largas, estos pueden
retener los colorantes con mayor facilidad. Algunos géneros de bacterias
son muy difíciles de teñir mediante tinción de Gram, debido al alto
contenido de ácidos micólicos de la pared celular.

En la tinción de Ziehl-Neelsen se utiliza el compuesto fenólico carbol


fucsina, un colorante básico. Este tiene la capacidad de interactuar con los
ácidos grasos de la pared celular, la cual es de textura cerosa a
temperatura ambiente.

La tinción con carbol fucsina es mejorada en presencia de calor, debido a


que la cera se derrite y las moléculas de colorante se mueven con mayor
rapidez hacia el interior de la pared celular.

El ácido que se usa posteriormente sirve para decolorar las células que no
fueron teñidas porque su pared no era lo suficientemente afín al colorante;
por lo tanto, la fuerza del decolorante ácido es capaz de eliminar el
colorante ácido. Las células que resisten esta decoloración se llaman
ácido-resistentes.

Colorante secundario

Después de la decoloración de la muestra, esta se contrasta con otro


colorante llamado colorante secundario. Generalmente se utiliza el azul
de metileno o el verde de malaquita.

El colorante secundario tiñe el material de fondo y, en consecuencia, crea


contraste a las estructuras que fueron teñidas en el primer paso. Solo las
células decoloradas absorben el segundo colorante (contra-tinción) y
toman su color, mientras que las células ácido-resistentes conservan el
color rojo.

Este procedimiento se usa frecuentemente para la identificación


de Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae, las cuales son
llamadas bacilos ácido-alcohol resistentes.

Reactivos
Colorante primario

Se usa carbol fucsina al 0,3 % (filtrado). Este colorante se prepara a partir


de una mezcla de alcoholes: fenol en etanol (90 %) o metanol (95 %), y
en esta mezcla se disuelven 3 gramos de fucsina básica.

Solución decolorante

En este paso se pueden emplear soluciones de ácido alcohol al 3 % o ácido


sulfúrico al 25 %.

Colorante secundario (contra-colorante)

El colorante más empleado para realizar el contraste en las muestras suele


ser el azul de metileno al 0,3 %. Sin embargo, también se pueden emplear
otros, como el verde malaquita al 0,5 %.

Técnica

Procedimiento de tinción ácido-rápida

Preparar un frotis bacteriano

Esta preparación se hace en un portaobjetos limpio y seco, siguiendo las


precauciones de esterilidad.

Secado del frotis

Dejar que el frotis se seque a temperatura ambiente.

Calentar la muestra

La muestra se debe calentar aplicando fuego al portaobjeto por debajo. Se


puede hacer una fijación con alcohol cuando el frotis no se ha preparado
con esputo (tratado con hipoclorito de sodio para blanquearlo) y si no se
va a teñir inmediatamente.
M. tuberculosis se elimina con lejía y durante el proceso de tinción. La
termofijación del esputo no tratado no matará a M. tuberculosis, mientras
que la fijación con alcohol es bactericida.

Cubrir la mancha

La mancha se cubre con la solución de carbol fucsina (colorante básico


primario).

Calentar la mancha

Esto se hace durante 5 minutos. Debe notar un desprendimiento de vapor


(aproximadamente a 60 °C). Es importante no sobrecalentar y evitar
quemar la muestra.

Con relación al calentamiento de la mancha, se debe tener mucho cuidado


al calentar la carbol fucsina, especialmente si la tinción se lleva a cabo
sobre una bandeja u otro recipiente en el que se hayan recogido productos
químicos altamente inflamables de la tinción previa.

Solo se debe aplicar una pequeña llama debajo de los portaobjetos usando
un hisopo encendido previamente humedecido con unas gotas de alcohol
ácido, metanol o etanol al 70 %. Evitar usar un hisopo grande empapado
en etanol porque esto es un riesgo de incendio.

Lavar la mancha

Este lavado debe hacerse con agua limpia. Si el agua del grifo no está
limpia, lavar el frotis con agua filtrada o destilada, preferiblemente.

Cubrir el frotis con alcohol ácido

Este alcohol ácido debe estar al 3 %. La cobertura se lleva a cabo durante


5 minutos o hasta que el frotis esté lo suficientemente decolorado, es
decir, de color rosa pálido.
Hay que tomar en cuenta que el alcohol ácido es inflamable; por lo tanto,
debe usarse con mucho cuidado. Se debe evitar estar cerca de fuentes de
ignición.

Lavar la mancha

El lavado debe ser con agua limpia, destilada.

Cubrir el frotis con colorante

Puede ser colorante verde de malaquita (0,5 %) o azul de metileno (0,3


%) durante 1 o 2 minutos, utilizando el tiempo más prolongado si el frotis
es delgado.

Lavar la mancha

Nuevamente debe utilizarse agua limpia (destilada).

Drenar

Se debe limpiar la parte posterior del portaobjeto y colocar la mancha en


un estante de drenaje, para que esta se seque al aire (no usar papel
absorbente para el secado).

Examinar el frotis en el microscopio

Debe usarse el objetivo de 100X y el aceite de inmersión. Escanear el


frotis sistemáticamente y anotar las observaciones pertinentes.

Interpretar los resultados

Teóricamente, los microorganismos que se tiñan de un color rojizo se


consideran ácido alcohol resistente positivos (AAR+).

Al contrario, si los microorganismos se tiñen de azul o verde, dependiendo


del colorante utilizado como contra-colorante, se consideran ácido alcohol
resistente negativos (AAR-).
Referencias
1. Apurba, S. & Sandhya, B. (2016). Essentials of Practical
Microbiology (1st ed.). Jaypee Brothers Medical Publishers.
2. Bauman, R. (2014). Microbiology with Diseases by Body System
(4th ed.). Pearson Education, Inc.
3. Heritage, J., Evans, E. & Killington, A. (1996). Introductory
Microbiology (1st ed.). Cambridge University Press.
4. Morello, J., Granato, P. Wilson, M. & Morton, V.
(2006). Laboratory Manual and Workbook in Microbiology:
Applications to Patient Care (11th ed.). McGraw-Hill Education.
5. Vasanthakumari, R. (2007). Textbook of Microbiology (1st ed.).
B.I. Publications PVT.
6. https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/
7. https://www.itwreagents.com/download_file/ce_ivd_instructions/C
EIVD16/es/CEIVD16_es.pdf

https://es.slideshare.net/tato762/preparacin-y-dispensacin-de-
medios-de-cultivo-para-hongos-y-bacterias

https://www.blog.naturaleza.eldietista.es/2012/01/medio-de-
cultivo-para-hongos.html

https://es.slideshare.net/rebecaoloarte/microcultivo-y-
cuestionario-de-hongos

https://es.slideshare.net/pauledreha/agar-de-dextrosa-y-papa

Agar papa dextrosa


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Aspergillus niger desarrollándose en agar de patata y dextrosa.

El agar de papa y dextrosa (APD1) –en inglés Potato Dextrose Agar (PDA)– y el caldo de
patata y dextrosa son medios comunes de cultivo microbiológico que se preparan a partir
de infusión de patata y dextrosa. El agar de patata y dextrosa es el medio más utilizado
para el crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas o materia vegetal
muerta en descomposición.
El agar de patata y dextrosa puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para inhibir
el crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial.
También puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de
importancia clínica. La base del medio es altamente nutritiva y permite la esporulación y la
producción de pigmentos en algunos dermatofitos. Algunos procedimientos señalan bajar
el pH del medio a 3.5 ± 0.1 con ácido tartárico al 10 %, para inhibir el crecimiento
bacteriano. La infusión de patata promueve un crecimiento abundante de los hongos y
levaduras y el agar es adicionado como agente solidificante

Composición típica[editar]

Gramos Ingredientes

~1000 Agua destilada

4 Patatas
(infusión de sólidos)

20 Dextrosa

15 Agar en polvo

La infusión de patata se puede preparar hirviendo 200 g de patatas cortadas en


rodajas sin pelar en ~ 1 litro de agua destilada durante 30 minutos y luego decantar o
filtrar el caldo a través de una gasa. Se añade agua destilada de manera que el
volumen total de la suspensión es 1 litro. Se añaden 20 g de dextrosa y agar en polvo
(20 g), el medio se esteriliza en un autoclave a 15 psi (121 ºC) durante 15 minutos.
Un medio de crecimiento similar, caldo de patata y dextrosa (abreviado "PD") está
formulado de manera idéntica a la APD, omitiendo el agar.Los organismos comunes
que pueden ser cultivados en PD son las levaduras como la Candida
albicans y Saccharomyces cerevisiae y hongos tales como Aspergillus niger.2

Referencias
Medio de cultivo para hongos: Agar PDA
Publicado por Yago Perez

En esta entrada veremos cómo preparar un medio de cultivo estándar para cultivar hongos:
el Agar PDA.
El Agar Papa Dextrosa o Agar PDA es un medio sencillo que incluye
dextrosa e infusión de patata blanca (Solanum tuberosum).
Es importante resaltar que se han obtenido mejores resultados con la Patata blanca que con
otras variedades.
En este medio los hongos crecen y se reproducen muy fácilmente.
Puede añadirse ácido tartárico al 10% o ácido láctico para bajar el pH hasta 3.5 e inhibir el
crecimiento bacteriano. También pueden añadirse pequeñas proporciones (50-200 ppm) de
antibióticos como cloranfenicol, que resiste bastante bien la esterilización, o eritromicina,
penicilina...
En función del hongo cultivado es probable que no sea necesaria la adición de ningún
antibiótico, pues los propios hongos suelen disponer de potentes antibióticos e inhibidores
del crecimiento bacteriano.

Material Necesario
 Olla, cazuela
 1500 ml de Agua destilada
 200-250g de Patata
 13-18 g de Agar
 13 - 20g de Dextrosa
Los rangos de agar y dextrosa no son equiparables entre sí. Es decir, usar 13g de agar no
implica usar 13 de dextrosa. Se trata de las diferentes variaciones que he observado en la
preparación. Según se quiera un medio más duro se usará más agar. La adición de más
dextrosa irá en función de la cantidad sembrada o los requerimientos del hongo.

Preparación del Agar PDA


1. Tomar 500 ml de agua destilada y cocer en ella una patata de 200 g pelada y
cortada en trozos.
2. En otro recipiente disolver el agar en 500 ml de agua destilada al fuego.
3. Colar la infusión de patata a través de un colador de algodón o un colador
chino.
4. Mezclar ambos líquidos.
5. Agregar la dextrosa
6. Homogeneizar
7. Enrasar a 1000 ml (ya que parte se habrá evaporado y ya no tendremos un
litro).
El pH resultante suele ser de 5.6
Lo mejor es verterlo directamente en los botes que utilizaremos para hacer la siembra de los
hongos y esterilizarlos.
Importante no cerrar del todo los botes (o explotarán) y taparlos con papel de aluminio para
evitar salpicaduras y contaminación.

Se dejan enfriar y se cierran bien los botes hasta su utilización.


INTRODUCCIÓN
Existen numerosos criterios que determinan cual es la mejor prueba de diagnóstico para
una situación dada e incluyen: COSTO, SENSIBILIDAD, ESPECIFICIDAD, RAPIDEZ y
DISPONIBILIDAD. Para el diagnóstico clínico, muchas veces es muy importante
clarificar la meta precisa de la prueba.
a) Sensibilidad: Es la habilidad de una prueba para detectar a TODOS los verdaderos
positivos.
b) Especificidad: Es la habilidad de una prueba para detectar SOLO a los verdaderos
positivos.
Si la prueba es 100% sensible no presentaría falsos negativos (no falla para detectar a los
verdaderos positivos); si la prueba es 100% específica no presentaría falsos positivos (no
falla para detectar a los verdaderos negativos).
Sin embargo, la sensibilidad y la especificidad van de la mano, es decir cuando se afecta uno
también el otro. El efecto esperado es cuando aumenta la sensibilidad, puede disminuir la
especificidad o bien cuando aumenta la especificidad, puede disminuir la sensibilidad. Si
fuera 100% sensible y 100% específica se estaría frente a una prueba perfecta.
Desdichadamente existen pocas pruebas perfectas en el mundo, y se tiene que determinar
un cierto nivel de aceptabilidad.
Esta situación las encontramos mucho en las pruebas de diagnostico inmunologico, como lo
son las pruebas serologicas para la determinación de un agente etiológico que esta
causando cierta enfermedad y las pruebas para la determinación de alergias, que son una
herramienta importante en el diagnostico clínico.
Objetivos:
 DEFINIR LOS CRITERIOS A TOMAR PARA LA REALIZACIÓN DE PRUEBAS
SEROLOGICAS Y ALÉRGICAS.
 DEFINIR EL CONCEPTO DE SEROLOGÍA Y SU APLICACIÓN.
 MENCIONAR LAS DIFERENTES PRUEBAS PARA ÉL DIAGNOSTICO DE ALERGIAS.

A. PRUEBAS DE DIAGNOSTICO SEROLOGICAS


Definición de Serología:
Es un examen del líquido seroso de la sangre (suero, el líquido transparente que se separa
cuando la sangre se coagula) que se utiliza para detectar la presencia de anticuerpos contra
un microorganismo.
En otras palabras, la serología se refiere al estudio del contenido de anticuerpos en el suero.
Ciertos microorganismos estimulan al cuerpo para producir estos anticuerpos durante una
infección activa. En el laboratorio, los anticuerpos reaccionan con los antígenos de formas
específicas, de tal manera que se pueden utilizar para confirmar la identidad del
microorganismo en particular.
Existen varias técnicas serologicas que se utilizan dependiendo de los anticuerpos de los
cuales se sospecha entre las que se pueden mencionar aglutinación, precipitación, fijación
del complemento, anticuerpos fluorescentes y otras.
Los laboratorios de inmunología y serología se concentran en lo siguiente:
 Identificar anticuerpos (proteínas hechas por una clase de glóbulo blanco como
respuesta a un antígeno, una proteína extraña en el cuerpo).

 Investigar los problemas del sistema inmunológico, como


las enfermedades autoinmunológicas (cuando el sistema inmunológico del cuerpo ataca
a sus propios tejidos) y los trastornos de inmunodeficiencia (cuando el sistema
inmunológico del cuerpo no está lo suficientemente activo).

 Determinar la compatibilidad de la sangre para transfuciones.


Forma en que se realiza el examen
La sangre se extrae de una vena (punción venosa), usualmente de la parte anterior del codo
o del dorso de la mano. El sitio de punción se limpia con un antiséptico y luego se coloca un
torniquete (una banda elástica) o un brazalete (utilizado para medir la presión sanguínea)
alrededor del antebrazo con el fin de ejercer presión y restringir el flujo sanguíneo a través
de la vena.
Esto hace que las venas bajo el torniquete se dilaten (se llenen de sangre). Inmediatamente
después, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermético o en
una jeringa. Durante el procedimiento, se retira el torniquete para restablecer la circulación
y una vez que se haya recogido la sangre, se retira la aguja y se presiona moderadamente
sobre el sitio de punción para detener cualquier sangrado.
Animales pequeños:
En los animales pequeños, el área se limpia con un antiséptico y se punza con una aguja o
lanceta para luego recoger la sangre en una pipeta (tubo pequeño de vidrio), en una lámina
de vidrio, sobre una tira de examen o en un recipiente pequeño. Finalmente, se puede
aplicar un algodón o un vendaje en el sitio de la punción si el sangrado persiste. Luego se
analiza la muestra en el laboratorio.
Preparación para el examen
Animales Adultos:
No se requiere ninguna preparación especial para este examen.
Animales recién nacidos o jóvenes:
La preparación física se puede brindar para éste o cualquier examen o procedimiento
depende de la edad, intereses, experiencias previas.
Lo que se siente durante el examen
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunos individuos sienten un dolor
moderado, mientras que otros sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura.
Posteriormente, puede haber una sensación pulsátil.
Razones por las que se realiza el examen
Una serología se puede realizar cuando hay sospecha de infección.
Significado de los resultados anormales
Si se detectan anticuerpos, ha habido exposición a un antígeno. Entre las enfermedades que
se pueden detectar están:
 Sarampión
 Rubéola
 Ántrax
 Brucelosis
 Amibiasis
 Infección micótica
 VSR (virus sincitial respiratorio)
 Tularemia
 Sífilis

Las condiciones adicionales bajo las cuales se puede realizar el examen son:
 Absceso hepático amibiano
 Quinta enfermedad
 Artritis micótica
 Meningitis criptocócica
 Meningitis por hemofilus influenza
 Meningitis meningocócica
 Artritis viral.

Cuáles son los riesgos


 Sangrado excesivo
 Desmayo o sensación de mareo
 Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel)
 Infección (un riesgo leve en cualquier momento en que se presente perforación de la
piel)
 Punciones múltiples para localizar las venas

Consideraciones especiales
Una serología puede determinar si el animal ha estado expuesto a un microorganismo en
particular (antígeno), pero no necesariamente indica que haya una infección activa.
Las venas y arterias varían en tamaño de un paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro,
por esta razón puede ser más difícil obtener una muestra de sangre de algunos animales
que de otros.
Tests serológicos
Elección de los tests serológicos a utilizar
Como ya expuesto, existen hoy en día tres técnicas serológicas que atienden a las
necesidades del control serológico pós-terapéutico: la HAI, IFI y el testinmunoenzimático
de ELISA. Son los llamados tests convencionales, utilizados ampliamente en todo el mundo,
fácilmente obtenibles en el mercado, y con los cuales hay experiencia acumulada, en todos
los países, por más de dos décadas. O sea, sus resultados son indiscutibles y reproducibles.
Si bien hay excepciones, es posible hacer un diagnóstico correcto en más del 98% de los
infectados. Cuando existen reacciones dudosas (en el 2%) debemos recorrer a un
laboratorio especializado. Es evidente que no vamos a intentar tratar a un caso con
serologia dudosa. Es deseable tener la seguridad del diagnóstico serológico, lo que se
obtiene utilizando por lo menos dos tests serológicos de princípios diferentes, o sea, ELISA
y HAI, por ejemplo. En el seguimiento, se recomienda utilizar los mismos tests inicialmente
empleados, para permitir la comparación de resultados.
B. PRUEBA DE DIAGNÓSTICO DE ALERGIAS:
La evaluación diagnóstica, que abarca pruebas específicas, es necesaria para:
 Confirmar el diagnóstico de alergia.
 Distinguir las enfermedades alérgicas de otras enfermedades.
 Desenmascarar alérgenos de los que no se sospechaba antes. para el guiar el
tratamiento.

El diagnóstico de las alergias que tiene que ver con todas las enfermedades alérgicas.
La información específica pertinente a los estados de una enfermedad en particular se
encuentra a continuación:
El Diagnóstico De Las Alergias:
Si los síntomas indican que hay una alergia,
hay que pensar en la posibilidad de que la haya.

Establecer el diagnóstico con ayuda de una historia clínica meticulosa.
Concentrarse en las características de los síntomas.

Confirmar el diagnóstico con medidas objetivas.

Las pruebas cutáneas con IgE o los ensayos in vitro con IgE específica se recomiendan*
cuando:
 Un paciente con síntomas persistentes está expuesto a un alérgenos de ambientes
interiores.
 La enfermedad afecta la calidad de vida.

Se está pensando en la posibilidad de realizar inmunoterapia (para alérgenos de ambientes


interiores o exteriores).
*Las pruebas cutáneas son preferibles a los ensayos in vitro con IgE específica porque las
primeras generan resultados inmediatos, más sensibles y menos caros en la mayoría de los
casos. Los ensayos in vitro se pueden hacer si las pruebas cutáneas no se pueden realizar o
están contraindicadas. Se recomienda la remisión o la interconsulta con un alergólogo o
inmunólo.
¿Que alérgenos provocan enfermedades alérgicas?
 La lista de alérgenos que se han identificado como responsables de producir
enfermedades alérgicas es larga y variada, pero no se han identificado todos los
alérgenos existentes.
 Se recomienda la remisión o interconsulta con un alergólogo o inmunólogo, o con un
dermatólogo.

Pruebas cutáneas para diagnóstico en alergología


Las pruebas cutáneas para el diagnóstico de las enfermedades alérgicas son la aplicación
práctica de las reacciones de hipersensibilidad tipo I y tipo IV de GELL y COOMBS,
además, sirven para establecer la etiología de rinitis alérgica, asma, urticaria, alergia a
los alimentos y dermatitis de contacto. La prueba cutánea de puntura para reacción tipo i y
la prueba de parche para la reacción tipo iv, son los tests más usados.. Consiste en
introducir en la epidermis y en la dermis una cantidad mínima de alergeno.
Historia de las pruebas cutáneas
En 1865 Blackey utilizó polen de pasto (rye grass) y realizó una clasificación. Por su parte,
en 1908 Mantoux realizó una prueba intracutánea. Más tarde, en 1921, se logró la primera
estandarización de un extracto. Tres años después, en 1924 Lewis y Grant realizaron la
prueba cutánea de puntura. Finalmente, en 1970 Pepys modificó la prueba cutánea.
El médico alergólogo actualmente dispone de una serie de alergenos en concentraciones
conocidas, producidos por laboratorios especializados en esta área de la medicina, que le
permiten determinar en forma sensible, específica, económica, rápida y eficaz, el
diagnóstico de la enfermedad alérgica.
Indicaciones:
Para la realización de una prueba cutánea se debe tener en cuenta la historia clínica
detallada, la cual nos hace sospechar de la causa de la enfermedad alérgica: aeroalergenos
(rinitis, asma, dermatitis atópica), alimentos (dermatitis atópica, anafilaxis, urticaria aguda
o de contacto); reacciones a medicamentos, venenos (anafilaxis por picadura de insectos);
lo anterior nos permite dirigir el tratamiento, por medio de medidas preventivas, para
reducir la exposición a los alergenos, en la selección de los antígenos relevantes para el
tratamiento con la inmunoterapia específica, en el caso del asma, la rinitis, y la alergia a
picadura de insectos.
Contraindicaciones
Preñez, el uso de betabloqueadores, síntomas severos de alergia, asma inestable, angina
inestable, dermatitis atópica severa, dermografismo intenso (urticaria facticia),
quemaduras solares, uso de medicamentos que interfieren en la prueba cutánea.
El número de alergenos que se utilicen depende de los datos clínicos, la naturaleza del
problema, la edad del paciente, la exposición a los alergenos intra o extradomiciliarios, los
agentes ocupacionales y de la región del país en donde reside el paciente.
Para la interpretación clínica el médico alergólogo o el veterinario debe tener en cuenta
factores como: los alergenos del sitio donde reside el animal, la importancia de éstos en la
génesis de la enfermedad y la exposición a los mismos.
Tipos de pruebas cutáneas
Prueba de escarificación (scratch- test): consiste en practicar una ligera escarificación y
aplicar en el sitio una gota de alergeno.
Reacción intradérmica: consiste en introducir en la región intradérmica con una
jeringuilla para prueba de tuberculina, una pequeña cantidad de alergeno.

Prueba de puntura (prick test): consiste en depositar en la piel del paciente una gota
de alergeno y luego realizar una puntura a través de la gota con una lanceta especial de 1
mm de longitud. Es la prueba más utilizada.
Estas pruebas son mediadas por inmunoglubulina E; se leen en 15 minutos y hay que
observar la triada de Lewis: pápula, eritema y prurito. El resultado se expresa en milímetros
y sirve para el diagnóstico etiológico de asma, rinitis, alergia a alimentos, alergia a
insecticidas.

Prueba de parche (patch test): se usa para verificar la inmunidad celular o la


hipersensibilidad tipo IV mediada por linfocito T y macrófago. Consiste en depositar sobre
la piel sana el producto que se va a probar, bajo la oclusión de un sello adhesivo. La
lectura se realiza a las 48 y 96 horas y sirve para diagnosticar problemas de dermatitis
eczematosa y alergia a los alimentos e inhalantes como pólenes y ácaros.
Metodología general utilizada para realizar las pruebas cutáneas de
hipersensibilidad inmediata (pruebas de puntura):
Al realizar estas pruebas se deben tener en cuenta ciertos parámetros generales:
1. Utilizar material desechable, guantes, recipientes adecuados para descartar: lancetas,
agujas, jeringuillas, guantes, algodón, etc.; cada prúeba deberá ser rotulada -
CONTAMINADO-. El material deberá ser incinerado.
2. Potencia de los extractos alergénicos: disminuye con el tiempo, la dilución y
exposición a temperaturas crecientes; los reactivos tienen que ser almacenados en el
refrigerador entre 4oC a 8oC, la fecha de expiración debe ser conferida, a pesar de que
la activada alergénica se mantenga por largos períodos.
3. No hay límite de edad para desarrollar las prúebas sin embargo, la reactividad es
menor en los lactantes y en los seniles.
4. No debe realizarse una prueba cutánea de alergia en sitios donde la piel se encuentre
afectada por cuadros de dermatitis activa, donde exista liquenificación o cuando el
paciente tenga dermografismo, en este último caso se puede administrar
antihistamínico antes de la prueba.
5. No hay necesidad de un local especial del consultorio para la realización de las
pruebas, pero luego de terminar, los antígenos se deben retornar al refrigerador.
6. Para la interpretación correcta de las pruebas, el paciente debe estar sin el uso de
antihistamínicos, antidepresivos tricíclicos, etc. Para tener una fiel interpretación, se
debe tener en cuenta lo siguiente: extractos glicerinados producidos por laboratorios
confiables y extractos diluídos para pruebas intradérmicas, un control positivo
(clorhidrato de histamina en la concentración de 1,0 a 10 mg /mL para prueba de
puntura y para prueba intradérmica de 0,01 mg /mL) y un control negativo (solución
salina glicerinada al 50% para prueba de puntura y diluyente para prueba
intradérmica
7. La lectura de las pruebas de puntura se hace a los 15 ó 20 minutos, se mide el mayor
diámetro y su perpendicular en el punto medio, la suma o la media de estos dos
constituye la respuesta y se expresa en milímetros; el alo de eritema es más sensible a
la variación de la potencia del extracto, un eritema de más de 10 milímetros,
independiente de la respuesta de la pápula tiene un valor predictivo de enfermedad
alérgica. Un diámetro de la pápula de 3 milímetros está asociado a enfermedad
alérgica. La presencia de una pápula en el control negativo, está relacionada con
trauma por la lanceta o dermografismo.
8. Dosis de los extractos para prueba cutánea.

Prueba De Puntura
Concentrados glicerinados de 1:20 m/v. Los extractos estandarizados de ácaros pueden ser
probados en la concentración de 10.000 UA/mL. o, 20.000 UBE/mL.
Prueba Intradérmica
Está indicada cuando la prueba de puntura es negativa. La concentración inicial para esta
prueba es el resultado de diluir 100 veces la dosis inicial de la prueba de puntura, pudiendo
aumentar en 10 veces la dilución para descartar un falso negativo.
El factor de dilución es el resultado entre el volumen del extracto en relación con el
volumen total. Por ejemplo: 0,5 mL de extracto en 4,5 mL del diluyente (0,5/5mL de
volumen total) ó 0,2 en 1,8 mL del diluyente) 0,2/2 de volumen total), aumentará la
dilución en 10 veces.
Las pruebas cutáneas de alergia son procedimientos seguros, reacciones locales intensas y
síntomas sistémicos. Aunque pueden ocurrir en indivíduos extremadamente sensibles, o
cuando se utilizan extractos no estandarizados, sin embargo son muy raros.
Se aconseja tener a disposición medicamentos y equipo para emergencias con el fin de
tratar la reacción anafiláctica. Como se trata de una intervención en el sistema
inmunológico del paciente y puede tener reacciones sistémicas graves, el médico que lo
practica, requiere además de conocimientos técnicos, entrenamiento en alergológia e
inmunología. El riesgo de reacciones sistémicas con la prueba cutánea de puntura es de
0,04% y con pruebas intradérmicas 1-2 %.
Falsos Negativos
La IgE del tejido está presente, pero fue administrada una dosis inadecuada de alergeno
para suscitar una liberación suficiente de mediadores con el fín de causar respuesta cutánea
positiva. La administración de extractos de baja potencia o no estandarizados, puede dar
como consecuencia un resultado falso negativo.
Los corticoides inhalatorios y sistémicos, la teofilina, el cromoglicato y los beta-2
adrenérgicos, no tienen significancia en los resultados de la prueba cutánea.
Los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina y propanolol, acentúan la
reactividad cutánea.
A estos factores se suman:
• Mala técnica.
• Edad.
• Crisis aguda de la alérgica.
Falsos Positivos
Se pueden liberar mediadores de la respuesta alérgica no dependiendo de la IgE: con la
aplicación intradérmica de extractos con concentración de glicerina superior al 10 %, y
pacientes con dermografismo.
Pruebas De Parche (Patch Test)
Estas pruebas son usadas para el estudio de reacciones alérgicas Tipo IV mediadas por
linfocitos T - citoquinas - macrófagos las cuales producen lesiones eczematosas y nos sirven
para hacer diagnóstico de dermatitis por contacto y alergia a inhalantes (ácaros, pólenes y
alimentos).
Historia
En 1895, Jadahson la introdujo por primera vez. 1910, Bruno Bloch desarrolló la prueba de
parche. Y en 1916, Cooke la utilizó como diagnóstico.
Existen muchas maneras de realizar la prueba de contacto. La más utilizada consiste en un
pequeño disco de polietileno adherido a una cinta adhesiva de 10 mm que luego es pegada
en la espalda del paciente. En la década del 70 Pirilla introdujo un
nuevo método denominado Finn Chamber, que consiste en una cinta adhesiva que tiene
fijada en su parte central un disco de aluminio de 8 mm de diámetro donde se deposita la
substancia a probar, con esto se permite un mejor control de la respuesta. Actualmente
existe también el thin layer rapid use epicutaneos test (True Test) que ya tiene las
sustancias a testar en la cinta adhesiva y sólo hay que pegarlo en el abdomen del paciente.
Metodología general para realizar las pruebas cutáneas de hipersensibilidad
tardía (prueba de parche)
1. Establecer una batería padrón enumerada.
2. Área de la aplicación: debe ser en una superficie de piel sana que no tenga vellos. Los
sitios preferidos son la espalda y la cara anterior de los brazos.
3. Instrucciones para el paciente: no mojar el área de la prueba, evitar rascarse, no
prácticar ejercicios bruscos que pudieran despegar la cinta, no tomar medicamentos
como corticosteroides ya que bloquean la prueba.

La lectura se realiza a las 48 horas, cuando se retira el parche y luego a las 96 horas.
(-) No reacción.
(?) Eritema pálido, reacción dudosa.
(+) Eritema leve.
(++) Pápula con eritema, edema y vesículas, reacción fuerte.
(+++) Pápula con edema, vesículas grandes o agrupadas, reacción muy fuerte.
(IR) Reacción irritante.
Reacciones Falsas Negativas
 Baja concentración del alergeno.
 Vehículo de la sustancia, equivocado.
 Oclusión mal realizada.
 Lectura efectuada antes de las 48 horas.
 Uso de corticosteroides tópicos en la zona donde se está realizando la prueba (8 días) y
uso de corticosteroides orales o de depósito.

Reacciones Falsas Positivas


 La sustancia probada está en concentración muy alta.
 La prueba se colocó en una área de la piel con eczema o piel irritada +.
 El vehículo que utiliza puede ser irritante para determinados pacientes.
 Reacciones producidas por la cinta adhesiva.
 Pruebas con sólidos en pacientes con dermografismo.
 Síndrome de la piel excitada (angry back).

Complicaciones
Pueden ocurrir cuando se prueban sustancias desconocidas.
Eczematización en la región de la prueba.
Eczematización en otras áreas.
Reacción pustular en el sitio de la prueba (irritación).
Puede quedar hiper o hipocromía en el sitio de la prueba.
Puede haber ulceración y necrosis en el sitio de la prueba.
Inducción de dermatosis en el sitio de la prueba. Fenómeno de Koebner- psoriasis, liquen
plano.
Pruebas biológicas de laboratorio :
Las pruebas biológicas o in vitro (en laboratorio, no en el animal) son formas de evaluación
relativas, que detectan concentraciones comparativas de ciertas clases de inmunoglobulinas
(Ig) que podrían estar presentes en algunas alergias. El nivel de desarrollo y avance
en veterinaria no es aún comparable al alcanzado en medicina humana, por lo que su
efectividad y sensibilidad están aún en estudio.
En muchos países, ésta tecnología ha avanzado mucho, y las pruebas son más depuradas y
sensibles, pero en otras regiones las pruebas disponibles resultan anticuadas, y por ende la
fiabilidad puede ser discutible. Aún así pueden resultar efectivas en la determinación de
causas de alergia, pero teniendo en cuenta sus limitaciones, a fin de sacarles provecho
frente a su alto costo.
Las pruebas deberían ser evaluadas por un alergista que pueda interpretar la relación de los
hallazgos del análisis frente a la historia del animal y teniendo en cuenta su
medio ambiente.
Debería solicitarse la medición de alergenos individuales y evitar el uso de grupos de
alergenos que pueden dar resultados desconcertantes. Evitar las pruebas que miden
alergenos alimentarios o de contacto, ya que su efectividad no está comprobada y pueden
causar desazón en el propietario. Para éste tipo de alergenos, existe otras pruebas mucho
más efectivas y seguras.
En definitiva, ciertas pruebas biológicas pueden servir solamente para que el propietario
tome conciencia de que su animal es alérgico, lo cual ya se sospechaba antes. Los animales
que no presentan alergias también pueden dar resultados positivos en éstas pruebas, lo que
complica la evaluación.
Diagnóstico de las alergias por inhalación
 La selección del número y tipo de alérgenos adecuados para las pruebas depende de lo
que tengan que ver con la historia del paciente, como:

o Exposición significativa.
o Prueba de alergenicidad.
o Disponibilidad de material alergénico adecuado para las pruebas.
 Algunos tipos de polen tienen alergenicidad cruzada; se deben evitar las pruebas
innecesarias y el riesgo de causar reacciones sistémicas.

Diagnóstico De Las Alergias Por Picaduras De Insectos


 Las pruebas cutáneas con venenos específicos confirman la sensibilidad anafiláctica
causada por picaduras de insectos himenópteros (excepto en el caso de los de la hormiga
colorada o Solenopsis invicta).
 Para la detección de la hipersensibilidad a la hormiga colorada se usan extractos del
cuerpo completo de este insecto.
 Los extractos de cuerpo completo se usan para detectar hipersensibilidad respiratoria a
las cucarachas y otros insectos.

Diagnóstico de las alergias por alimentos


Casi todos los alimentos pueden ser alergénicos.
 La presencia o ausencia de reacciones positivas frente a un alimento determinado no
debe considerarse como prueba de la presencia o carencia de sensibilidad a otros
alimentos del mismo grupo (por ejemplo, las legumbres).
 La historia del paciente es fundamental en la selección de los alimentos para las
pruebas.

oPara complementar la historia es posible que el paciente deba llevar un diario
meticuloso de los alimentos que come y de los síntomas que observa.
o Esto puede ser particularmente útil para pacientes con probabilidades de
sufrir anafilaxia inducida por alimentos.
 Las pruebas cutáneas son útiles.

o Un resultado negativo es un indicio poderoso de que ese alimento no es el
responsable de la reacción alérgica.
o Un resultado positivo generalmente exige la correlación con una historia compatible
clara o con una prueba de provocación con el alimento.
o Los resultados correctos a veces se basan en el uso de alimentos frescos.
o
 Los extractos de algunos alimentos, especialmente frutas, bayas y mariscos,
pueden perder la potencia.
 Las pruebas realizadas con alimentos frescos pueden ser de particular
importancia en pacientes con una historia altamente sugestiva.

La historia del paciente es crítica cuando se realizan pruebas para alergias a


alimentos.
 Se debe llevar un diario de los alimentos que el paciente consume y de los síntomas que
observa puede contribuir a identificar alimentos especiales para las pruebas.

o Los diarios de alimentación tienen importancia especial en el caso de los pacientes
que tienen el potencial de presentar anafilaxia inducida por alimentos.
 Las pruebas de provocación con alimentos pueden ser adecuadas, excepto en los
pacientes con historia de anafilaxia.
 Se recomienda la remisión o interconsulta con un alergólogo o inmunólogo.

Alergia a fármacos
Una de las situaciones más complejas en el diagnóstico de las diversas enfermedades
alérgicas la constituyen el diagnóstico de la alergia a medicamentos. Para sentar las bases
de éste diagnóstico es preciso señalar que no todas las reacciones indeseables o adversas
producidas por un fármaco son debidas a un mecanismo alérgico.
La Organización Mundial de la Salud (O.M.S.) define una reacción adversa a un fármaco
como "cualquier efecto perjudicial o no deseado que ocurre tras la administración de una
dosis de un fármaco normalmente utilizado para prevenir, diagnosticar o tratar una
enfermedad". Hay reacciones adversas que están ligadas a una sobredosis, es decir, cuando
se utilizan a dosis más altas de las recomendadas. También estos efectos adversos pueden
estar en relación con el medicamento, el cual puede presentar una serie de efectos
secundarios no deseables pero que son debidos a la propia
naturaleza del mismo, como pueden ser la somnolencia producida tras la toma de
barbitúricos o las molestias gástricas tras la toma de analgésicos. Estas reacciones adversas,
que pueden revestir una mayor o menor gravedad para el individuo, suelen ser, en general,
bastante controlables. Sin embargo, existen otro tipo de reacciones que no son previsibles,
que no dependen de la naturaleza del medicamento y sí, en cambio de la reacción específica
de un individuo frente a éste medicamento. Este último grupo es el constituido por las
reacciones alérgicas a fármacos. El estudio de una alergia a medicamentos requiere una
gran meticulosidad en su ejecución, unas condiciones técnicas adecuadas para realizarlo y
una experiencia probada en este campo.
Los pasos a seguir son los siguientes: en primer lugar, la historia clínica detallada ocupa un
lugar fundamental en el diagnóstico, como ocurre en cualquier otra patología relacionada
con esta especialidad, pero aún adquiere en este caso una mayor relevancia
para poder conocer en profundidad cuáles han sido las manifestaciones clínicas
presentadas y analizar su posible relación con la exposición al medicamento.
Estos síntomas pueden ser muy variados y pueden abarcar desde la presentación de picor;
aparición de habones o ronchas localizadas o generalizadas; edema o hinchazón de la cara
(labios, párpados, pómulos, etc…) o en otras partes del cuerpo; si hubo descamación de la
piel o cambios en la coloración de la misma; si se acompañó de síntomas generales como
dificultad al tragar o para respirar. Por último, si se observo sensación de mareo o pérdida
de conocimiento.
También la duración de la reacción junto con la necesidad de tratamiento para controlarla,
nos ayudarán a comprender la gravedad de la reacción.
Pero la historia clínica choca a veces con factores que le hacen perder su eficacia habitual.
Como es el desconocimiento exacto del nombre del medicamento que provocó la reacción
en el paciente o si tomó varios medicamentos simultáneamente.
También es importante conocer que medicamentos tolera el paciente sin que se produzca
ningún tipo de reacción adversa.
Una vez recogida la historia alergológica, se deben valorar otros datos del paciente como la
presencia de alguna enfermedad como eczema, diarrea, etc, y el tratamiento que sigue.
Todo ello son aspectos a tener en cuenta para la posterior realización de pruebas para
confirmar o descartar la supuesta alergia a un determinado medicamento.
Conclusiones:
 Existen numerosos criterios que determinan cual es la mejor prueba de diagnóstico para
una situación dada e incluyen: COSTO, SENSIBILIDAD, ESPECIFICIDAD, RAPIDEZ y
DISPONIBILIDAD.
 La serología se refiere al estudio del contenido de anticuerpos en el suero.
 Una serología se puede realizar cuando hay sospecha de infección.
 Las pruebas cutáneas para el diagnóstico de las enfermedades alérgicas son la aplicación
práctica de las reacciones de hipersensibilidad tipo I y tipo IV de GELL y COOMBS.

BIBLIOGRAFIA
FRIEDHELM HORSCH, Inmunoprofilaxis De Los Animales
Domésticos. Editorial Acribia España 1986.
IAN. R. TIZARD, Inmunología Veterinaria, quinta edición, editorial
McGraw-Hill interamericana. Collage Station Texas 1996.
HALLIDAY. R. Inmunidad y salud en recién nacidos. Editorial A.m. Vet jl. 1985
Enciclopedia Médica: Serología
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003511.htm
LA PATOLÓGICA LA INMUNOLOGÍA Y
SEROLOGÍA http://www.healthsystem.virginia.edu/UVAHealth/adult_path_sp/immun
o.cfm
SELECCIÓN DE LA MEJOR PRUEBA
DIAGNOSTICA http://www.engormix.com/s_articles_view.asp?art=186
Pruebas cutáneas para diagnóstico en alergología
Santiago E. López Ortega, MD.
Alergólogo Inmunólogo.
Universidad de Sao Paulo, Brasil
Correo electrónico:

Prueba de v.d.r.l. (sifilis)


Páginas: 5 (1105 palabras) Publicado: 12 de noviembre de
2010
PRÁCTICA Nº 6.- PRUEBA DE V.D.R.L. (SIFILIS)

Objetivo.
Determinar la presencia o ausencia cualitativa y semicualitativa
de regiones plasmáticas en suero humano mediante un
antígeno no treponemico para el diagnostico de la enfermedad
de sífilis causada por Treponema pallidum, determinando de
esta manera si el individuo es apto para donar sangre o no.
Fundamento.
RPR carbón es una técnica notreponemica de aglutinación en
porta para la detección cualitativa y semicualitativa de regiones
plasmáticas en suero humano.
Las partículas de carbón sensibilizadas con una muestra de
lípidos, son aglutinados en presencia de reaginas en muestra
de pacientes con sífilis.
Introducción.
La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual infecciosa
crónica producida por la bacteria espiroquetaTreponema
pallidum, subespecie pallidum.
Este microorganismo es una bacteria móvil espiroforme (con
forma de hilo en espiral), perteneciente al orden
Spirochaetales, familia Spirochaetaceae. Su diámetro es de 0,1
a 0,2 micrómetros y su longitud entre 5 y 15 micrómetros.
Puestas una detrás de otra, entre 70 y 200 espiroquetas
medirían alrededor de un milímetro.
Esta bacteria se multiplica pordivisión simple con división
transversal. Al contrario de otras bacterias de su familia, sólo se
puede cultivar in vitro durante un breve período, con un máximo
de supervivencia de 7 días a 35 °C, en medio particularmente
enriquecido y en presencia de CO2 por sus particulares
exigencias nutritivas y metabólicas. En nitrógeno líquido se
mantiene su vitalidad, y prolifera de manera excelente
entestículos de conejo. En sangre conservada en hemoteca
para transfusiones la bacteria sobrevive entre 24 y 48 horas.
VDRL
VDRL (por su siglas en inglés, Venereal Disease Research
Laboratory) es una prueba serológica realizada en medicina
con sensibilidad y especificidad para complementar el
diagnóstico de sífilis. Debido a que la prueba del VDRL emplea
marcadores indirectos de infección, se le conoce comouna
prueba para sífilis no-treponemica.
Este examen mide sustancias, llamadas anticuerpos, que se
pueden producir en repuesta al Treponema pallidum, la
bacteria que causa la sífilis.
El examen es similar al examen de reagina plasmática rápida
(RPR) más nuevo. Este examen se utiliza para diagnosticar
sífilis, que es una infección altamente tratable. Además de
examinar individuos con signos ysíntomas de enfermedades de
transmisión sexual, las pruebas de detección para sífilis son
una parte rutinaria del cuidado prenatal durante el embarazo.
Varios estados también exigen estas pruebas de detección
para sífilis antes de obtener una autorización de matrimonio.
En la etapa más temprana (sífilis primaria), el examen es
positivo en aproximadamente el 60% de las ocasiones. Su
utilidadaumenta en etapas posteriores como sífilis secundaria y
sífilis latente donde puede ser positivo en el 70 a 90% de las
ocasiones; en las etapas finales (sífilis terciaria) el examen es
positivo en sólo el 60% de los casos.

No siempre que el examen sale positivo quiere decir que se


tiene una sífilis. Hay varias enfermedades o condiciones en las
que es positivo y no significa que se tiene una sífilis.De marera
que si resulta positivo, se debe confirmar con un examen más
específico para sífilis como FTA-ABS (es otro análisis de
sangre).
Materiales.
MATERIAL EQUIPO REACTIVOS MUESTRA BIOLOGICA
 Bata
 Guantes
 Cubrebocas
 Portaobjetos o placa
 Pipeta pasteur con bulbo
 Aplicadores de madera  Rotor  RPR Carbón
 Control (+)
 Control (-)
 Solución salina  Suero sanguíneofresco
Procedimiento.
DESARROLLO
Método cualitativo:
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura
ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas
bajas.
2. Depositar 50µL de la muestra a ensayar y una gota de cada
uno de los controles positivo y negativo, sobre círculos de un
distinto porta.
3. Homogeneizar suavemente el reactivo de RPR- carbón antes
de usar....
Leer docum
https://es.scribd.com/presentation/353911581/ppt-PRUEBAS-INMUNOLOGICAS-EN-
EL-DIAGNOSTICO-DE-SIFILIS-pptx
http://www.centis.cu/documentos/especificacion/car236.pdf