1.15943.

0025 Preparación de las muestras

La toma de muestra debe ser realizada por personal especializado.

1.15943.0100 Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología.
Todas las muestras deben estar rotuladas inequívocamente.
Deben usarse instrumentos adecuados para la toma de muestras y en la prepa-
1.15943.1000 ración, y deben seguirse las instrucciones del fabricante para la aplicación / el
empleo.

1.15943.5000 Preparación del reactivo

Para la realización de la tinción se puede utilizar una solución lista para el uso
Microscopía (art. 102414) o una solución de May-Grünwald preparada por separado (de art.
115943 y 101352).

Azul de metileno (C.I.52015) Solución de tinción de May-Grünwald

Para la preparación de aproximadamente 50 ml de solución se añaden:
para microscopía Certistain® Eosina A (amarillenta) (C.I.45380) Certistain® 0,5 g
Azul de metileno (C.I.52015) Certistain® 0,5 g
Producto sanitario para diagnóstico in vitro Agua destilada 100 ml
Mezclar, filtrar, filtrar en seco, lavar y secar el sedimento,
para tinción de frotis sanguíneos que contengan protozoos / parásitos sanguí- Disolver el sedimento en metanol 50 ml
neos y para material de examen bacteriológico
El presente colorante “Azul de metileno (C.I.52015) - para microscopía Certistain®” Solución tampón
es utilizado para el diagnóstico celular en la medicina humana y se empleo en Para la preparación de aproximadamente 1000 ml de solución se añaden y disuelven:
el examen bacteriológico y clínico-citológico de muestras de origen humano. Se
trata de un colorante seco que se utiliza para la preparación de una solución Tableta tampón, art. 111374 (pH 6,8) o art. 109468 1 tableta
de colorante, junto con otros materiales de diagnóstico in vitro pertenecientes a (pH 7,2) en función del resultado de tinción deseado
nuestra cartera, hace evaluables determinadas para el diagnóstico estructuras
de destino (mediante fijación, inclusión, tinción con la solución azul de metileno Agua destilada 1000 ml
arriba indicada, contratinción, montaje) en material de examen hematológico
humano, clínico-citológico, bacteriológico y histológico. Solución de tinción de Giemsa diluida
Para preparar aprox. 200 ml de solución se añaden juntos:
Reactivos
Art. 115943 Azur-eosina-azul de metileno según Giemsa en solución 10 ml
Azul de metileno (C.I.52015) 25 g, 100 g, 1 kg, 5 kg Solución tampón 190 ml
para microscopía Certistain®
Mezclar bien, dejar en reposo 10 minutos y filtrar en caso necesario
Color Index No.: 52015
Color Index Name: Basic Blue 9, Solvent blue 8
Las soluciones de colorante recién preparadas deben filtrarse antes de su uso.

Tinciones hematológicas Técnica

Principio Tinción en el banco de tinción
Aquí los núcleos celulares son teñidos principalmente de color rojo a violeta, Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos
un efecto que está basado en la interacción molecular entre el colorante Eosina indicados.
A y un complejo Azur B-ADN/Azul de metileno. Los dos colorantes forman un
complejo Eosina A - Azur B-ADN/Azul de metileno, dependiendo la intensidad de Portaobjetos con frotis secado al aire
la tinción resultante del contenido de Azur B/Azul de metileno y de la relación de Solución de tinción de (aprox. 10 cubrir completa- 3 minutos
Azur B/Azul de metileno respecto a la Eosina A. May-Grünwald gotas) mente
El resultado de la tinción puede ser influenciado además por factores como la
fijación, los tiempos de tinción, el valor pH de las soluciones y las sustancias Agua destilada la misma añadir y mezclar 1 minuto
tampón. cantidad
La coloración hematológica se utiliza para la representación de parásitos sanguí- decantar, sin lavar
neos / protozoos. Los núcleos de los parásitos sanguíneos / protozoos aparecen Solución de tinción de 10 gotas añadir 5 - 60
rojos bajo el microscopio. Giemsa diluida minutos*
Solución tampón enjuagar
Material de las muestras
Secar al aire (p. ej. durante la noche o a 50 °C en el armario de secado)
frotis de sangre o médula ósea secados al aire, así como material clínico de la
citología, como sedimento urinario, esputo, frotis tomados de punciones aspirati- * primeramente probar con 10 - 15 minutos
vas con aguja fina (PAAF/FNAB), líquidos de lavado, imprints
Para el almacenamiento de preparados de frotis durante varios meses se
Reactivos recomienda el montaje con medios de montaje anhidros (p. ej. Neo-Mount®,
Entellan® Nuevo o DPX nuevo) y cubreobjetos. Sin montaje, la tinción tendrá una
Necesario además para tinciones hematológicas: estabilidad de unos 3 días; si se cubre con aceite de inmersión, la estabilidad
Art. 109468 Tabletas tampón pH 7,2 100 tabs será de sólo unas horas.
para preparación de solución tampón Los preparados citológicos pueden ser montados y almacenados con medios de
según WEISE para tinción de frotis sanguíneos montaje anhidros (p. ej. Entellan® Nuevo o Neo-Mount®) y cubreobjetos después
o de la deshidratación (series de alcohol ascendentes) y la clarificación con xileno
Art. 111374 Tabletas tampón pH 6,8 100 tabs o Neo-Clear®.
para preparación de solución tampón Para el análisis de preparados teñidos con un aumento microscópico >40x se
según WEISE para tinción de frotis sanguíneos recomienda el uso de aceite de inmersión.
Art. 106009 Metanol para análisis EMSURE® 1 l, 2,5 l, 5 l
ACS,ISO,Reag. Ph Eur Resultado
Art. 109204 Azur-eosina-azul de metileno según Giemsa 100 ml, 500 ml, Solución tampón Solución tampón
en solución 1 l, 2,5 l pH 6,8 pH 7,2
para microscopía Núcleos celulares rojo a violeta violeta
Art. 115935 Eosina A (amarillenta) (C.I.45380) 25 g, 100 g Linfocitos plasma azul plasma azul
para microscopía Certistain®
Monocitos plasma azul grisáceo plasma azul girsáceo
Alternativamente: Granulositos neutrófilos gránulos violeta claro gránulos violeta claro
Art. 101352 May-Grünwald eosina-azul de metileno 25 g, 100 g Granulositos eosinófilos gránulos rojo ladrillo gránulos pardo rojizo
para microscopía Granulositos basófilos gránulos violeta gránulos violeta
Art. 101424 Eosina-azul de metileno en solución según 100 ml, 500 ml, oscuro oscuro
May-Grünwald modificada 1 l, 2,5 l Trombocitos violeta violeta
para microscopía
Eritrocitos rojizo rojizo-pardusco
Parásitos sanguíneos núcleos celulares núcleos celulares
rojo claro rojo claro
Tinciones bacteriológicas Cortes histológicos
Desparafinar de forma habitual los cortes y rehidratar en serie descendente de
Principio alcohol. Para pruebas fijadas con formalina se suprime el tratamiento previo con
Las micobacterias presentan una elevada proporción de cera y lípidos en la Sputofluol®.
pared celular, por lo que absorben los colorantes sólo de forma muy lenta. Por
consiguiente, el método más eficaz de tinción es la tinción en caliente según Fijación
Ziehl-Neelsen. Este procedimiento consiste en aplicar al preparado una solución La fijación se realiza sobre la llama del mechero de Bunsen (2 a 3 veces, evitan-
de carbolfucsina (fucsina fenicada) y calentarlo hasta que se forme vapor. Este do una acción excesiva del calor).
calentamiento acelera la absorción del colorante de fucsina y al mismo tiempo la El material también puede ser fijado durante 20 minutos a una temperatura de
formación del complejo micolato-fucsina en la pared celular. 100 a 110 °C en un armario de secado o encima de una placa calefactora.
Una vez absorbido el colorante de fucsina por las micobacterias, será práctica- Si se aplican temperaturas más elevadas o un calentamiento más prolongado,
mente imposible conseguir la descoloración, incluso a través de un tratamiento deberá esperarse un empeoramiento de la capacidad de tinción.
intensivo con una solución descolorante como p. ej. ácido clorhídrico-alcohol. Por
eso, en lo que se refiere a sus propiedades de tinción, las micobacterias son de- Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología.
nominadas como resistentes a ácidos y alcohol, y en los preparados microscópi- Todas las muestras deben estar rotuladas inequívocamente.
cos aparecen teñidas de rojo. Todos los microorganismos no resistentes a ácidos Deben usarse instrumentos adecuados para la toma de muestras y en la prepa-
son teñidos de acuerdo con el colorante de la contratinción. En este manual de ración, y deben seguirse las instrucciones del fabricante para la aplicación / el
instrucciones se contratiñe de la forma correspondiente con azul de metileno. empleo.
A través de un tratamiento previo de los preparados con Sputofluol® se liberan
las bacterias del esputo viscoso y material celular circundante. El Sputofluol®
tiene además un efecto desinfectante por el cual se consigue la eliminación de Preparación del reactivo
microorganismos. Para la realización de la tinción se puede utilizar una solución lista para el uso
(art. 101287) o una solución de azul de metileno según Löffler preparada por
Material de las muestras separado (de art. 115943).
Frotis de material bacteriológico secados al aire, termofijados y sometidos a un Etanol 95 %
tratamiento previo con Sputofluol® como esputos, frotis tomados de punciones
aspirativas con aguja fina (PAAF/FNAB), soluciones de lavado, imprints, efusio- Para la preparación de aproximadamente 100 ml de solución se añaden:
nes, pus, exsudados, cultivos líquidos y sólidos
Cortes de tejido fijado en formalina e incluido en parafina (cortes de parafina de Etanol 95 g
3 - 4 µm de espesor) Agua destilada 5 ml
mezclar
Reactivos
Necesario además para tinciones bacteriológicas:
Solución de potasio hidróxido 0,1 %, acuosa
Art. 100327 Ácido clorhídrico-alcohol 1 l, 5 l
Para la preparación de aproximadamente 1000 ml de solución se añaden:
para microscopía
Art. 100974 Etanol desnaturalizado con aprox. 1 % de 1 l, 2,5 l Potasio hidróxido en lentejas 1g
metiletilcetona
para análisis EMSURE® Agua destilada 1000 ml
Art. 105033 Potasio hidróxido en lentejas 500 g, 1 kg, 5 kg disolver revolviendo
p.a. EMSURE®
Art. 109215 Fucsina fenicada en solución según 100 ml, 500 ml, Solución de azul de metileno según Löffler
Ziehl-Neelsen 2,5 l Para la preparación de aproximadamente 100 ml de solución se añaden:
para microscopía
Azul de metileno (C.I.52015) Certistain® 0,3 g
Alternativamente:
Art. 101287 Azul de metileno en solución según Löffler 100 ml, 500 ml, Etanol 95 % 30 ml
para microscopía 2,5 l Solución de potasio hidróxido 0,1 %, acuosa añadir a 100 ml
En lugar de la combinación de los reactivos sueltos puede utilizarse también el mezclar
kit de tinción 1.00497.0001:
La solución de colorante recién preparada debe filtrarse antes de su uso.
Art. 1.00497.0001
Tb-color modificado 1 set
Kit de tinción para la identificación de micobacterias (AFB) Técnica
mediante tinción en caliente Tinción en el banco de tinción
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos
Preparación des muestras indicados.
La toma de muestra debe ser realizada por personal especializado. Portaobjetos con frotis fijado
Esputo Fucsina fenicada en cubrir completamente, teñir du-
Para liberar micobacterias de mucosidad y conjuntos celulares se debería tratar solución según Ziehl- calentar 3 veces con cuidado por abajo rante
el esputo previamente con Sputofluol®. En esto, el principio activo hipoclorita Neelsen sirviéndose del mechero de Bunsen 5 minutos
disuelve el material orgánico de forma oxidativa, liberando de esta manera las hasta que se produzca vapor en total
micobacterias con suavidad. ¡La solución de tinción no debe hervir!
Preparación del reactivo: Preparación de la solución de Sputofluol® 15 %
Agua corriente enjuagar hasta que ya no se despren-
Para preparar aprox. 100 ml de solución se añaden juntos: dan nubes de color
Sputofluol® 15 ml Ácido clorhídrico- cubrir completamente y dejar actuar 15 - 30
alcohol segundos*
Agua destilada 85 ml
Agua corriente enjuagar inmediatamente
Solución de azul contratinción, cubrir completamente y 30
Preparación de muestra en tubo de centrífuga:
de metileno según dejar actuar segundos**
Muestra 1 parte Löffler
(mínimo 2 ml) Agua corriente enjuagar cuidosamente
Solución de Sputofluol® (al 15 % en agua destilada) 3 partes Secar al aire (p. ej. durante la noche o a 50°C en el armario de secado)***
Agitar vigorosamente 10 minutos
* en dependencia del espesor del material
Centrifugar a 3000 - 4800 R/min 20 minutos ** o 1 minuto con Azul de metileno en solución según Löffler diluido
Decantar el líquido excedente (dilución: 1:10 (1+9) con agua destilada)
Extender el sedimento *** Los preparados histológicos no son secados al aire, mas pueden ser montados
Secar al aire y almacenados con medios de montaje anhidros (p. ej. Neo-Mount®, Entellan®,
DPX nuevo o Entellan® Nuevo) y cubreobjetos después de la deshidratación
(series de alcohol ascendentes) y la clarificación con xileno o Neo-Clear®.
Líquidos extraídos por punción, lavados, sedimentos
Extender las muestras en el portaobjetos después de pasos convenientes de
enriquecimiento, y dejarlas secar al aire.
Para el almacenamiento de preparados bacteriológicos durante varios meses
se recomienda el montaje con medios de montaje anhidros (p. ej. Neo-Mount®,
Entellan®, DPX nuevo o Entellan® Nuevo) y cubreobjetos. Para ello, los prepa-
rados han de ser secados con gran esmero. Sin montaje, la tinción tendrá una
estabilidad de unos 3 días ; si se cubre con aceite de inmersión, la estabilidad
será de sólo unas horas.
Para el análisis de preparados teñidos con un aumento microscópico >40x se
recomienda el uso de aceite de inmersión.
Resultado
Micobacterias rojo
Fondo azul
Evaluación
Un hallazgo positivo significa que “hay bacilos acidorresistentes“, y un hallazgo
negativo significa que “no hay bacilos acidorresistentes“. No se puede distinguir
si se trata de Mycobacterium tuberculosis o de otro género de micobacteria.
Tampoco se puede verificar la vitalidad de las bacterias (activas, inactivas).
Si se encuentran micobacterias, deberían efectuarse más pruebas en laborato-
rios especiales.
Localización de errores
Fijación
Es importante realizar una termofijación suficiente por medio de un mechero
Bunsen o en un armario de calor para eliminar el potencial infeccioso de los
preparados y evitar que las bacterias sigan creciendo.
Si se aplican temperaturas más elevadas o un calentamiento más prolongado,
deberá esperarse un empeoramiento de la capacidad de tinción.
Ninguna tinción de micobacterias
El paso crítico en la tinción de micobacterias es el paso de descoloración, que
puede ser influenciado por el espesor del frotis.
Por lo demás, una solución recién preparada de ácido clorhídrico-alcohol es
muy reactiva, por lo que el resultado debería ser evaluado con gran esmero.
Durante la descoloración, los tiempos indicados aquí deberían ser respetados
con máxima exactitud, ya que de lo contrario se podrían presentar resultados
incorrectamente negativos.
Notas técnicas
El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un laboratorio de
diagnóstico médico.
Si se utilizan procesadores de histología y aparatos automáticos de tinción,
deberán tenerse en cuenta las instrucciones de operación del fabricante, tanto
del aparato como del software.
Las soluciones de coloranterecién preparadas deben filtrarse antes de su uso.
Eliminar el aceite de inmersión en exceso antes de archivar.
Diagnóstico
Los diagnósticos deberán ser establecidos solamente por personas autorizadas
y cualificadas.
Deberán emplearse terminologías vigentes.
Deberán elegirse y realizarse ensayos ulteriores según métodos reconocidos.
Cada aplicación debería implicar controles adecuados para descartar resultados
erróneos.
Almacenamiento
Guardar Azul de metileno (C.I.52015) - para microscopía Certistain® de +5 °C a
+30 °C.
Estabilidad
Azul de metileno (C.I.52015) - para microscopía Certistain® se puede utilizar
hasta la fecha de caducidad indicada.
Después de abrir el frasco por primera vez, el contenido almacenado entre +5 °C y
+30 °C es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada.
Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.
Notas sobre el empleo
Solamente para uso profesional.
Para evitar errores, la aplicación debería ser realizada por personal especializado.
Deben cumplirse las directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y ase-
guramiento de la calidad.
Deben emplearse microscopios equipados de acuerdo con el estándar.
Protección contra infecciones
Debe observarse a toda costa una protección eficaz contra infecciones de acuer-
do con las directivas de laboratorio.
Indicaciones para la eliminación de residuos
El envase debe ser eliminado de acuerdo con las directivas válidas de elimina-
ción de residuos.
Las soluciones usadas y las soluciones caducadas deben eliminarse como
desecho peligroso, debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de
residuos. Podrá pedirse información sobre los procedimientos de eliminación
bajo el Quick Link “Hints for Disposal of Microscopy Products” en
www.microscopy-products.com. Dentro de la UE tiene validez el REGLAMENTO
(CE) Nº 1272/2008 sobre la clasificación, el etiquetado y el envasado de sustan-
cias y mezclas, por el que se modifican y derogan las Directivas 67/548/CEE y
1999/45/CE y se modifica el Reglamento (CE) Nº 1907/2006.
Reactivos auxiliares
Art. 100327 Ácido clorhídrico-alcohol para microscopía 1 l, 5 l
Art. 100497 Tb-color modificado 1 set
Kit de tinción para la identificación de mico-
bacterias (AFB) mediante tinción en caliente
Art. 100579 DPX nuevo 500 ml
medio de montaje anhidro
para microscopía
Art. 100974 Etanol desnaturalizado con aprox. 1 % de 1 l, 2,5 l
metiletilcetona
para análisis EMSURE®
Art. 101287 Azul de metileno en solución según Löffler 100 ml, 500 ml,
para microscopía 2,5 l
Art. 101352 May-Grünwald eosina-azul de metileno 25 g, 100 g
para microscopía
Art. 101424 Eosina-azul de metileno en solución según 100 ml, 500 ml,
May-Grünwald modificada 1 l, 2,5 l
para microscopía
Art. 104699 Aceite de inmersión frasco gotero de
para microscopía 100 ml, 100 ml,
500 ml
Art. 105033 Potasio hidróxido en lentejas 500 g, 1 kg, 5 kg
p.a. EMSURE®
Art. 105387 Eosina-azul de metileno en solución según 500 ml
Leishman modificada
para microscopía
Art. 106009 Metanol para análisis EMSURE® 1 l, 2,5 l, 5 l
ACS,ISO,Reag. Ph Eur
Art. 107960 Entellan® 500 ml
medio de montaje rápido
para microscopía
Art. 107961 Entellan® Nuevo 100 ml, 500 ml,
medio de montaje rápido 1l
para microscopía
Art. 108000 Sputofluol® para microbiología y microscopía 1 l
Art. 108298 Xileno (mezcla de isómeros) 4l
para histología
Art. 109016 Neo-Mount® frasco gotero de
medio de montaje anhidro 100 ml, 500 ml
para microscopía
Art. 109204 Azur-eosina-azul de metileno según Giemsa 100 ml, 500 ml,
en solución 1 l, 2,5 l
para microscopía
Art. 109215 Fucsina fenicada en solución según 100 ml, 500 ml,
Ziehl-Neelsen 2,5 l
para microscopía
Art. 109468 Tabletas tampón pH 7,2 100 tabs
para preparación de solución tampón
según WEISE para tinción de frotis sanguíneos
Art. 109843 Neo-Clear® (sustituto de xileno) 5l
para microscopía
Art. 111374 Tabletas tampón pH 6,8 100 tabs
para preparación de solución tampón
según WEISE para tinción de frotis sanguíneos
Art. 115935 Eosina A (amarillenta) (C.I.45380) 25 g, 100 g
para microscopía Certistain®
Clasificación de substancias peligrosas
Art. 115943
Tener en cuenta la clasificación de substancias peligrosas en la etiqueta y las
indicaciones en la ficha de datos de seguridad.
La ficha de seguridad está disponible en el sitio web y a solicitud.
Componentes principales del producto
Art. 115943
C.I. 52015
C16H18ClN3S x 2 - 3 H2O
M = 319,86 g/mol (x 3 H2O)
Literatura
1. Löffler, H., Rastetter, J., Haferlach, T, Atlas der klinischen Hämatologie, 2004,
Springer-Verlag Berlin Heidelberg
2. Routine Cytological Staining Techniques: Theoretical Background and Practice,
Mathilde E. Boon, Johanna S. Drijver, 1986, Elsevier Science Publishing
Company
3. Romeis - Mikroskopische Technik, Editors: Mulisch, Maria, Welsch, Ulrich,
2015, Springer-Verlag Berlin Heidelberg
4. Theory and Practice of Histological Techniques, John D Bancroft and Marilyn
Gamble, 6th Edition
5. Theory and application of Microbiological Assay, Hewitt, W. and Vincent, S.,
1989, Academic Press
6. Conn’s Biological Stains: A Handbook of Dyes, Stains and Fluorochromes for
Use in Biology and Medicine, 10th Edition, (ed. Horobin, R.W. and Kiernan,
J.A). Bios, 2002

Consult instructions Manufacturer Catalog number Batch code

for use

Caution, consult Use by Temperature

accompanying documents YYYY-MM-DD limitation

Status: 2017-08-08

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Tel. +49(0)6151 72-2440
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