Universidad Nacional Mayor de San Marcos

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

Facultad de Farmacia y Bioquímica
LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL

CURSO: TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL

PROFESOR:
● Apesteguía Infantes, José Alfonso.

PRÁCTICA NO: 3

TÍTULO:
Cuantificación espectrofotométrica de arsénico por el
método de VASAC & SEDIVEC y de plomo por método de
BAMBACH BURKEY.

GRUPO NO:TÓXICOS

INTEGRANTES:
● Casabona Acevedo, César Eladio
● Colán Torres, Herbert Martín
● Quinto Berrocal, Sharmely
● Quispe De La Cruz ,Jhana

HORARIO DE PRÁCTICAS
Día: Lunes
Hora: 10 am-1:20pm

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA:

Lunes, 1 de Abril del 2019.

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME:

Domingo, 7 de abril del 2019

LIMA-PERÚ
OBJETIVOS
● Determinar la cantidad de plomo presente en la muestra de sangre por el
método de Bambach y Burkey.
● Determinar la cantidad de arsénico presente en una muestra de hígado por el
método de Vasac & Sedivec.

FUNDAMENTO TEÓRICO

Determinación de arsénico método VASAC & SEDIVEC

Este procedimiento está diseñado para determinar la presencia de trazas de Arsénico y se
basa en la transformación de Arsénico (As+5) en arsénico trivalente o Arsenito (As+3); esta
reducción se lleva a cabo con ioduro de potasio, con el medio acidificado y el agregado de
zinc metálico, se logra la generación de hidruros, los cuales van a reaccionar con la especie
As+3, para dar arsina (AsH3). Dicha arsina, es captada por el reactivo dietil ditiocarbamato
de plata en piridina, el cual en presencia de arsénico vira del color amarillo al rojo. La
intensidad del color es directamente proporcional a la concentración de arsénico presente en
la muestra.1

Determinación de plomo por el método Bambach Burkey

Es la microdeterminación espectrofotométrica basada en la extracción de plomo por ditizona
como dítizonato de plomo.2

MATERIALES Y MÉTODOS

MÉTODO VASAC & SEDIVEC

APARATO
 Especofotometro “SPECTRONIC 70”
REACTIVOS
 Sol. H2SO4 al 20%
 Sol. 16% KI
 Sol. Clorhídrica Cl2Sn al 40%
 Sol. Saturada de acetato de plomo
 Granadas de zinc
 Piridina Q.P anhidra
 Dietilditio carbamato de plata Q.P
 Sol. Al 0.5% de Dietilditio carbonato de plata en piridina
Sol. Stock de arsénico (1mg/ml):1320 g. As 203 Q.P. (desecado a105 C°), Mas 10
ml NaOH 40% diluir con 1 L con H2O
Sol estándar de arsénico 1 mcg/ml: tomar 1 ml de sol stock y completar a 1 litro con
H2O
TECNICA OPERATORIA
1. Colocar 25 ml del a solución sulfúrica de la muestra problema en un frasco
generador de arsenamina
2. Adicionar 5 ml de H2SO4 al 20%
3. Adicionar 5ml KI sol.16.5%
4. Dejar por unos minutos agitando
5. Agregar 1 ml de sol. Sulfato de cobre, más 3 granallas d zinc y cerra el
sistema inmediatamente
6. Dejar burbujear por aprox.45 minutos
7. Luego leer a 540 nm al espectro como col. De referencia se usa el reactivo
de D.D.C. Ag
8. La lectura obtenida en absorbancia se compara con la gráfica patrón
obtenida.

MÉTODO BAMBACH BURKEY

APARATO
 Especofotometro “SPECTRONIC 70”
REACTIVOS
 3 gotas de rojo fenol
 5 ml de citrato de amonio
 4 gotas de hidróxido de amonio
 1 ml de hidroxilamina
 5 ml de di tizona extractora
 5 ml ditizona estándar
 10 ml de solución buffer ph 3.4
 7 ml de solución amonio cianurada
Fundamento del método

Se mezcla una muestra acidulada que contenga cantidades del orden de

microgramos de plomo con solución reductora amoniacal de citrato-cianuro y se
extrae con ditizona en cloroformo para formar con ditizonato de plomo de color rojo
cereza. Se mide fotométricamente el color de la solución de color mixta
 Ditizonato de metales

CÁLCULOS Y RESULTADOS
Arsénico

Tabla resumen de la muestra y resultados hallados por el método Vasac-

Sedivec en la cuantificación de Arsénico

MP Longitud de Absorbancia %de Arsénico ppm de

onda arsénico

200 mg de 540 nm 0.622 0.000624999% 6.24999

hígado

Curva de calibración y cálculos:

𝒚 = 𝟎. 𝟏𝟓𝒙(ecuación de la recta)
𝒙 = 𝒚/𝟎. 𝟏𝟓
[𝑨𝒓𝒔é𝒏𝒊𝒄𝒐] = (𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂)/𝟎. 𝟏𝟓

[𝑨𝒓𝒔é𝒏𝒊𝒄𝒐] = (𝟎. 𝟎𝟔𝟐𝟐)/𝟎. 𝟏𝟓

[𝑨𝒓𝒔é𝒏𝒊𝒄𝒐] =0.414666 ug/ml hay en 3mL(volmen del tubo de ensayo donde se
formó el complejo de color rojo.
Warsénico en 3mL=(0.414666 ug/ml)x 3mL=1.243998 ug los cuales estaban presentes en
la solución sulfúrica(200mg de hígado en 25ml) .

[𝑨𝒓𝒔é𝒏𝒊𝒄𝒐 𝒆𝒏 𝒉í𝒈𝒂𝒅𝒐] =Warsénico /W hígado =1.249998ug / 200mg= 0.00000624999mg

de arsénico /mg de hígado.
%de Arsénico en hígado= 0.000624999%
ppm de arsénico en hígado= 𝟔. 𝟐𝟒𝟗𝟗𝟗

Plomo

Tabla resumen de la muestra y resultados hallados por el método en la

cuantificación de Plomo

MP Longitud de Absorbancia Factor de %de Plomo ppm de

onda dilución Plomo

5mL de 520 nm 1.856 4 0.0007424 7.424

Sangre

𝒚 = 𝒙(ecuación de la recta)
𝒙=𝒚
[𝑷𝒍𝒐𝒎𝒐] = (𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂)𝒙 𝑭𝑫

[𝑷𝒍𝒐𝒎𝒐] = 𝟏. 𝟖𝟓𝟔 𝒙 𝟒
[𝑷𝒍𝒐𝒎𝒐] =7.424 ug/mL en la extracción final (5mL de ditizona)
wplomo=7.42ug/mL x 5mL=37.462 ug
[¨𝑃𝑙𝑜𝑚𝑜 𝑒𝑛 𝑠𝑎𝑛𝑔𝑟𝑒] = W Plomo/wsangre=37.462ug/5mL=7.424ug/mL =
%de plomo en sangre=0.0007424%
ppm de plomo en sangre= 𝟕. 𝟒𝟐𝟒 𝒑𝒑𝒎

[𝑷𝒍𝒐𝒎𝒐] = (𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂)𝒙 𝑭𝑫
Abs plomo = 1.856 x 4 = 7.424
7.424 ---- x ug/ml
0.100 ----- 0.1 ug/ml
x = 7.424 ug/ml
7.424 ug --- 100 ml sangre
x ug --- 1 ml sangre -> 0.0742 ug/ml = 7.424 ug/ ml de sangre

DISCUSIÓN

● Gracias al método Vasac-Sedivec en la cuantificación de Arsénico, se

determinó 0.0518 ug/mg del mismo en una muestra biológica de hígado
humano, la cual puede clasificarse dentro de un rango normal, ya que según
lo expuesto por Galetovic, A. afirma que lo máximo permitido es no mayor a
3,0 ug/mg , por lo antes citado podríamos inferir que el paciente no ha adquirido
derivados trivalentes (la más tóxica) ni derivados pentavalentes. 3
● Para la determinación de plomo, se llevó a cabo con una herramienta de Curva
de calibración, donde se halló una concentración de 7.424 ug/dl de una
muestra de sangre humana, la cual ha sido contrastada en estudios como los
de Rodríguez, A. confirmando valores normales de 10 microgramos por
decilitro de sangre (10 ug/dl), recomendado por la Organización Mundial de la
Salud “OMS”, siendo el “máximo permisible”, por lo que el paciente no ha
sufrido alguna intoxicación con plomo.4

CONCLUSIÓN
 ● Se determinó la cantidad de Plomo en la muestra de sangre por el método
siendo el resultado de esta la cantidad de 7.424 ug/ dl la cual se comparó
con la bibliografía .
● Se determinó la cantidad de arsénico en la muestra de hígado por el método
adecuado siendo el resultado de esta la cantidad de 0.00000624999mg de
arsénico /mg de hígado y esta cantidad se comparó con la bibliografía.

RECOMENDACIONES

● Tener cuidado al momento de separar las fases oleosas de las acuosas.

● Rotular adecuadamente los reactivos, ya que son numerosos.
● Portar la indumentaria necesaria de bioseguridad para protegernos de los
solventes puros y cancerígenos.

FUENTES DE INFORMACIÓN

1. CAROLINA RODRIGUEZ I. “INVESTIGACIÓN DE ARSÉNICO EN CABELLO

DE HABITANTES DE LA LOCALIDAD DE GENERAL PICO, LA PAMPA.”.
Argentina: 2012
2. LÓPEZ MARTíNEZ A. Marín Rivera I. DETERMINACIÓN DE PLOMO EN
SANGRE DE TRABAJADORES NO EXPUESTOS. Salud Pública, México,
Época V. Volumen II, N°. 1. [ citado el 6 de abril de 2019] disponible en :
http://saludpublica.mx/index.php/spm/article/viewFile/4433/4314
3. Galetovic, A. Arsénico en el agua de bebida: un problema de salud pública.
Revista Brasileira de Ciências Farmacêuticas. Brazilian Journal of
Pharmaceutical Sciences. vol. 39, n. 4, out./dez., 2003.
4. Rodríguez, A. Niveles de plomo en sangre y factores de riesgo asociados en
niños de 2 a 10 años en el barrio villa francisca, santo domingo, república
dominicana. Ciencia y Sociedad. Volumen XXXIII, Número 4.2008.