INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Métodos de análisis

Practica: Efecto del pH y la concentración en la intensidad de

fluorescencia de riboflavina.

BELTRÁN CORTÉS JOSÉ ÁNGEL

GRUPO: 5QM1
SECCIÓN 1

Profesor:
Objetivos.
 El alumno conocerá el manejo del fluorómetro de filtros.
 Determinará el efecto del PH del disolvente sobre la intensidad de fluorescencia.
 Determinar el efecto de la concentración de la riboflavina en la intensidad de fluorescencia.

Resultados.
Tabla 1. Resultados de la curva de calibración de riboflavina en diferentes medios.
Riboflavina (ppm). Intensidad de Intensidad de Intensidad de Intensidad de
fluorescencia en fluorescencia en fluorescencia en fluorescencia en
H₂O. HCL 0.1M CH₃COOH 0.9 M NaOH 0.1 M
0.0 4.96 4.96 4.97 4.96
1.0 5.43 5.11 5.78 4.98
2.0 5.92 5.23 5.77 4.98
3.0 6.38 5.36 7.22 5.00
4.0 6.84 5.46 7.83 5.00
5.0 7.20 5.53 8.43 5.01
10.0 9.10 5.94 11.01 4.84
50.0 17.13 6.73 15.68 5.09
pH 5.5 1 3 13
H2O HCL CH3COOH NaOH

50
45
40
35
RIVOFLAVINA PPM

30
Figura 1: Curva de
25
calibración de
riboflavina en
20
diferentes medios.
15
10
5
0
0 1 2 3 4 5 10 50
MEDIOS.
 H2O HCL CH3COOH NaOH

30

25
RIVOFLAVINA PPM

20
Figura 2: Curva de
calibración de
15
riboflavina en
10 diferentes medios hasta
una concentración de 5
5 mg.

0
0 1 2 3 4 5
MEDIOS.

Discusión.
Al realizar la práctica se pudo observar que en el agua la riboflavina se disolvió con mayor rapidez, además que
sus resultados como se observan en la tabla y figura 1 conservan proporcionalidad y viéndolo desde un punto
de vista más práctico, el trabajar con agua es más cómodo y barato.

Al analizar ambas gráficas podemos observar que la fluorescencia no depende del disolvente sino de la
concentración, sin embargo, llega un momento en el que la concentración es tan alta que la muestra comienza
a absorber lo mismo que emite al ser mayor el número de colisiones entre las moléculas y por ende la
fluorescencia comienza a mantenerse igual o a disminuir.

El p H modifica la estructura de la molécula cambiando así la fluorescencia emitida por cambiar la estructura
de la molécula y por ende su estructura de resonancia.

Conclusión.
Se pudo observar las diferentes partes del fluorómetro así como su manera de utilizarlo y se conocieron
también los diferentes filtros que se utilizan, además se pudo observar como interfiere la concentración y el p
H en la fluorescencia emitida.

Cuestionario.
1. ¿Porqué se deben conocer las longitudes de onda máxima de excitación y máxima de emisión?
Para saber a que longitud de onda debemos irradiar la muestra y a que longitud de onda se debe leer para que
el resultado sea el adecuado.
2. Diga cuales son las formas coenzimáticas de la riboflavina y cuál es su papel en el metabolismo
celular.
El Flavin mono nucleótido y el Flavin adenin dinucleótido también son coenzimas de deshidrogenasas que
catalizan las oxidaciones iniciales de los ácidos grasos y de varios productos indeterminados del metabolismo
de la glucosa. El FMN también es necesario para la conversión de la piridoxina y el FAD se necesita para la
biosíntesis de la niacina.
 3. Estructuras de resonancia de la riboflavina.

4. La fluorescencia y la determinación de las toxinas.

Ejemplo de uso de la fluorescencia:
El árbol de la castaña, Bertholettia excelsa, además de proveer un fruto rico en todo tipo de nutrientes para la salud
humana, contribuye con la conservación ambiental. La temperatura y humedad del medio en el que crecen y se les
recolecta, aunado al inadecuado manejo de los frutos; durante la cosecha, post cosecha, procesamiento y almacenaje;
favorecen la infección fúngica y la producción de derivados difuranocumarinas, conocidos como las Aflatoxinas (AFs) B1
, B2 , G1 y G2 cuya identificación se deriva de los colores azul y verde de la fluorescencia que emiten al ser expuestos
a la luz ultravioleta (UV). Se evaluó el uso de una fuente de excitación UV como parte de un sistema que permita
reconocer la fluorescencia emitida, por las Castañas de Brasil; haciendo más fácil y rápida la separación de aquellas que
estén contaminadas por AFs. La selección mediante la detección de la emisión fluorescente dependerá del tipo de
detectores y sensores usados.
Bibliografía.
 Zempleni, J and Galloway, JR and McCormick, DB (1996) “Pharmacokinetics of orally and intravenously
administered riboflavin in healthy humans”. Am J Clin Nutr 63
 “Química orgánica. Fundamentos teórico prácticos para el laboratorio” Editorial Universidad de Buenos
Aires. Buenos Aires, Argentina. Págs. consultadas: 125 - 152.
 Burke, John Robert, Física lLa naturaleza de las cosas, México DF, International Thomson Editores.