Guia de Practicas Toxicologia Farmaceutica

CÓDIGO: IRDER –LAB-05
GUIA DE PRACTICAS Versión: 02

DE TOXICOLOGÍA Fecha de vigencia: 03/2018
UCE- FAC.CCQQ FARMACÉUTICA
LABORATORIO Página 1 de 47
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 2
2. Unidad curricular 2
3. Tema: Relación dosis-efecto/respuesta (Igual tóxico diferente dosis)
4. Objetivo
 Observar la variedad de efectos/respuestas que produce una misma sustancia
administrada por la misma vía pero en diferente dosis
5. Fundamento y método de la práctica

Se fundamenta en la respuesta gradual de un individuo en función de la variación de la dosis,
evidenciándose un incremento del efecto al aumentar la dosis, hasta llegar a una dosis Dm en
que se alcanza un efecto máximo. Para calcular la relación dosis efecto es conveniente realizar
la administración en varios individuos y como no todos los individuos experimental idéntico
efecto se denomina respuesta a la relación porcentual de esa población que manifiesta el efecto
requerido.
Efecto: manifestación de la acción de un xenobiótico que modifica un mecanismo biológico o

función fisiológica que va ligado a dos variables: dosis y tiempo
Respuesta: Puede utilizarse como sinónimo de efecto, pero se refiere a la relación porcentual
de la población en que se manifiesta un efecto
Dosis: Cantidad de materia administrada a un individuo en relación a su peso y volumen corporal
ordinariamente en 24 horas.
Latencia: Tiempo transcurrido durante desde la administración hasta la aparición del efecto
Duración del efecto: Tiempo transcurrido desde la aplicación del efecto hasta que desaparece
el efecto.
6 Parte experimental
6.1 Instrucciones previas

1. Se usarán en todo momento el mandil para el trabajo en el laboratorio y este debe estar
bien abrochado
2. Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que puedan
entrañar contacto directo o accidental con sangre, líquidos corporales y otros materiales
potencialmente infecciosos o animales infectados.
3. No tocar con las manos ni probar los reactivos químicos.
4. El empleo de animales de laboratorio con fines experimentales y de diagnóstico impone
al usuario la obligación moral de adoptar todas las medidas necesarias para evitar que
aquéllos padezcan dolores o sufrimientos innecesarios.
6.2 Equipos, materiales y reactivos

DE TOXICOLOIA
Reactivos Materiales/Equipos
Biológicos: Ratones blancos (4 por grupo) Jaulas
Químicos: Cafeína conc. 8mg/ml Balanza
Alcohol antiséptico Jeringuilla de insulina
6.3 Procedimiento
1. Pesar cada uno de los ratones y numerar del 1 al 4

2. Administrar a cada uno de los ratones una dosis de cafeína como sigue
a) Ratón 1: 50 mg/Kg (dosis nula)
b) Ratón 2: 80 mg/kg (dosis terapéutica)
c) Ratón 3: 100 mg/kg (dosis toxica)
d) Ratón 4: 130 mg/Kg (dosis letal)
3. Calcular el volumen exacto de solución de cafeína 8 mg/Kg de acuerdo al peso de cada

ratón
4. Utilizar como vía de administración la interperitoneal
5. Observar los efectos biomarcadores
RATON NO DOSIS EFECTO

1 Nula Ningún efecto aparente
2 Terapéutica Estimulación del SNC, incremento de
frecuencia cardiaca y respiratoria
3 Toxica Ansiedad, taquicardia, agitación, movimiento
involuntarios y convulsiones
4 Letal Muerte
6. Medir los tiempos de latencia y de duración del efecto

7. Obtener porcentajes con cada respuesta con datos acumulados de todos los grupos y
hacer una representación gráfica.
7. Resultados
 Cálculos:
Peso del ratón
Volumen de producto
Porcentaje del efecto máximo: E/ Efecto máximo (Em) x 1000
 Hacer una representación gráfica de la relación dosis efecto –efecto determinados con
los datos acumulados (Em vs Dm)
DE TOXICOLOIA
8. Discusiones
Se puede utilizar referencias para discutir los resultados, compararlos con estudios previos y
proponer explicaciones.
Evitar especulaciones.
9. Conclusiones
No se deben repetir puntos de la discusión o incluir material irrelevante.
Las conclusiones deben basarse en los objetivos planteados en las pruebas presentadas.
10. Cuestionario: NA
11. Bibliografía
REPETO, M, Toxicología Fundamental, 3° edición Ediciones Díaz de Santos S.A, Madrid. 2009
OMS. Manual de bioseguridad. 3° edición. Ginebra. 2015
Chemblog, curiosidades de la química, 2005
http://chemblog.zoomblog.com/archivo/2005/12/31/cafeina.html
12. Anexos: NA
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 3
3. Tema: Determinación del potencial toxico (diferente toxico-igual dosis)
4. Objetivo
 Experimentar con diferentes sustancias estimulantes, administradas en una

población en estudio, por la misma vía en una misma dosis manifiesta una
variedad de respuesta de acuerdo a su potencia
Se fundamenta en la experimentación con sustancias clasificadas dentro de una misma acción
(estimulante del SNC), tiene un rango de dosis muy amplio, es decir, que mientras que con un
dosis determina una sustancia añadida a un producto de consumo, produce el efecto deseado
(no toxico), otras sustancias del mismo grupo pueden producir efectos diferentes, inclusive la
muerte.
Los estimulantes del SNC, producen un estado de alerta, resistencia al sueño, resistencia al
cansancio, actúan sobre el centro del hambre y reducen las sensopercepciones olfativas, por lo
que son utilizadas como anorexientes o reguladores del apetito. El efecto guarda relación con la
dosis y el tipo de estimulante (cafeína, anfetaminas, efedrina)

bien abrochado sensopercepciones olfativas
Químicos: Cafeína 3mg/ml, cocaína 3mg/ml, Balanza
anfetamina 3mg/ml
Alcohol antiséptico Jeringuilla de insulina
DE TOXICOLOIA
Guantes quirúrgicos
6.3 Procedimiento
8. Cada uno de los tres ratones debe recibir una dosis de 10mg/Kg de cada uno de los
diferentes estimulantes así:
A. Ratón 1: 10 mg/Kg Cafeína
B. Ratón 2: 10 mg/kg Cocaína
C. Ratón 3: 10 mg/kg Anfetamina
Antes de la administración, calcular el volumen exacto de cada uno de los principios activos de
acuerdo al peso de cada ratón.
2. Utilizar como vía de administración la interperitoneal
3. Observar los efectos
RATON NO DOSIS EFECTO

1 10 mg/Kg Cafeína Ningún efecto aparente
2 10 mg/kg Cocaína Taquicardia, inquietud, confusión, euforia
3 10 mg/kg Anfetamina Confusión mental, desorientación, agitación,
estatus epiléptico, palpitaciones
Contracción de la mandíbula
4. Tomar en cuenta los tiempos de:

 Latencia
 Duración del efecto
5. Obtener porcentajes de cada respuesta con los datos acumulados de todos los grupos del
curso
7. Resultados
 Cálculos:
Peso del ratón
Volumen de producto
Porcentaje del efecto máximo: E/ Efecto máximo (Em) x 1000
 Modelo experimental
 Respuestas producidas y tiempos
DE TOXICOLOIA
 Hacer una representación gráfica de la relación de la dosis- respuesta con los datos
acumulados (respuesta vs log dosis) y determinar la mayor pendiente para deducir la
sustancia con mayor potencial toxico
8. Discusiones
9. Conclusiones
10. Cuestionario
 ¿Cuál de las tres sustancias utilizadas de la considera de mayor cuidado y

porque?
 ¿Calcular la DL50 de cada una de las sustancias utilizadas en el experimento?
11. Bibliografía
 REPETO, M, Toxicología Fundamental, 3° edición Ediciones Díaz de Santos S.A, Madrid.
2009
 OMS. Manual de bioseguridad. 3° edición. Ginebra. 2015
 Gisbert Juan, Villanueva Enrique. Medicina legal y toxicología, Manson SA. España. 2005
https://books.google.com.ec/books/about/Medicina_legal_y_toxicolog%C3%ADa.html
?id=MfL2NT12iAQC&redir_esc=y
12. Anexos: NA
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 5
3. Tema: TOXICIDAD SUBAGUDA EN 14 DIAS
4. Objetivo
 Inducir in vivo la generación de efectos colaterales producidos por ácido
acetilsalicílico (ASA), por administración oral.

La administración repetida de medicamentos puede dar origen a procesos fisiológicos
de origen tóxico, entre los que se describen como los productos sobre el aparato
digestivo con irritación o causticación. Efecto hematológico, alteración de la
funcionalidad. Efectos sobre el SNC, alteraciones del equilibrio ácido base. La dosis
mínima administrador debe ser la terapéutica o la que produzca concentraciones
sanguíneas semejantes a las que origina ésta en humanos.
La toxicidad por dosis repetida o subcrónica se presenta luego de la administración de
un período de tiempo inferior al 10% de vida media del animal empleado (generalmente
se realizan ente 14 a 28 en ratones o 90 días en ratas)
El ácido acetilsalicílico (ASA), químicamente es un éster del ácido salicílico (AS) este
último tan irritante que solo se utiliza en forma externa local por su acción queratolítica
para el tratamiento de verrugas, callosidades, infecciones micóticas, entre otras.
El ASA es el medicamento analgésico, inflamatorio y terapéutico más prescrito y
también involucrado en automedicación constituyendo causa común de intoxicaciones
en niños y adultos.
Entre los efectos indeseables se destacan procesos fisiopatológicos de origen tóxico
como: gastrointestinales, neurológicos, electrolíticos y del equilibrio ácido base
cutáneos, hematológicos inmunológicos hepáticos, renales.
ASA: Ácido acetilsalicílico, fármaco con carácter ácido.
Causticación: alteración Irreversible de los componentes celulares que consiste la
desnaturalización de los lípidos y proteínas celulares.
Equilibrio Ácido-Base: estado de concentración de hidrogeniones de forma equilibrada
de manera que el pH se mantiene casi constante gracias a la existencia de Mecanismos
tampones y acciones reguladoras del aparato respiratorio y riñón.
Apostosis: es una destrucción o muerte celular programada provocada por ella misma,
con el fin de auto controlar su desarrollo y crecimiento, esta desencadenada por señales
celulares controladas genéticamente.
DE TOXICOLOIA

Parámetros a observar: Biomarcadores.
 posibles cambios externos durante los 14 días de exposición.

 Variación de peso
 Signos de necropsia.
 Alteraciones hematológicas: formula leucocitaria, tiempo de sangría.
 Alteraciones gástricas: intensidad de irritación o hemorragias en la vía
gastrointestinal úlceras gástricas, gastritis erosiva.
 Observar diferencias entre el trastorno producido por el ASA Y ASA
efervescente.
Biológicos: Biológicos: (ratones blancos 2 Jaulas
por grupo)
Químicos: Solución de ASA 2,5 mg/ml Balanza
Alimento Cánula
Bebedores
Equipos de disección
Microscopio
Equipos de seguridad personal
6.3 Procedimiento
1. Pesar cada uno de los ratones y numerar.

2. Antes de la Administración calcular el volumen exacto de la solución de ASA de
acuerdo con el peso de cada rato.
3. Cada grupo debe trabajar con los dos ratones blancos.
4. Utilizar la vía de administración oral mediante la cánula.
5. La dosis a ser administrada es de 25 mg/kg ( ratón 1 ASA normal, ratón 2 ASA
efervescente)
6. Realizar una toma de muestra de sangre de la cola del Ratón, para el frotis
hematológico inicial colocando una gota en la placa portaobjetos y hacer un
estiramiento de la gota, para fórmula leucocitaria y formas de eritrocitos y
leucocitos.
7. Medir el tiempo de sangría, realizando limpieza de la zona de punción con el
algodón con el alcohol, medir el tiempo desde la punción hasta que deje de
sangrar.
8. Administrar la dosis diaria vía oral durante 14 días. observar diariamente las
condiciones de salud de los animales.
9. Observar diariamente las condiciones de salud de los animales
DE TOXICOLOIA
10. Realizar control de peso y de condiciones generales a los 7 días.

11. Cumplido el tiempo de tratamiento 14 días se procederá a examinar los
animales.
12. Pesar a los ratones que permitan evidenciar pérdida o ganancia de peso.
13. Extraer muestra de sangre para realizar un frotis hematológico final para la
fórmula leucocitaria y formas de eritrocitos y leucocitos, para comparar el frotis
inicial y comparar posibles efectos hematológicos.
14. Medir el tiempo de sangría y comparar con el inicial.
15. colorear las placas con colorante wrigth.
16. Realizar la necropsia a los animales realizando un examen externo e interno (tres
cavidades: abdominal, torácica y craneal) a fin de evidenciar las alteraciones
fisiopatológicas macroscópicas, externas o internas.
17. examinar el órgano blanco: cortar la zona de tejido de estómago posiblemente
afectado, estirar lo más posible sobre un cubreobjetos y observar al microscopio
la ulceración irritación gástrica.
18. Registrar los datos en la tarjeta de necropsia.
7. Resultados
 Cálculos:
Peso del ratón
Volumen de producto
 hacer una representación gráfica de la relación de la dosis respuesta con los
datos acumulados en los grupos (respuesta vs log dosis)
8. Discusiones
9. Conclusiones
10. Cuestionario: NA
11. Bibliografía
REPETO, M, Toxicología Fundamental, 3° edición Ediciones Díaz de Santos S.A, Madrid. 2009
OMS. Manual de bioseguridad. 3° edición. Ginebra. 2015
Chemblog, curiosidades de la química, 2005
http://chemblog.zoomblog.com/archivo/2005/12/31/cafeina.html
12. Anexos: NA
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 6
3. Tema: Bloqueo en el suministro y transporte de O2 (mecanismo de acción)
4. Objetivo
 Experimentar con diferentes sustancias estimulantes, administradas en una

población en estudio, por la misma vía en una misma dosis manifiesta una
variedad de respuesta de acuerdo a su potencia
Se fundamenta en el estudio de los diferentes mecanismos mediadores de las
reacciones bioquímicas y fisiológicas que conducen a los efectos tóxicos en órganos
blanco (toxico dinámica). En el proceso respiratorio son dos los mecanismos afectados
Bloqueo en el suministro de oxígeno: Existen compuestos que bloquean los mecanismos
en los cuales es indispensable la presencia de oxígeno, pues tiene la capacidad de unirse
al Fe3+ de la citocromo oxidasa formando un compuesto estable con lo que se bloquea
la cadena respiratoria intra mitocondrial impidiendo el suministro de oxígeno
produciendo la asfixia celular Ej. Cianuros
Bloqueo en el transporte de oxigeno: El CO, al ingresar por vía respiratoria se absorbe
muy rápidamente pasando al torrente sanguíneo en donde se combina con la
hemoglobina, al unirse con el Fe 2+ del HEM, para formar la coboxihemoglobina complejo tóxico
estable que impide el transporte de O2
Mecanismo de acción: es la forma como el toxico actúa sobre el organismo vivo

produciendo una lesión bioquímica inicial responsable de las perturbaciones fisiológicas
y/o anatomopatológicas.
Respiración celular: llamada también respiración interna es el conjunto de reacciones
internas por la cuales determinados compuestos orgánicos son degradados con
producción de energía.
Hemoglobina: pigmento rojo contenido en los hematíes de la sangre de los vertebrados
cuya función consiste en captar el oxígeno de los alveolos pulmonares y comunicarlo a
los tejidos y en tomar el dióxido de carbono de estos y transportarlo de nuevo a los
pulmones para expulsarlo.
DE TOXICOLOIA

bien abrochado.
Químicos: Balanza
Cianuro de sodio 0.5 mg/ml Jeringuilla de insulina
Formiato de sodio solido Guantes quirúrgicos
Ácido sulfúrico concentrado
Alcohol antiséptico
6.3 Procedimiento
Pesar a cada ratón y numerar
Administrar a cada ratón un toxico diferente
 Ratón 1: administrar CO
 Ratón 2: administrar CN
 Administración de CO por vía respiratoria:
1. Realizar la generación de CO: en un Erlenmeyer colocar 0.5 g de formiato de sodio,

añadir un goteo de 2 ml de ácido sulfúrico concentrado con lo que se produce la
generación de CO que es conducido hacia la cámara a través de una tubuladora
2. Colocar el ratón bajo la cámara a donde se conecta el tubo de desprendimiento del
generador de CO.
3. Observar los cambios fisiológicos que sufre el ratón como: cambio en la frecuencia
respiratoria, coloración rosado-roja carminado de la piel de las extremidades orejas y
cola.
DE TOXICOLOIA
4. Determinar el tiempo de latencia, desde el inicio de la exposición hasta que el ratón

que en inconsciencia
5. Cuando el ratón entra en un estado de inconsciencia sacar al Raton de la cámara de
CO, y reanimar al ratón mediante aireación
6. Observar y determinar el tiempo de recuperación
 Administración de cianuro de sodio por vía IP:
1. Pesar al ratón
2. Calcular el volumen de administración que corresponde a la dosis de 3 mg/kg de peso
de cianuro de sodio
3. Administrar por vía IP la cantidad calculada.
4. Observar los efectos: convulsiones, tiempo de latencia hasta su muerte.
8. Discusiones
9. Conclusiones
10. Cuestionario
11. Bibliografía:
 REPETO, M, Toxicología Fundamental, 3° edición Ediciones Díaz de Santos S.A, Madrid.
2009
 OMS. Manual de bioseguridad. 3° edición. Ginebra. 2015
12. Anexos
N.A
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 7
3. Tema: Manejo de MICROMEDEX
4. Objetivo
 Conocer el manejo del programa micromedex y la aplicación de este en

instituciones de soporte toxicológicas a nivel del país.
Micromedex se trata de un conjunto de bases de datos de información médica,
farmacológica y toxicológica que conforman una suite de gestión del conocimiento. Lo
componen más de 30 bases de datos. Es capaz de proporcionar información sobre
cualquier fármaco a nivel mundial a través del aspecto del fármaco, o nombre comercial
del medicamento del país de origen con su correspondencia en el mercado nacional.
Evalúa posibles contraindicaciones, reacciones adversas e incompatibilidades de forma
inmediata y visual entre diferentes medicamentos y/o patologías. Informa sobre la
posible intoxicación tanto farmacológica como de sustancias que puedan ser ingeridas,
así como su tratamiento.
Contiene bases de información toxicológica y farmacológica como:
1. DRUGDEX® System
2. DRUG INTERACTIONS
3. IV COMPATIBILITY
4. MARTINDALE
5. DRUG IDENTIFICATION
 Interfaz y uso de las herramientas
DE TOXICOLOIA
Caja de Búsqueda sencilla (flecha 4)
Simplemente escribimos cualquier término, frase o pregunta en el cuadro de búsqueda

que está disponible en todas las páginas para llegar a la información que desea.
Micromedex está diseñado para buscar y entregar resultados en una interfaz limpia y
despejada. La búsqueda por defecto se realiza contra la base de datos Drugdex. Permite
buscar por la marca comercial o el principio activo: Rasilez/ Aliskiren
Pantalla de Resultados
La pantalla de resultados muestra junto al nombre del medicamento (1) los grupos de
medicamentos en los cuales se clasifica y las vías de administración. Bajo esta presentación
podemos escoger entre las pestañas de “Respuestas rápidas” o “Respuestas detalladas” según
la profundidad precisada. Tanto en un caso como en el otro, el cuerpo central proporciona la
información del fármaco basada en evidencias. Los números entre corchetes enlazan con las
referencias bibliográficas; pinchando en ellos se abrirá una ventana emergente para consultar
el resumen o el texto completo a través de Pubmed
DE TOXICOLOIA
Desplegando los diferentes

apartados de la información
resumida en el menú de la
izquierda, accedemos a la
información sobre dosis
(adultos, pediátricas, ajustes de
dosis en casos concretos, etc.),
sobre las contraindicaciones,
alertas, precauciones
(específicamente en el
embarazo y en la lactancia),
sobre las interacciones con otros
fármacos o con comidas,
indicando el nivel de gravedad y
el nivel de documentación e evidencias que existen en cada caso. Descendiendo por ese menú
aparece “Patient education”, un recurso clave para la educación del paciente, ya que el
profesional puede suministrarle esta información resumida al paciente, sobre consejos para
tomar la medicación o posibles efectos secundarios, etc. Desde el menú de la derecha (2)
podremos acceder a la base de datos Martindale. Pinchando en ese enlace (Martindale) se abre
una ventana emergente en la que podremos escoger entre la información relativa a ese
medicamento o del grupo de medicamentos en el que se encuadra. La primera información que
ofrece no está recogida en Drugdex; son unos datos más administrativos, obtenidos de CAS
Registry, pero muy útiles, que muestra los nombres de fármacos comerciales y laboratorios que
los comercializan de todos los países – Opción “PROPIETARY NAMES” del menú de la derecha
de la página resultante. En el cuerpo central nos aparecen las opciones de mostrar el documento
DE TOXICOLOIA
completo e imprimir (enlaces arriba a la derecha). La opción Imprimir, nos permite seleccionar
todo o alguna sección concreta del documento.
Herramientas del menú horizontal (flecha 5)
En la barra horizontal superior, las distintas pestañas nos ofrecen interesantes herramientas:
Interacciones de fármacos o Drug Interactions Nos permite comprobar las interacciones de los
elementos de los medicamentos, medicamentoalimento, mediamento-etanol, medicamento-
tabaco, medicamento-prueba de laboratorio, medicamento-embarazo, medicamento-lactancia,
duplicación de principio activo y alergia. La información sobre interacciones puede ser calculada
para un medicamento único o entre múltiples fármacos.
Comparación de fármacos En esta pestaña podremos introducir hasta 20 medicamentos o

principios activos para compararlos de dos en dos punto por punto: dosis recomendadas,
efectos adversos o las advertencias de caja negra.
6. Bibliografía
 Andalucía, J. d. (15 de 05 de 2016). Biblioteca virtual del Sistema Sanitario Publico de
Andalucia. Obtenido de https://www.bvsspa.es/profesionales/bbdd-y-otros-
recursos/recursos/micromedex
 Couto, U. G. (21 de 11 de 2016). Guía de uso de Micromedex. Obtenido de

https://bibliosaude.sergas.gal/DXerais/435/guia%20micromedex.pdf
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 8
3. Tema: CONCENTRACION LETAL 50 (CL50)
4. Objetivo
 Determinar la concentración o dosis en que una sustancia química o fármaco

tiene la causar la muerte en el 50% de los individuos tratados (artemias salinas-
Artemia spp.) con un toxico a una concentración determinada (CL50)
Para medir la toxicidad de una planta, extracto, sustancia química o fármaco, se recurre
con frecuencia la prueba de (CL50) en Artemia salina, que no es sino un pequeño
camarón del mar (crustáceo originario de la Bahía de San Francisco, cuyos nauplios
larvas , son sensibles a una gran variedad de sustancias, es un organismo completo en
cuanto a sistemas enzimáticos se refiere, se emplea para evaluar la toxicidad de un
vegetal, también como método de comprobación de la actividad de plaguicidas,
micotoxinas, toxinas de dinoflagelados y sustancias de acción farmacológica. Los huevos
de la Artemia salina se venden como alimento para peces.
La actividad observada en el test con artemia salina, se expresa como toxicidad a los
camarones CL50, es decir la dosis que mata al 50% de los camarones, es un ensayo de
toxicidad general. Se considera como citotoxico cuando la CL 50 es igual a 1000-2000
ppm en extractos crudos y es menor a 200 ppm en sustancias puras.
Artemia salina: Artemia spp. son camarones minúsculos de cuerpo blando, de color
carmelina y transparentes a la luz; pertenecen al Phylum Arthopoda, clase Crustaceae,
subclase Branchiopoda. Se conocen generalmente por el nombre de artemia, también
llamados “monos de mar” o “brine shrimp” en inglés.
CL50: Es la concentracon de una sustancia en el medio que se puede pronosticar causara
la muerte del 50% de una población determinada de individuos bajo condiciones
experimentales
DL50: Es la dosis única derivada estadísticamente de una sustancia química, que se

puede pronosticar causara la muerte de un 50% de una población de individuos que la
reciben bajo condiciones experimentales

DE TOXICOLOIA
13. Se usarán en todo momento el mandil para el trabajo en el laboratorio y este

debe estar bien abrochado.
14. Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que
puedan entrañar contacto directo o accidental con sangre, líquidos corporales y
otros materiales potencialmente infecciosos o animales infectados.
16. El empleo de animales de laboratorio con fines experimentales y de diagnóstico
impone al usuario la obligación moral de adoptar todas las medidas necesarias
para evitar que aquéllos padezcan dolores o sufrimientos innecesarios.
Biológicos: Huevecillos de artemia salina Cubeta
Químicos: Oxigeno
 Agua de mar natural Lámpara de 100 watts
Si no dispone de agua de mar natural Balanza
preparar agua de mar natural artificial ( se Tubera
pesa 40 g de sal de mar, 0.006 g de Tubos de ensayo de 15 ml
levadura de cerveza, aforar a un litro de Lupa
agua destilada, y ajustar el pH a 7,8 Pipetas Pasteur
Balones aforados
 Glifosfato 480 g/l: 1 ml de
Caja petri
producto en 100 ml ( 4,8mg/l)
Diluciones: 1:5 (960 mg/ml), 1:40 (120
mg/l), 1:200 (24 mg/l) 1: 1000 (4,8 mg/l)
6.3 Procedimiento
Incubación de A. salina
7. Incubar 0,1 g de huevecillos de A. Salina n agua de mar previamente oxigenada
colocar en un recipiente de plástico hasta las 2/3 partes dividida por una pared
intermedia con un espacio en la pared baja de 2 mm;
8. Mantener en condiciones de oscuridad y oxigenación
9. Uno de los compartimientos se mantiene iluminado a temperatura de 100
watts
10. Dejar de 24 a 48 horas de incubación bajo iluminación a temperatura de 22 a
29 0C, los nauplios al eclosionar son atraídos a la luz.
DE TOXICOLOIA
11. Pasar los nauplios eclosionados a otro recipiente con la ayuda de una
micropipeta y mantener en condiciones oxigenadas y temperatura de 22-29 0C,
además preparar un blanco con 5 ml de agua de mar
12. Colocar 10 nauplios en cada tubo y completar con 6ml de agua de mar. Total 30
nauplios por cada dilución, el volumen de agua de mar que se toma con las
larvas no debe exceder 0,05ml
13. Dejar en incubación durante de 24 a 48 horas a 25 0C en la oscuridad
14. Con la ayuda de una lupa contar los muertos y los vivos por observación del
movimiento de los apéndices durante 10 seg.
15. Realizar los cálculos dela CL50, haciendo las correcciones respectivas con la
fórmula de Abbot considerando muerto en el ensayo y muertos en el blanco
16. Determinar la DL50 del Glifosato, mediante interferencia matemática por el
método Probbit
8. Discusiones
Se puede utilizar referencias para discutir los resultados, compararlos con estudios
previos y proponer explicaciones.
9. Conclusiones
Las conclusiones deben basarse en los objetivos planteados en las pruebas
presentadas.
10. Cuestionario
Metodo probbit para el cálculo de la CL50 por inferencia a partir de la CL50
11. Bibliografía:
 Pino Pérez O, Jorge L, 2010, Rev. Protección Veg. Vol. 22 No. 1 (2010): 34-43
 Rodríguez Garza R, 2010, Tamizaje Fitoquímico y Actividad Biológica, Universidad
Autónoma de Nuevo León
 Vinardell MP,2014, Alternativas a los animales de laboratorio en la docencia,
Dep. Fisiologia, Facultad de Farmacia, Universidad de Barcelona, Rev. Toxicología
AETOX, Vol 31 N° 2 España.
12. Anexos
 Calculo mediante la fórmula de Abbot

DE TOXICOLOIA
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 9
3. Tema: PRUEBAS DE IDENTIFICACION PREELIMINAR DE DROGAS DE ABUSO
4. Objetivo
 Reconocer química y físicamente las diferentes drogas que causan

farmacodependencia mediante pruebas preliminares o de campo que orientan
el analisis de laboratorio en la aplicación de técnicas confirmativas
Se fundamenta en la extracción del alcohol de la muestra de sangre mediante
microdifusión para luego ser cuantificado por una reacción de óxido-reducción con
dicromato potasio, el cual al reducirse el cromo cambia de color, del color amarillo
original a verde, la intensidad de color es directamente proporcional a la concentración
de alcohol presente en la muestra y que puede ser cuantificado
espectrofotométricamente frente a estándares de concentración conocida.
Microdifusión: Método de separación de tóxicos gaseosos y volátiles a partir de
pequeñas cantidades de muestra biológica.
Cámara de CONWAY: dispositivo para realizar procedimientos de separación por
Microdifusión.

19. No tocar con las manos sin guantes, ni probar los reactivos químicos.
20. La muestra de sangre con anticoagulante EDTA, deber ser tomada sin utilizar
alcohol en la asepsia de la zona de punción
21. Realizar la disposición final de desechos biológicos conforme al Procedimiento
de clasificación y eliminación de desechos (PCED-LAB-01)

DE TOXICOLOIA
Químicos:
Carbonato de potasio 20%  Tubos de ensayo de 15 ml
Agua destilada  Tubos tapa rosca de 15 ml
 Cámara CONWAY
Estándar de Alcohol metílico de 0,2 g/l  Pipetas volumétricas de 1ml
 Probeta de 10ml
Ácido sulfúrico 10%  Espectrofotómetro VIS
Ácido sulfúrico conc.
Ácido Cromotropico 0,5%
Sulfito de sodio (Solución saturada)
Dicromato de potasio-ácido: (3.7 g de
dicromato de potasio en 150 ml de agua
dest., añadir lentamente 280 ml de ác.
sulfúrico conc., enfriar, añadir agua dest.
hasta completar un volumen total de 650
ml).
Permanganato de potasio-ácido (3 g de
KMnO4, 15 cm3 de ác. Fosfórico y diluir a
100 cm3 con agua dest.
6.3 Procedimiento
 Extracción por microdifusión
Metanol
Preparar la cámara de CONWAY, en el compartimiento central, colocar 2.2 cm3 de ác.
sulfúrico al 10 %, en el compartimiento externo colocar 1 cm3 de solución de carbonato
de potasio 20 % y 1 cm3 de muestra (sangre), cerrar la cámara inmediatamente,
homogeneizar por rotación y dejar en reposo por dos horas a temperatura ambiente o
por 20 min. a 37 °C.
Etanol
Preparar la cámara de CONWAY: colocar 2 ml de solución de dicromato de potasio ácido
en el compartimiento central. En el compartimiento externo colocar por goteo l ml de
carbonato de potasio 20 % y 1 ml de muestra (sangre), cerrar la cámara inmediatamente
y dejar en reposo por 2 horas a temperatura ambiente o por 20 min. a 40 ° C luego
observar el cambio de color en el compartimiento central.
DE TOXICOLOIA
* Preparar un estándar de 2.0 g/litro y un blanco de reactivos

 Prueba cuantitativa:
Metanol
Oxidación : A 1,0 cm3 del compartimento central, oxidar con 1- 2 gotas de solución de
permanganato de potasio, agitar, dejar en reposo por dos min y decolorar el exceso de
permanganato añadiendo gota a gota solución de sulfito de sodio.
Desarrollo de color: a la solución oxidada añadir 0.2 cm3 de ác. cromotrópico, agitar,
añadir por las paredes del tubo 2 cm3 de ác. sulfúrico conc. en caso positivo aparecerá
un anillo de color violeta en la interfase.
En caso positivo, añadir a la reacción anterior 2 cm3 más de ác. sulfúrico conc. y mezclar,
dejar en reposo por 20 min. y leer la D.O. a 570 nm. Preparar un estándar y un blanco
en igual procedimiento que la muestra.
Etanol
Tomar el contenido del compartimiento central y colocar en una probeta de 10 ml. lavar
varias veces el compartimiento central con agua destilada y colocar todo en la probeta,
hasta aforar a 10 ml. Leer la D.O. a 630 nm en un espectrofotómetro, encerando con el
blanco de reactivos.
8. Discusiones
9. Conclusiones
presentadas.
10. Cuestionario
Consultar que es metanol, etanol, bebida alcoholica
11. Bibliografía:
Sunshine, I, 1987, Methodology for Analitical Toxicology, 5ta. Impresión, Vol. I, Editorial
CRCPress, USA, Florida
Vallejo, M, Toxicología Analítica, Universidad Nacional de Bogotá

DE TOXICOLOIA
Ferrari, Luis, 2005, Maual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología, La

Plata – Argentina, Editores Leda Giannuzzi
12. Anexos
 Fórmula para el cálculo de la concentración de metanol y etanol en la muestra

de sangre
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 10
3. Tema: DETERMINACION DE METANOL Y ETANOL EN SANGRE
4. Objetivo
 Determinar cuantitativamente la presencia de alcohol etílico y metílico en

sangre para evaluar el efecto toxico producido por estas sustancias.
Se fundamenta en la extracción del alcohol de la muestra de sangre mediante
microdifusión para luego ser cuantificado por una reacción de óxido-reducción con
dicromato potasio, el cual al reducirse el cromo cambia de color, del color amarillo
original a verde, la intensidad de color es directamente proporcional a la concentración
de alcohol presente en la muestra y que puede ser cuantificado
espectrofotométricamente frente a estándares de concentración conocida.
Microdifusión: Método de separación de tóxicos gaseosos y volátiles a partir de
pequeñas cantidades de muestra biológica.
Cámara de CONWAY: dispositivo para realizar procedimientos de separación por
Microdifusión.

25. La muestra de sangre con anticoagulante EDTA, deber ser tomada sin utilizar
alcohol en la asepsia de la zona de punción
DE TOXICOLOIA
Químicos:
Carbonato de potasio 20%  Tubos de ensayo de 15 ml
Agua destilada  Tubos tapa rosca de 15 ml
 Cámara CONWAY
Estándar de Alcohol metílico de 0,2 g/l  Pipetas volumétricas de 1ml
 Probeta de 10ml
Ácido sulfúrico 10%  Espectrofotómetro VIS
Ácido sulfúrico conc.
Ácido Cromotropico 0,5%
Dicromato de potasio-ácido: (3.7 g de
dicromato de potasio en 150 ml de agua
dest., añadir lentamente 280 ml de ác.
sulfúrico conc., enfriar, añadir agua dest.
hasta completar un volumen total de 650
ml).
6.3 Procedimiento
 Extracción por microdifusión
Metanol
Preparar la cámara de CONWAY, en el compartimiento central, colocar 2.2 cm3 de ác.
sulfúrico al 10 %, en el compartimiento externo colocar 1 cm3 de solución de carbonato
de potasio 20 % y 1 cm3 de muestra (sangre), cerrar la cámara inmediatamente,
homogeneizar por rotación y dejar en reposo por dos horas a temperatura ambiente o
por 20 min. a 37 °C.
Etanol
Preparar la cámara de CONWAY: colocar 2 ml de solución de dicromato de potasio ácido
en el compartimiento central. En el compartimiento externo colocar por goteo l ml de
carbonato de potasio 20 % y 1 ml de muestra (sangre), cerrar la cámara inmediatamente
y dejar en reposo por 2 horas a temperatura ambiente o por 20 min. a 40 ° C luego
observar el cambio de color en el compartimiento central.
* Preparar un estándar de 2.0 g/litro y un blanco de reactivos

DE TOXICOLOIA
 Prueba cuantitativa:
Metanol
Oxidación : A 1,0 cm3 del compartimento central, oxidar con 1- 2 gotas de solución de
permanganato de potasio, agitar, dejar en reposo por dos min y decolorar el exceso de
permanganato añadiendo gota a gota solución de sulfito de sodio.
Desarrollo de color: a la solución oxidada añadir 0.2 cm3 de ác. cromotrópico, agitar,
añadir por las paredes del tubo 2 cm3 de ác. sulfúrico conc. en caso positivo aparecerá
un anillo de color violeta en la interfase.
En caso positivo, añadir a la reacción anterior 2 cm3 más de ác. sulfúrico conc. y mezclar,
dejar en reposo por 20 min. y leer la D.O. a 570 nm. Preparar un estándar y un blanco
en igual procedimiento que la muestra.
Etanol
Tomar el contenido del compartimiento central y colocar en una probeta de 10 ml. lavar
varias veces el compartimiento central con agua destilada y colocar todo en la probeta,
hasta aforar a 10 ml. Leer la D.O. a 630 nm en un espectrofotómetro, encerando con el
blanco de reactivos.
8. Discusiones
9. Conclusiones
presentadas.
10. Cuestionario
Consultar que es metanol, etanol, bebida alcoholica
11. Bibliografía:
Sunshine, I, 1987, Methodology for Analitical Toxicology, 5ta. Impresión, Vol. I, Editorial
CRCPress, USA, Florida
Vallejo, M, Toxicología Analítica, Universidad Nacional de Bogotá

DE TOXICOLOIA
Ferrari, Luis, 2005, Maual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología, La

Plata – Argentina, Editores Leda Giannuzzi
12. Anexos
 Fórmula para el cálculo de la concentración de metanol y etanol en la muestra

de sangre
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 11
3. Tema: DETERMINACION DE ALCALOIDES
4. Objetivo
 Extraer los diferentes alcaloides de las muestras biológicas de personas

intoxicadas o farmacodependientes para su identificación.
Se fundamenta en la extracción de principios activos de naturaleza alcalina,
considerados químicamente como alcaloides, de muestras biológicas, la purificación en
medio ácido, extracción en medio alcalino y la identificación de cada uno de ellos
mediante cromatografía de capa fina por comparación con estándares conocidos.
Alcaloides: Sustancia de origen natural, químicamente son aminas primarias,
secundarias o terciarias, generalmente de acción tóxica.

Químicos:
Ac. clorhídrico  Embudo de separación
Amoniaco  Placas de porcelana excavadas
 Cámara cromatografía
Cloroformo  Nebulizador
 Lámpara de luz UV 254 y 396 nm
Sulfato de sodio anh.  Centrifuga
Reactivo de Dragendoff  Capilares
DE TOXICOLOIA
Placas de silica gel G con aditivo F 254

Eluente: Acetato de etilo: 17
Metanol: 2
Amoniaco: 1
6.3 Procedimiento
1. A 30 cm3 de orina, acidificar con 2 cm3 de HCl 1%,

2. Extractar con 15 cm3 de cloroformo, separar y descartar la fase orgánica
(cloroformo) que contiene impurezas solubles en medio ácido.
3. La fase acuosa, alcalinizar con amoníaco
4. Extractar con 20 cm3 de cloroformo,
5. Separar la fase orgánica,
6. Secar mediante filtración en sulfato de sodio anhidro,
7. Evaporar a sequedad en B.M.
8. El residuo disolver en 1 cm3 de metanol o en el solvente de extracción.
9. Colocar unas gotas en la placa excavada y evaporar para reacciones de
identificación preliminar y reservar el resto del extracto para la cromatografía.
Pruebas de identificación preliminar
1. Reacción de Dragendorff: Al extracto evaporado en la placa excavada, colocar
unas gotas de R. Dragendorff, en presencia de alcaloides se producirá un
precipitado de color rojo ladrillo.
2. Reacción de Marquis : Al extracto evaporado en la placa excavada, colocar unas
gotas de R. de Marquis, en presencia de alcaloides del opio aparecerá una
coloración violeta.
3. Reacción Scott: Al extracto evaporado en la placa excavada, colocar 5 gotas de
R. de Scott, 2 gotas de HCL y 5 gotas de Cloroformo en presencia de cocaína
aparecerá un color azul turquesa en la fase de cloroformo.
Cromatografía en capa fina:
DE TOXICOLOIA
1. El extracto obtenido realizar la siembra en la placa cromatográfica con la ayuda

de un capilar, conjuntamente con estándares conocidos,
2. Controlar la intensidad de la siembre con la lámpara UV
3. Colocar la placa en la cámara cromatográfica y correr la cromatografía en un
frente de 10 cm.
4. Secar al ambiente en forma horizontal,
5. Observar bajo Luz U.V. marcar las manchas
6. Revelar con reactivo de dragendorff, con lo que las manchas aparecen de color
rojo ladrillo, calcular los Rfs e identificar por comparación con los RFs de los
estándares.
8. Discusiones
9. Conclusiones
presentadas.
10. Cuestionario
¿Consultar que es farmacodependencia?
11. Bibliografía:
 NACIONES UNIDAS, 2008, Métodos Recomendados para la Detección y análisis

de drogas en especímenes biológicos, Manual para Uso de los Laboratorios
Nacionales, Nueva York
 Clarke, 1986, Insolation and Identification of Drugs, in Pharmaceutical Body
Fluids and Post-morten Material, 2do Edition, London.
http://www.calameo.com/read/000256586a5ab6c0efabc
12. Anexos
N.A
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 13
3. Tema: DETERMINACION CANABINOLESEN ORINA
4. Objetivo
 Extraer e identificar los principios activos de la marihuana (cannabinoles) de una

muestra de orina de consumidores de marihuana.
Se fundamenta en la hidrólisis alcalina de sus productos conjugados y extracción de los
cannabinoles de la muestra de orina de consumidores de cannabis, con un disolvente
orgánico y su identificación por métodos cromatográficos, por comparación con
estándares conocidos.

35. Muestras Biológicas: a los remanentes de las muestras de orina colocar en
recipiente que contenga solución de cloro 5:1000 recién preparada a partir de
cloro 10%, dejar en contacto por 15 minutos y desechar al sifón.
36. La Orina recolectada debe estar bajo vigilancia del responsable del proceso
37. Desechos químicos: disolventes, eluentes, colocar el recipiente apropiado,
rotulado como desecho para reciclar.
38. El Reactivo de Fast Blue se debe manejar con seguridad por ser una sustancia
cancerígena
Químicos:
DE TOXICOLOIA
Éter de petróleo / hexano  Embudo de separación

KOH 10N  Pipetas graduadas de 5 y 10 ml
 Erlenmeyer
HCl conc
 Vaso de evaporización
Sulfato de sodio anh.  Embudo de filtración
Placas de silica gel G con aditivo F 254  Cámara cromatografica
P-dimetilaminobenzaldehido 10 % en  Pulverizador
etanol  Papel filtro
Ácido sulfúrico conc  Baño maría
 Placa de porcelana excavada
Eluente : Hexano - Dioxano (9:1)
Vapores de NH3
-Revelador Fast Blue 1% en agua
(preparado en fresco).
-Fast Blue 10% en sulfato de sodio

anhidro
6.3 Procedimiento
Hidrólisis alcalina En un erlenmeyer de 250 ml colocar 20mL de muestra de

orina, añadir 2mL de KOH 10N, llevar a B.M. a 55 ° C por 30 min., enfriar en chorro
de agua fría, acidificar con HCL conc.
Extracción: La muestra luego de la hidrólisis trasvasar a un embudo de

separación y añadir 20 ml de éter de petróleo, agitar por 1 min. separar (si es
necesario con la ayuda de centrifugación)
Purificación: filtrar el extracto por sulfato de sodio anh.
El extracto obtenido separar en dos partes: la primera porción distribuir en dos
pocillos de la placa excavada y la otra mitad concentrar y reservar para la
cromatografía
Pruebas de identificación preliminar:

1. Evaporar a sequedad el extracto contenido en la placa excavada y cuando esté
frio añadir 10 gotas de reactivo p-dimetilaminobenzaldehido y 4 gotas de Ac.
sulfúrico conc. en caso positivo se observa en el fondo un color rojo vino, el cual
al añadir l ml de agua toma una coloración azulada en presencia de cannabinoles.
2. En otro pocillo a placa excavada colocar un pequeño trozo de papel filtro,
evaporar a sequedad el extracto, luego añadir unos mgs. de reactivo Fast Blue al
DE TOXICOLOIA
10% en sulfato de sodio sobre el papel y luego unas gotas de agua. En caso
positivo aparece una coloración rojo carmín en el papel.
Cromatografía de capa fina

Al extracto reservado para CCF concentrado hasta 0.5 ml, sembrar en una placa
cromatográfica conjuntamente con estándares de cannabinoles, Realizar el
corrimiento con un frente de 10 cm, secar la placa, revelar con reactivo Fast Blue
1% en agua y exponer a vapores de NH3, en presencia de cannabinoles aparecen
manchas de color rosado - rojo carmín – púrpura
Medir las distancias del corrimiento, calcular los RFs y comparar las manchas de
la muestra con la de los estándares
8. Discusiones
9. Conclusiones
presentadas.
10. Cuestionario
N.A
11. Bibliografía:
 NACIONES UNIDAS, Métodos Recomendados para el Ensayo de Sustancias

Sometidas a Fiscalización Internacional, Manual para Uso de los Laboratorios
Nacionales de Estupefacientes, Nueva York
 Clarke, Insolation and Identification of Drugs, in Pharmaceutical Body Fluids
and Post-morten Material, London.
12. Anexos
Consultar los siguientes términos:
Cannabinoles
Alucinógenos
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 14
3. Tema: DETERMINACION DE ANFETAMINAS EN MUESTRAS BIOLOGICAS
4. Objetivo
 Extraer e identificar los principios activos de anfetaminicos en muestras

biológicas
Se fundamenta en la extracción de grupos anfetaminicos o sus derivados y metabolitos
a un p H alcalino con la utilización de solventes orgánicos, para luego identificar por
métodos cromatográficos por comparación por estandares conocidos

7. Desechos químicos: disolventes, eluyentes, colocar el recipiente apropiado,
8. Manipular con cuidado el reactivo de ninhidrina en la campana de extracción,
con guantes y mascarilla (sustancia cancerígena)
Químicos:
Cloroformo  Embudo de separación
NaOH 1 N  Pipetas graduadas de 5 y 10 ml
DE TOXICOLOIA
Reactivo de Marquis  Erlenmeyer

 Vaso de evaporización
Sulfato de sodio anh.
 Embudo de filtración
Placas de silica gel G con aditivo F254  Cámara cromatográfica
Reactivo de Mandelin: 0,5 g de vanadato  Pulverizador
de amonio, disolver en 1,5 cm3 de agua y  Papel filtro
diluir a 100 cm3 con ac. Sulfúrico conc  Baño maría
Estándares: Anfetamina, metilfenidato y  Placa de porcelana excavada
mazindol 3mg/10ml  Algodón
Eluyente: Metanol-Amoniaco (10:0,15)
Reactivo revelador ninhidrina: 0,5 g de
Ninhidrina disolver en 40 ml de acetona
preparar en fresco
-Fast Blue 10% en sulfato de sodio

anhidro
6.3 Procedimiento
Extracción: A 20 cm3 de orina alcalinizar con hidróxido de sodio 1N ( p H 11)

extractar con 20 cm3 de diclorometano/cloroformo separar la capa orgánica y
filtrar por sulfato de sodio anhídrido, evaporar a sequedad en B.M. el residuo
disolver en 1 cm3 de metanol o en el solvente de extracción. Colocar unas gotas
en la placa excavada y evaporar para reacciones de identificación preliminar
luego realizar una siembra en la placa cromatográfica.
Pruebas de identificación preliminar:

1. Reacción de Mandelin.- Al residuo evaporado en la placa excavada añadir unas
gotas del reactivo de Mandelin, en la presencia de anfetaminas y derivados se
produce coloración verdes de diferente tonalidad.
Anfetamina: verde oliva

Anfetaminas sustituidas: verde- gris
Derivados de anfetaminas: verde limón
2. Reacción de Marquis.- Al residuo evaporado de la placa excavada añadir unas

gotas del reactivo de Marquis, en presencia de anfetaminas se presenta varios
colores.
DE TOXICOLOIA
Anfetamina/ Metanfetamina: anaranjado

Anfetaminas sustituidas: Morado-verde oliva-negro
Derivados de anfetaminas: no cambia
Cromatografía de capa fina

Al extracto evaporado, redisolver en unas gotas del solvente extractor o metanol
y aplicar en la placa cromatográfica conjuntamente con estándares conocidos.
Realizar el corrimiento con un frente de 10 cm, secar la placa, revelar con
reactivo Ninhidrina calentar brevemente a 1100 C, aparecen manchas de color
rosado- naranja
Medir las distancias del corrimiento, calcular los RFs y comparar las manchas de
la muestra con la de los estándares
8. Discusiones
9. Conclusiones
presentadas.
10. Cuestionario
N.A
11. Bibliografía:

12. Anexos
N.A
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 15
3. Tema: DETERMINACION DE SALICILATOS EN MUESTRAS BIOLOGICAS
4. Objetivo
 Determinar los niveles sanguíneos de salicilatos en una persona intoxicada o en

tratamiento con salicilitos, o la taza de eliminación en muestra de orina de 24
horas
Se fundamenta en la identificación directa de las formas libres y sus metabolitos con
sales férricas presentes en el reactivo de Tinder´s que reaccionan con el grupo OH en un
medio acido para dar un complejo coloreado, cuya intensidad de color depende de la
cantidad de salicilato presente, lo que puede ser aprovechado para cuantificar
espectrofotométricamente, comparando con estándares de concentración conocida

8. Tomar la muestra de sangre por punción venosa, a los 30 min. posteriores a la
administración del fármaco de la medicación (fase de distribución), colocar en
un tubo sin anticoagulante, separar el suero por centrifugación.
9. Recolectar la muestra de orina las dos horas luego de la administración de la
medicación, fármaco en fase de eliminación.
DE TOXICOLOIA
Químicos:
H2SO4 50 %  Tubos de ensayo
NaOH 1 N  Pipetas serológicas
 Centrifuga
HCl 0,1 N
 Espectrofotómetro VIS
FeCl3 10%
Estándares de salicilato de sodio 10 mg/dl
R. Tinder´s:
 Cloruro Mercúrico: 4 g.
 Agua: 85 ml
 HCl 1N: 12 ml
 Fe(NO)3. 9H2O
 Agua: 100 ml
6.3 Procedimiento
Pruebas cualitativas:
1. Con cloruro férrico: Colocar en un tubo de ensayo 1ml de orina, añadir 3 gotas
de cloruro férrico al 10%. En caso de positivo aparece un color violeta, que indica
la presencia de salicilatos o sus derivados. Para evitar confusiones con las
coloraciones observadas con las fenotiazinas, se añade una gota de ac. Sulfúrico
50% con lo que la coloración violeta de los salicilatos desaparece, mientras que
con las fenotiazinas se intensifica.
2. R. Tinder´s: Colocar en un tubo de ensayo 2 cm3 de orina y 2 cm3 de HCl 0.1 N,
calentar en B.M. por 10 min, filtrar y neutralizar el filtrado con NaOH 0,1 N, añadir
3 gotas de reactivo de Tinder´s. La aparición de un color violeta indica la
presencia de salicilatos
Pruebas cuantitativas
A 1 cm3 de plasma o suero sanguíneo, añadir 5 ml de reactivo de Tinder´s, agitar

por 2min, centrifugar, extraer el líquido sobrenadante y leer en el
espectrofotómetro a 540nm.
Preparar un estándar de salicilato de sodio 10.0 mg/dl
DE TOXICOLOIA
8. Discusiones
9. Conclusiones
presentadas.
10. Cuestionario
N.A
11. Bibliografía:

12. Anexos
N.A
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 16
3. Tema: DETERMINACION DE CARBOXIHEMOGLOBINA
4. Objetivo
 Determinar cuali-cuantitativamente el porcentaje de carboxihemoglobina en

relación con el porcentaje de hemoglobina, lo que permitirá establecer el nivel
de exposición a monóxido de carbono.
La determinación de Carboxihemoglobina (COHb) se realiza mediante la extracción a pH
adecuado y medición espectrofotométrica en el rango visible debido a la coloración rojo
carminado que presenta el pigmento hemático. Para su cuantificación se prepara un
estándar al 100 % con una fracción de la muestra de sangre, por saturación con CO

8. Muestra 5 ml de sangre obtenida por punción venosa, con asepsia previa, colocar
en un tubo con anticoagulante (no utilizar EDTA) en tubo lleno sin cámara de
aire
DE TOXICOLOIA
Químicos:
H2SO4 © grado tecnico  Generador de CO
NaOH 10%  Baño maria
 Tubo de ensayo tapa rosca 15 ml
Formiato de sodio
 Pipetas serológicas 1,5 y 10 ml
Solución aceto-acetica A+B (1:3) pH 5.05  Centrifuga
a) Acido acético glacial 30% v/v  Espectrofotómetro VIS
b) Acetato de sodio trihidrato 40,8%
6.3 Procedimiento
Pruebas cualitativas:
1. R. Haldane: Preparar soluciones sanguíneas al 1% v/v (sangre normal y

problema) observar simultáneamente.
Color rojo amarillento: sangre normal

Color rojo carminado: sangre que contiene COHb
2. R. Alcalina: Preparar soluciones sanguíneas(sangre normal y problema) 3

gotas más agua destilada, añadir a cada tubo 2 ml de NaOH 10% y observar
Color castaño inmediato: sangre normal

Color carminado por cierto tiempo: sangre con COHb
3. R. al calor: Colocar 1ml de sangre (normal y problema) en un tubo de ensayo

cada una, colocar en B.M hirviente por 10 min.
Color café chocolate: sangre normal

Color rojo ladrillo: sangre con COHb
Pruebas cuantitativas
DE TOXICOLOIA
 Medir 2,5 ml de sangre (problema), colocar en un tubo de 15 ml o Erlenmeyer

con tapa, agregar 7,5 ml de agua destilada y o,5 ml de solución antiespumante.
 Separar la mitad del volumen obtenido (5ml) en otro tubo o recipiente similar
 Saturara una de las fracciones con CO por 30 min (colocar aproximadamente 1g
de formiato de sodio, en el recipiente generador, hacer gotear lentamente ácido
sulfúrico y aplicar calor lentamente con lo que se produce CO)
 Colocar 4 tubos de 15 ml con 4 ml de solución aceto-acetica cada uno
 Preparar un blanco de reactivos
 Agregar en dos de ellos 1 ml de Solución sanguínea (problema sin tratar con CO)
 Mezclar, colocar en B.M a 550C por 5 min
 Enfriar en chorro de agua por 5min
 Centrifugar por 5min a 5000 rpm
 Colocar en tubos de 5ml, 2 ml de cada sobrenadante, añadir 10ml de agua
destilada en cada tubo y mezclar por inversión
 Realizar las lecturas utilizando cubetas diferentes: blanco, sangre problema y
sangre tratada con CO
 Determinar las absorbancias de cada uno a 570 nm y 630 nm, utilizando como el
preparado de los reactivos.
CALCULOS:
𝐴570 − 𝐴630 (𝑠𝑎𝑛𝑔𝑟𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 𝑛𝑜 𝑡𝑟𝑎𝑡𝑎𝑑𝑎)

% 𝐶𝑂𝐻𝑏 = 𝑥100
𝐴570 − 𝐴630 (𝑠𝑎𝑛𝑔𝑟𝑒 𝑡𝑟𝑎𝑡𝑎𝑑𝑎 𝑐𝑜𝑛 𝐶𝑂)
8. Discusiones
9. Conclusiones
presentadas.
10. Cuestionario
Consultar:
DE TOXICOLOIA
Carboxihemoglobina:
Ptequias:
11. Bibliografía:


 La Plata-Argentina. Editores Leda Giannuzzi, 4.1.19
12. Anexos
N.A
DE TOXICOLOIA
1. Practica No 17
3. Tema: EXTRACCION E IDENTIFICACION DE PLAGUICIDAS
4. Objetivo
 Determinar la presencia de plaguicidas en muestras biológicas de personas

intoxicadas, por identificación del grupo de acuerdo a su clasificación química.
Se fundamenta en la extracción de plaguicida en muestras biológicas con un solvente
poco polar, para luego ser identificado mediante cromatografía de capa fina
visualizando las manchas son reactivos específicos por reacción con átomos presentes
en la estructura química del plaguicida, frente a estándares conocidos.
Plaguicidas o pesticidas: son sustancias o mezclas químicamente orgánicas e

inorgánicas, de origen natural o sintético, utilizados para prevenir, destruir o controlar
cualquier plaga en los campos: agrícola, sanitario y domestico

8. Muestra : contenido estomacal puede realizarse en muestras de sangre, orina
sustancias sospechosas
DE TOXICOLOIA
Químicos:
Éter etílico  Embudo de extracción
Éter de petróleo  Papel filtro
 Capilares para aplicación
Ac. Clorhídrico 1%
cromatográfica
Sulfato de sodio anh.  Baño maría
 Pulverizador
Placa cromatográfica con aditivo F 254
Eluente: Hexano- Acetona (4:1)
Revelador:
1.- Para thiofosforicos: cloruro de paladio 0,5 %
en HCl10%
2.- Para clorados: Nitrato de plata 1%
3.- Para carbamatos: Vainillina 1% en ac.
Sulfúrico conc.
4) Para cumarinicos: Ac sulfúrico al 5%
6.3 Procedimiento
De 10 a 50 cm3 o gramos de muestra (contenido estomacal) acidificar con 0,5 cm3 de

HCl 1% añadir 20 cm3 de solvente extractor (éter etílico, éter de petróleo 1:1) en un
recipiente extractor (embudo o recipiente con tapa) agitar perfectamente varias veces
(10 min). Separar la capa etérea, filtrar por sulfato de sodio anh, evaporar a sequedad
en B.M, enfriar, redisolver el residuo en 0,5 cm 3 de eter etílico y aplicar en la cámara
cromatográfica, conjuntamente con estándares conocidos de los diferentes plaguicidas,
colocar en la cámara cromatográfica con l eluyente, secar la placa, observar bajo la luz
UV y luego revelar con el revelador correspondiente
Revelado Coloración
1.- Cloruro de paladio 0,5 % en HCl10% manchas de color amarillo

2.- Solución acuosa de Nitrato de plata 1% manchas de color gris
3.- a) Vainillina 1% en ac. Sulfúrico conc.
DE TOXICOLOIA
b) calentar manchas de color rosado intenso
4) a) Ac sulfúrico al 5%
b) Calentar a 600C manchas de color café
8. Discusiones
9. Conclusiones
presentadas.
10. Cuestionario
Consultar:
Carboxihemoglobina:
Ptequias:
11. Bibliografía:
 Vallejo, Maria. Toxicología analítica. Universidad Nacional de Bogotá
 Flajaville. J. Toxicología clínica y analítica, Editorial JIMS, Barcelona
12. Anexos
N.A

Guia de Practicas Toxicologia Farmaceutica

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CÓDIGO: IRDER –LAB-05

GUIA DE PRACTICAS Versión: 02

5. Fundamento y método de la práctica

Efecto: manifestación de la acción de un xenobiótico que modifica un mecanismo biológico o

6.1 Instrucciones previas

6.2 Equipos, materiales y reactivos

1. Pesar cada uno de los ratones y numerar del 1 al 4

3. Calcular el volumen exacto de solución de cafeína 8 mg/Kg de acuerdo al peso de cada

RATON NO DOSIS EFECTO

6. Medir los tiempos de latencia y de duración del efecto

 Experimentar con diferentes sustancias estimulantes, administradas en una

6.1 Instrucciones previas

6.2 Equipos, materiales y reactivos

2. Utilizar como vía de administración la interperitoneal

3. Observar los efectos

RATON NO DOSIS EFECTO

4. Tomar en cuenta los tiempos de:

 ¿Cuál de las tres sustancias utilizadas de la considera de mayor cuidado y

5. Fundamento y método de la práctica

6.1 Instrucciones previas

 posibles cambios externos durante los 14 días de exposición.

6.2 Equipos, materiales y reactivos

1. Pesar cada uno de los ratones y numerar.

10. Realizar control de peso y de condiciones generales a los 7 días.

 Experimentar con diferentes sustancias estimulantes, administradas en una

Mecanismo de acción: es la forma como el toxico actúa sobre el organismo vivo

6.1 Instrucciones previas

6.2 Equipos, materiales y reactivos

Pesar a cada ratón y numerar

Administrar a cada ratón un toxico diferente

 Administración de CO por vía respiratoria:

1. Realizar la generación de CO: en un Erlenmeyer colocar 0.5 g de formiato de sodio,

4. Determinar el tiempo de latencia, desde el inicio de la exposición hasta que el ratón

 Conocer el manejo del programa micromedex y la aplicación de este en

Caja de Búsqueda sencilla (flecha 4)

Simplemente escribimos cualquier término, frase o pregunta en el cuadro de búsqueda

Desplegando los diferentes

Herramientas del menú horizontal (flecha 5)

Comparación de fármacos En esta pestaña podremos introducir hasta 20 medicamentos o

 Couto, U. G. (21 de 11 de 2016). Guía de uso de Micromedex. Obtenido de

 Determinar la concentración o dosis en que una sustancia química o fármaco

DL50: Es la dosis única derivada estadísticamente de una sustancia química, que se

6.1 Instrucciones previas

13. Se usarán en todo momento el mandil para el trabajo en el laboratorio y este

6.2 Equipos, materiales y reactivos

Metodo probbit para el cálculo de la CL50 por inferencia a partir de la CL50

 Calculo mediante la fórmula de Abbot

 Reconocer química y físicamente las diferentes drogas que causan

6.1 Instrucciones previas

6.2 Equipos, materiales y reactivos

* Preparar un estándar de 2.0 g/litro y un blanco de reactivos

Consultar que es metanol, etanol, bebida alcoholica

Vallejo, M, Toxicología Analítica, Universidad Nacional de Bogotá

Ferrari, Luis, 2005, Maual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología, La

 Fórmula para el cálculo de la concentración de metanol y etanol en la muestra

 Determinar cuantitativamente la presencia de alcohol etílico y metílico en

6.1 Instrucciones previas

6.2 Equipos, materiales y reactivos

* Preparar un estándar de 2.0 g/litro y un blanco de reactivos

Consultar que es metanol, etanol, bebida alcoholica

Vallejo, M, Toxicología Analítica, Universidad Nacional de Bogotá

Ferrari, Luis, 2005, Maual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología, La

 Fórmula para el cálculo de la concentración de metanol y etanol en la muestra

 Extraer los diferentes alcaloides de las muestras biológicas de personas