Universidad Autónoma de Guerrero

Escuela Superior de Ciencias Naturales

Biología Experimental

Practica 2: Preparación del material para la esterilización

M.C. Roxana Reyes Ríos

Guillermo Jiménez Pérez

Las Petaquillas, Chilpancingo de los Bravos, Guerrero a 09 de abril del 2018

Introducción
El trabajo de laboratorio en microbiología requiere siempre ciertos mecanismos
de control de las poblaciones microbianas. La esterilización es uno de los
mecanismos más utilizados y las técnicas de esterilización aplicables dependen
directamente de las características del material de trabajo o de los medios que
se vayan a tratar. La esterilización puede ser preparativa, en la que los materiales
y medios a utilizar en el laboratorio o durante distintos procesos microbiológicos
deben ser esterilizados antes del mismo trabajo. Pero también es necesaria la
esterilización antes de desechar el material ya utilizado y contaminado en el
laboratorio, en cuyo caso se habla de esterilización final (Perez, Sinolíz, Torralba,
& Vázquez, 2010).
Tipos de esterilización
En general, se pueden identificar 2 tipos de esterilización:
- Esterilización química. Para llevar a cabo la esterilización química se utilizan
sustancias, llamadas germicidas o biocidas. Estas sustancias debilitan la
membrana celular de los virus y bacterias atacándolos directamente. Los
neutralizan y eliminan las condiciones favorables para su desarrollo.
- Esterilización física. Este tipo de esterilización suele llevarse a cabo mediante
la aplicación de altas temperaturas. Puede ser por calor húmedo o calor seco
(Quiminet, 2010).
La esterilización del material de laboratorio es un proceso que permite eliminar
la carga microbiana patógena y no patógena, incluidas las esporas, de productos
e instrumentos que lo requieran como el instrumental médico o los medios de
cultivo. Para que sea eficaz debe realizarse sobre materiales limpios y
respetando los parámetros y procedimientos definidos para cada método
(Quercusblog, 2016).
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE DESTRUCCIÓN DE LOS
MICROORGANISMOS
a) Temperatura: Las temperaturas elevadas tienen efectos dañinos sobre los
microorganismos y se debe tener en cuenta que cuando, además de la
temperatura, también se utiliza un agente antimicrobiano, los incrementos en la
temperatura aceleran la destrucción de los microorganismos. Por ejemplo, la
muerte de una suspensión bacteriana por fenol es mucho más rápida a 42ºC que
a 30ºC.
b) Tipo de microorganismos: Las especies de microorganismos difieren en su
susceptibilidad a los agentes físicos y químicos. En las especies formadoras de
esporas, las células vegetativas son mucho más susceptibles que las formas
esporuladas.
c) Estado fisiológico de las células: El estado fisiológico de los microorganismos
puede influenciar la susceptibilidad a un agente antimicrobiano. Las células
jóvenes, metabólicamente activas, son más fácilmente destruidas que las células
viejas cuando el agente actúa interfiriendo con el metabolismo.
d) Ambiente: Las propiedades físicas y químicas del medio o sustancia donde se
encuentran los microorganismos, también tienen una profunda influencia sobre
la eficacia de la destrucción microbiana, por ejemplo, el calor es mucho más
eficaz en materiales ácidos que en materiales alcalinos. La consistencia del
material influye notablemente en la penetración del agente. La presencia de
material orgánico puede reducir significativamente la eficacia de un agente
químico, ya sea inactivándolo o protegiendo de él a los microorganismos si están
presentes (Caballero, 2011).
Los agentes desinfectantes se clasifican además en físicos y químicos,
correspondiendo al primer grupo la radiación ultravioleta, la limpieza y la
aplicación de calor, y al segundo grupo, sustancias como los compuestos
clorados, alcoholes, aldehídos, amonios cuaternarios, los compuestos fenólicos
y biguanidas, los que pueden bloquear la función celular de los microorganismos
para matarlos. Finalmente, para la esterilización se utilizan agentes físicos, como
la aplicación de calor, las radiaciones y la filtración, y químicos, co-agentes
oxidantes, soluciones antisépticas, óxido de etileno y formaldehído. En próximas
publicaciones que les traeremos en el blog de El Crisol, hablaremos a mayor
detalle de las tareas de limpieza, desinfección y esterilización y del tipo de
agentes empleados para llevarlas a cabo en el material para laboratorio para un
trabajo más seguro y efectivo (marketing, 2017).
Existen distintos tipos de gérmenes y microorganismos esparcidos en el
ambiente que pueden adherirse con facilidad a los instrumentos que se usan
diariamente en el laboratorio. Esto crea grandes dificultades en los estudios
bacteriológicos, especialmente cuando es necesario obtener las especies
microbianas en estado de pureza. Con el fin de subsanar este tipo de
inconvenientes, se usa la esterilización para destruir todos los gérmenes vivos
que existan sobre los objetos o sustancias que se emplearán (CYMA, 2017).
Objetivos
 El alumno conocerá y aplicará las técnicas de esterilización en diversos
materiales, mediante calor húmedo y calor seco y sus usos.
 Aprender a preparar el material para su esterilización.

Metodología
El material de cristalería debe lavarse con jabón líquido enjaguando con
abundante agua de la llave y si es necesario con agua destilada.
Secar el material al horno a 60ºC o de lo contrario secarlos con una pieza de tela
delgada sin pelusa.
Para la preparación del material a esterilizar se debe senguir los siguientes
pasos:
1- Hacer un gorro de papel estraza: ajustándola a cada material indicado, de
manera que al mover el gorro no pueda caerse y sellando con cinta
testigo.
En tubos de ensaye:
1- Tapar cada tubo con un tapon de algodón procurando que quede bien
ajustado en la boca del tubo.
2- Colocar los tubos en un bote de lámina y proteger el bote con un gorro de
papel.
Pipetas:
1- Poner boquillas de las pipetas en un filtro de algodón de tal manera que
el aire pase libremente a través de él, procurando que quede
suficientemente apretado.
2- Envolver con tiras de papel estraza de 4 cm de ancho por 50 cm de largo.
Al final envolverla con papel aluminio.
3- Marcar el volumen de cada pipeta en la envoltura. Esterilizar por calor
seco (horno).
Cajas Petri:
1- Colocar las cajas Petri individual o en grupo con las caras hacia abajo.
2- Envolverlas con papel estraza en forma de rectángulo adecuado.
3- Esterilizar por calor seco (horno).
Matraz o frasco de vidrio:
1- Colocarles tapones de algodón lo suficientemente apretado.
2- Cubrir el tapón de algodón con un gorro de papel estraza de igual manera
que las cajas Petri.
3- Etiquetar los matraces o frascos y esterilizar a calor húmedo o seco.
Abatelenguas:
 Humedecer cada uno de los abatelenguas con tiras de papel estraza de 5 cm
de ancho por 30 cm de largo. Esterilizar por calor húmedo.

Para la esterilización en la olla de presión (calor húmedo) se necesitan llevar a

cabo el siguiente procedimiento:
1- colocar agua hasta el nivel de la canastilla de la olla.
2- Colocar el material a esterilizar en posición adecuada sobre la canastilla.
3- Cerrar la tapa de la olla herméticamente, en base a las flechas señaladas
(indicando abierto-cerrado) y procure que este bien ajustada.
4- Calentar la olla sobre la flama del mechero.
5- Esperar a que salga vapor a chorro del orificio de la tapa y que la aguja
del manómetro este marcando entre 3-5 libras/pulgadas.
6- Enseguida coloque la válvula giratoria. Algunas ollas de presión la válvula
se ajusta sobre la tapa en forma de pivote y al estar marcando entre 3-5
libras/pulgadas únicamente hacemos un movimiento de la válvula hacia
abajo.
7- Esperar a que el regulador de la olla alcance la presión de 15
libras/pulgadas, a los 121ºC y se inicia el calentamiento.
8- Regular el calor, manteniendo la presión indicada (121ºC) y a partir de ahí
el periodo de esterilización o tiempo de retención se comienza a contar
durante 15 minutos manteniendo fija la presión.
9- Terminando el tiempo indicado apagar el mechero y esperar a que la
aguja del manómetro baje a cero.
10- Finalmente lavar la olla y colocarla en el lugar indicado.
Para llevar a cabo la esterilización en horno (calor seco) es necesario los
siguientes métodos donde solo se puede emplear en utensilios de vidrio o metal
como jeringas, agujas, pipetas, etc.
1- Preparar el material para esterilizar, del mismo modo que para el
método de la autoclave.
2- Colocar el material en el horno, que no quede apretado, que permita
la circulación de aire.
3- Poner el termostato a la temperatura adecuada (160º-180ºC) y
encender el horno.
4- Vigilar el termostato. Cuando llegue a la temperatura deseada (160º-
180ºC) empezar a vigilar el tiempo durante 60 minutos. Si los
materiales son de vidrio, pesados o voluminosos o si no hay polvos,
aceites vaselina, etc., se considera 2 horas de exposición a 160º-
180ºC.
5- Apagar el horno y esperar hasta que la temperatura descienda a los
40ºC. El papel empelado para envolver deberá haber tomado un color
marrón oscuro.
Resultados

Imagen 2. Cubierta de papel estraza para el material. imagen 2. Colocación de manera correcta dentro de la olla

Imagen 3. La olla de presión debe mantenerse a 15 libras, a una temperatura de 125 º C

Discusión
El tiempo que se llevó al realizar la practica fue bastante, ya que cada uno debe
tener un tiempo estimado, el horno se demoró 2 horas y la autoclave tan solo
basto 1 hora como máximo. Se necesita envolver de manera adecuada cada
material ya sean pipetas, matraces, buretas, hisopos, cajas Petri, abatelenguas,
etc. En relación a los objetivos que se preparó de manera correcta y completa el
material para esterilizarlo por ambos métodos, es decir con tampones de
algodón, papel madera y cinta testigo para el material de calor húmedo y con
papel aluminio para el de calor seco y se metió a esterilizar por los métodos
correspondientes. El acomodo de materiales en la autoclave que es
esterilización por calor húmedo, debe acomodarse los bultos o paquetes de tal
forma que haya una libre circulación de vapor entre ellos (no tratar de llenar la
autoclave hasta sobrecargarlo). Para el control de la autoclave se necesitan de
unos controladores los cuales nos indicaran las presión estable y temperatura en
la cuales se debe esterilizar el material para el control del proceso para llevar a
cabo una efectiva esterilización.
El método de esterilización por calor seco (horno), su acción letal se debe a la
oxidación de componentes celulares. El aire es mal conductor del calor y el aire
caliente entra más lentamente que el vapor en los materiales. Por ello se requiere
más temperatura y tiempo de exposición que en la esterilización con calor
húmedo. Puede utilizarse mediante flameado (incineración) o con hornos de aire
caliente (Manrrique, 2012)
El calor penetra más lentamente en los materiales por lo que se necesita más
tiempo de exposición, el aire caliente no es corrosivo pero el proceso es lento.
De acuerdo a estudios realizados el mejor método para esterilización es la
autoclave ya que según combate en un 100%, mientras que mediante calor seco
combate en un 90%.

Conclusión
Desarrollamos habilidades de acuerdo a los objetivos aprendiendo la
preparación de material ya sea para esterilizar a calor seco o calor húmedo
mediante el horno y la autoclave respectivamente, aunque no hubo una
verificación de la efectividad de la esterilización sin embargo se estimó que de
acuerdo a los pasos llevado a cabos fue efectiva. Comparativamente
actualmente hay nuevas tecnologías que permiten una esterilización perfecta
mediante radiaciones.

Referencias

Caballero, E. (12 de junio de 2011). Manual de limpieza, desinfección y

esterilización de materiales en el laboratorio clínico. Obtenido de Manual
de limpieza, desinfección y esterilización de materiales en el laboratorio
clínico: http://www.monografias.com/trabajos89/limpieza-desinfeccion-
 materiales-laboratorio-clinico/limpieza-desinfeccion-materiales-
laboratorio-clinico2.shtml
CYMA. (7 de Marzo de 2017). CYMA. Obtenido de CYMA:
http://www.comercializadoracyma.com/blog/5-consejos-para-esterilizar-
y-desinfectar-sus-recipientes-para-laboratorio/
Manrrique, J. (3 de febrero de 2012). Sin nombre. Obtenido de Sin nombre:
http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-ii/pb-ii-2-fisicos.htm.
marketing, E. d. (4 de Diciembre de 2017). El crisol. Obtenido de El crisol:
http://elcrisol.com.mx/importancia-la-limpieza-desinfeccion-esterilizacion-
del-material-de-laboratorio/
Perez, B., Sinolíz, M. I., Torralba, B., & Vázquez, C. (2010). Metodología de
esterilización en el laboratorio microbiológico. Reduca, 5.
Quercusblog. (9 de junio de 2016). El blog de QuercusLab. Obtenido de El blog
de QuercusLab: https://quercuslab.es/blog/esterilizacion-del-material-de-
laboratorio/
Quiminet. (2 de enero de 2010). Quiminet.com. Obtenido de Quiminet.com:
https://www.quiminet.com/articulos/asegure-la-correcta-esterilizacion-
del-material-de-laboratorio-2805814.htm