LABORATORIO BIO 9000

PROCEDIMIENTO PE-I-03
PARA EL CÁLCULO DE LA
INCERTIDUMBRE EN MICROBIOLOGÍA
Rev. nº: 00
Fecha de aprobación: 19/05/11

REV. FECHA HOJA/S CAUSA DEL CAMBIO

Realizado Revisado Aprobado

Fdo.: Daniel Aguilar-Galindo Fdo.: Fco. Miguel Rguez. Peña Fdo.: Juan Carlos Domínguez
Fecha: 18/05/11 Fecha: 18/05/11 Fecha: 19/05/11
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PARA EL CALCULO DE
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INCERTIDUMBRE EN MICROBIOLOGÍA
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INDICE

1.-OBJETO

2.-ALCANCE

3.- REFERENCIAS

3.1. Documentos utilizados para la elaboración de este PNT.

4.-CONDICIONES GENERALES

5.-REALIZACIÓN

5.1. Cálculo de la Incertidumbre Global

6.- ANEXOS
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1.-OBJETO

El objeto del presente procedimiento es indicar la sistemática para la realización de la

estimación de la incertidumbre de los ensayos microbiológicos cuantitativos realizados con
procedimientos internos.

2.-ALCANCE

Este procedimiento se aplica al cálculo de la estimación de la incertidumbre de métodos

microbiológicos.

3.-REFERENCIAS

3.1.-Documentos utilizados en la elaboración de este PNT.

- PG-01: “Gestión, elaboración y control de los documentos del sistema de la calidad”.

Procedimientos Generales Bio 9000.
- Extracto del “Procedimiento para el cálculo de incertidumbre en microbiología” de
Gabinete de Servicios para la Calidad S.A.L.
- “Curso de Validación y cálculo de Incertidumbres en microbiología”, CEBF Network
Solutions.
- PG-17: “Validación de métodos”.

4.- CONSIDERACIONES GENERALES

En la realización de la medida en ensayos microbiológicos cuantitativos debemos tener en

cuenta factores que pueden influir en el resultado y por lo tanto también en la estimación de la
incertidumbre de éste.

NOTA: Ampliar según se realicen los ensayos siguiendo las pautas indicadas en el curso de
“Validación y cálculo de incertidumbres en métodos microbiológicos”.

El método de estimación de incertidumbre podrá estar basado en un modelo denominado

“caja negra” o “modelo global” en el que se tendrán en cuenta la incertidumbre del material
de referencia que se utilice, la incertidumbre de la comparación con el valor medio, la
incertidumbre de reproducibilidad cotidiana y la incertidumbre de recuperación no adecuada.
Estas incertidumbres se compondrán cuadráticamente multiplicándose por un factor K para
una probabilidad del 95%, con el fin de expresarla como incertidumbre expandida.

El valor del factor K para una probabilidad del 95% depende de los grados de libertad con
los que se ha estimado la incertidumbre. (ver anexo).

La incertidumbre expandida se podrá expresar en relativa (%) si se divide por el número de

recuento.
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5.- REALIZACIÓN

Para la estimación de la incertidumbre de medida se tendrán en cuenta los resultados

obtenidos en la validación.
Además para cada resultado de ensayo que se realicen, se deberá estimar una incertidumbre o
aplicar una relativa según se indica en el presente procedimiento.

5.1.- CÁLCULO DE INCERTIDUMBRE GLOBAL

Dado que las incertidumbres, sólo siguen una distribución gaussiana cuando son expresadas
como logaritmos, todas las incertidumbres se expresarán y compondrán como logaritmos.
Las incertidumbres que se consideran para la estimación de la incertidumbre global se
componen cuadráticamente de la siguiente manera:

U método = U Vref
2
+ U Vmedio
2
+ U Re
2
prod + U Re c
2

El cálculo de cada una de ellas se realizará del modo siguiente:

5.1.1. UVref

Dependiendo si se utiliza un Material de Referencia estable o no (Método de Duplicados) esta

incertidumbre se calculará:

- Para el método de duplicados, se puede hacer uso de ensayos de aptitud o de cepas de

trabajo diluidas, mediante la estandarización de las mismas:

Uso de ensayos de aptitud Cepas de referencia

U
1 + U MR 2 + ... + U MRn 1 + U MR 2 + ... + U MRn
Vref 2 2 2 2 2 2
U MR U MR
N N
donde: donde:
UMR se calcula como: UMR se calcula como:
S MR S MR
n n

Siendo: - SMR la desviación estándar dada por Siendo: - SMR la desviación estándar obtenida de los
el ejercicio recuentos de las placas utilizadas para la obtención
- n el nº de laboratorios participantes del valor de referencia
- n el nº de placas utilizadas

- N = nº de experimentos - N = nº de experimentos
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(Se deberá convertir a logaritmos si los resultados se expresan en ufc.)

En caso de utilizar un material de referencia estable

MR estable

Si solo se dispone de una serie de valores y una

desviación estándar (Material de Referencia) se
calculará como:

S MR
n

Donde:
SMR = la mitad de la media de las diferencias de
los intervalos
n = número de laboratorios participantes en la
certificación del Material de Referencia.

(Se deberá convertir a logaritmos si los resultados se expresan en ufc.)

5.1.2. UVmedio

Provendrá de la debida al cálculo de VM

S
U Vmedio =
nexp erimentos

Donde:

S es la desviación estándar obtenida de aplicar el sistema de duplicados (Sd) o de aplicar

repeticiones del Material de referencia estable (Sm), estas desviaciones están calculadas en
logaritmos.

n = nº de experimentos.
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5.1.3. UReprod

Valor debido a la reproducibilidad cotidiana.

Tendrá en cuenta el número de repeticiones diarias (nd) y la reproducibilidad estimada para el

método (σR).

σR
U Re prpd =
nd

La reproducibilidad (σR).deberá ser calculada bien en el propio ensayo, bien con muestras
adicionales, o bien de una manera teórica suponiendo una distribución de Poisson, y teniendo
en cuenta el valor de recuento C de la muestra.

Propio ensayo

σR = Sm o Sd estimadas en logaritmos, en función de si se dispone de material de referencia

estable o se utiliza la técnica de duplicados.

Poisson (sigma teórica)

1
σR = •C
C

Con este modo de cálculo se expresa ya en ufc, por lo que será necesario pasarlo a
logaritmos.

5.1.4. UREC

Dependerá del valor obtenido en el ensayo y sólo se aplicará si existen diferencias

significativas.

log VR − log VL
U REC =
3

La existencia de diferencias significativas se estimara a partir del IC o de la t de Student

calculada y tabulada, en función de si se dispone de un material de referencia estable o si se
utiliza la sistemática de duplicados.
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Una vez que se han calculado todas las componentes expresadas como logaritmos,
tendríamos la incertidumbre combinada del método.

U método = U Vref
2
+ U Vmedio
2
+ U Re
2
prod + U Re c
2

Para expresar la incertidumbre combinada como incertidumbre expandida es necesario

multiplicarla por el factor ± K obtenido a partir de los grados de libertad efectivos en la
tabla de la distribución t de Student para una probabilidad del 95%; y como la Incertidumbre
de método se ha calculado en logaritmos es necesario deslogaritmizar, tal y como indica la
norma ISO 19036

I IntervaloSuperior
(C ⋅ 10 ) − C ⋅ 100
K ⋅U

I IntervaloInferior
( )
C − C ⋅ 10 − K ⋅U
⋅ 100
C

La incertidumbre está expresada de manera relativa en dos intervalos ya que la

incertidumbre en microbiología no es simétrica..

6.- ANEXOS

6.1.- Estimación de los grados efectivos de libertad y del valor “k”

En el caso de no haber realizado suficientes repeticiones para garantizar fiabilidad, (más de 10

medidas) se estimarán los grados de libertad de acuerdo a:

U4
ν Efectivos =
⎛ UPatrón
4 4
UMedia
4
URe 4
UCorrección ⎞
⎜ + + pro
+ ⎟
⎜ν ν Media ν Rrepro ν Corrección ⎟⎠
⎝ Patrón
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Donde los valores de los grados de libertad de cada componente se calculan como:

Patrón Media Repro Corrección

n-1
Donde n=número de
n-1
El obtenido a partir del repeticiones de la media
Donde n
Valor de valor K del certificado. Si se obtiene de muestras
corresponde al Infinito
referencia Si K=2 el valor será (caso cuantitativo) será
número de
infinito m*(n-1) siendo n=número
repeticiones
de repeticiones y
m=número de muestras
Para cada resultado será n-1
n= número de participantes
o el correspondiente al K
del método validado.
Para el UVR
U4
ν valor .referencia = valor .referencia
4
⎛ U vri ⎞
⎜⎜ ⎟⎟
⎝ N⎠ n-1
∑ n-1
Pares de Donde
ni − 1 Donde n=número de pares Infinito
valores n=número de
Donde N corresponde al de valores
pares de
número de valores
intercomparativos
utilizados(es decir, el
numero de pares de
valores);
y ni corresponde al número
de participantes en cada
intercomparativo

Una vez estimado el νefectivo, se obtendrá la K correspondiente para un intervalo del 95%
aplicando la tabla de Student, como ( t 0.05,νEfectivos) siendo éste el valor de “K”.