La cúrcuma La cúrcuma es una de las plantas que más ha sido investigada.

Sus propiedades
medicinales y componentes – principalmente curcumina – han sido objeto de más de 5,600
revisiones y estudios biomédicos publicados. Como ejemplo, diremos que un estudio del año
2008 publicado en la revista Drugs in R & D encontró que una preparación estandarizada de
curcuminoides de la cúrcuma se compara favorablemente con la atorvastatina (nombre
comercial Lipitor) en la disfunción endotelial, la patología subyacente de los vasos sanguíneos
que lleva a la arterosclerosis, en asociación con la reducción en la inflamación y el estrés
oxidativo en pacientes diabéticos tipo 2. Además se usa para el cáncer y otros.
Prozac/Fluoxetina e imipramina (antidepresivos): Un estudio del 2011 publicado en la revista
Acta Poloniae Pharmaceutica encontró que la curcumina se compara favorablemente con
ambos fármacos para reducir el comportamiento depresivo en un modelo animal. De
preferencia, usar cúrcuma orgánica certificada (no irradiada) en dosis culinarias más bajas en
una base diaria para que las dosis heroicas no sean necesarias más adelante en la vida después
de que una grave enfermedad se establezca. (Fuente: traducido al español por
EmpoderaSalud: http://www.greenmedinfo.com/ blog/science-confirms-turmeric-effective-
14-drugs)

TINCION GRAM
INTRODUCCION
El universo que descubrió Leeuwenhoek estuvo conformado por bacterias y
protozoarios de diversas características. Es por ello que hoy en día sabemos que hay
millones de microorganismos que se encuentran en todos los lugares de nuestro
planeta, en al agua dulce y salada, por tanto viven en el aire, agua y tierra, se les halla
tambien en los alimentos, en el exterior y el interior de los seres vivos.
También causan enfermedades y otros que son beneficiosos para nosotros. Por eso es
de vital importancia conocer sobre estos microorganismos. Especialmente hablaremos
sobre bacterias, tipos, características y diferencias entre gramnegativas y positivas. Las
bacterias pertenecen al filum de las Shizomycophyta, se les llama también microbios o
gérmenes. Son de pequeño tamaño. Casi siempre son unicelulares. Estan recubiertas
por una pared celular de naturaleza quitinosa en su superficie externa. Poseen
prolongaciones filamentosas que les permiten desplazarse otras tienen flagelos.
La pared celular que rodea a las bacterias es compleja y existen dos formas básicas:
pared celular grampositiva con una gruesa capa de péptidoglucano y una pared
gramnegativa con una delgada capa de péptidoglucano, así como una membrana
externa.
OBJETIVOS
 Comprender la base teórica y química de los procedimientos de tinción
diferencial.
 Comprender la base química de la tinción de Gram
 Comprender el procedimiento para diferenciar entre dos grupos principales de
bacterias: Gram positivas y Gram negativas
MARCO TEORICO
En microbiología, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que NO
se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado
tenue: de ahí el nombre de "Gram-negativas" o también "gram negativas".
Esta característica está íntimamente ligada a la estructura didérmica dada por la
envoltura celular, pues presenta doble membrana celular (una externa y la otra
citoplasmática), lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los
principales supergrupos de bacterias y cuando se tratan como taxón se utiliza también
el nombre de Negibacteria o Didermata. Las restantes son las bacterias Gram positivas.
Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se
localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-
positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptidoglicano es mucho
más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.
Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. Los cocos Gram-
negativos causan la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria
meningitidis) y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. Los bacilos
Gram-negativos incluyen un gran número de especies. Algunos de ellos causan
principalmente enfermedades respiratorias (Haemophilus influenzae,Klebsiella
pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades
urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia
marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella
enteritidis, Salmonella typhi). Otros están asociadas a infecciones nosocomiales
(Acinetobacter baumanii).

ESTRUCTURA
La envoltura celular de las bacterias Gram-negativas está compuesta por una
membrana citoplasmática (membrana interna), una pared celular delgada de
peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la pared
celular de estas bacterias.
Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa se localiza el espacio
periplásmico relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas
importantes para la nutrición en estas bacterias. Retienen la safranina. La membrana
externa contiene diversas proteínas, siendo una de ellas las porinas o canales proteícos
que permiten el paso de ciertas sustancias. También presenta unas estructuras
llamadas lipopolisacáridos (LPS), por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una
estructura polisacárida central y el lípido A (endotoxina).
Las bacterias Gram-negativas pueden presentar una capa que se apoya directamente
sobre la membrana externa, en lugar de sobre la pared de peptidoglicano como sucede
en las Gram-positivas. Si presentan flagelos, estos tienen cuatro anillos de apoyo en
lugar de los dos de las bacterias Gram-positivas porque tienen dos membranas. No
presentan ácidos teicoicos niácidos lipoteicoicos, típicos de las bacterias Gram-
positivas. Las lipoproteínas se unen al núcleo de polisacáridos, mientras que en las
bacterias Gram-positivas estos no presentan lipoproteínas.
La mayoría no forma endosporas (Coxiella burnetti, que produce estructuras similares a
las endosporas, es una notable excepción).
Tinción diferencial de Gram:
Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la
desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias
pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas (en este caso, los
términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente
designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias).
Descripta en forma breve, la secuencia de la tinción es la siguiente: el Frotis fijado con
calor se tiñe 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con solución Yodada
durante 1 - 2 min. Y se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla alcohol
etílico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 1 – 2 min.
Lavar y secar.
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las
diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula
bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis
osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano.
 La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas
interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico.
Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es
peptidoglicano.
 La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho
más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana
exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10%
- 20% de la pared de la célula gram-negativa es peptidoglicano.
MATERIALES:

 Mechero
 Asa de siembra
 Porta objetos
 Microscopio óptico
 Agua destilada.
 Lugol.
 Alcohol/Acetona 1:1
 Safranina.
 Cristal Violeta
PROCEDIMIENTO
Colocar la muestra en la luna portaobjeto
Dejar secar al aire, luego fijar la preparación pasando la placa rápidamente por
el mechero (2 ó 3 veces).
Agregar violeta cristal durante 20 a 30 segundos, el cual tiene afinidad con el
peptidoglicano de la pared bacteriana (Colorante primario), enjugar con agua
seguidamente.
Agregar yodo gram durante 40 a 60 segundos que sirve como mordiente
(compuesto quimico intensificador del color) e impide la salida del cristal violeta
por la formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del
peptidoglicano de la pared bacteriana. Enjuagar con agua seguidamente.
Agregar alcohol acetona y enjuagar con agua inmediatamente (decoloración,
disuelve lípidos de la pared de Gram negativas). Esta mezcla de alcohol-
acetona, deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la misma, también
destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a que
ésta es soluble a la acción de solventes orgánicos, como la mezcla de
alcoholacetona.
Agregar safranina durante 20 segundos, enjuagar con agua seguidamente. La
safranina funciona como un colorante secundario o de contratinción y sirve para
teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo.
Lavar, secar y observar a inmersión.
RESULTADOS
Bacilo Bacterias Gram positivas de Bacillus (bacilos morados) Son Bacterias Gram
positivas (aunque frente a esta tinción, son débilmente Gram positivas o no se tiñen),
pero tienen aspectos distintos.

Portaobjeto con muestra de saliva

Portaobjeto con muestra de agua

También se observó algunas células epiteliales

DISCUSIONES
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la
membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por
ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es
demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se
formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración
azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más
resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción
del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que
impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la
coloración azul-violeta.
A pesar de la gran utilidad de la tinción de Gram, este método debe ser valorado con
precaución, ya que la reacción puede variar según la edad de las células (cultivos viejos
de bacterias Gram positivas pueden perder capas de peptidoglicanos y teñirse como
Gram negativos) y la técnica empleada (Al decolorar por un tiempo muy prolongado se
puede correr el riesgo que bacterias Gram positivas se tiñan como Gram negativas),Es
por esta situación que junto a la muestra deben teñirse controles con bacterias Gram
positivas (ej. S. aureus) y Gram negativas (ej. E. coli).
Los microorganismos Gram positivos pueden hacerse Gram negativos al aumentar la
acidez.
 Los microorganismos Gram negativos pueden hacerse Gram positivos al
aumentar la alcalinidad.
 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes ácidos pueden
hacerse gramnegativos por aumentar la alcalinidad.
 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes básicos pueden
hacerse gramnegativos por aumentar la acidez.
 En la zona isoeléctrica característica de cada especie es muy escasa la
tendencia a retener cualquier colorante.
CONCLUSIONES
La tinción Gram es una prueba potente y rápida que nos permite diferenciar dos clases
de bacterias estas son: Bacterias grampositivas y las gramnegativas.
Se concluye también que las gram positivas retienen la tinción azul y conservan el
complejo yodocolorante.
Las gram negativas quedan decoloradas y pierden el complejo yodocolorante y pueden
ser anaeróbicos y aerobicos.
Las bacterias son causantes de infecciones y enfermedades. Algunas son beneficiosas
para la agricultura, industria, salud y la investigación.
Debido a esto la tinción es importante para la microbiología debido a que:
 Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea,
permitiendo diferenciar varios tipos morfológicos.
 Permite el estudio de las estructuras internas de la celula bacteriana, tales como
paredes celulares vacuolas o cuerpos celulares.
 Permite el empleo de mayores amplificadores.

BIBLIOGRAFIA
www.biologia.edu.ar/bacterias/micro4.htm
www.bionica.info/biblioteca/BacteriasEnfermedades.pdf
http://www.danival.org/600%20microbio/6000notasmicro/tincion/tincion_gramneg. html
http://es.scribd.com/doc/43696269/Tincion
 FACULTAD DE MEDISINA Y CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFECIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
CURSO:
MICROBIOLOGIA
PROFESOR:
Mg.YURI VLADIMIR CHICOMA PRAD
TEMA:
TINCION GRAM
INTEGRANTES:
CORREA MALAVER SANDY MARGARITA
DELGADO RIOS DELI
FLORES MEJIA JOE JEINER
GONZALEZ DIAZ MELIZA YANELY
PERALES VILLALOBOS VENNY PATRICIA