LABORATORIO DE BIOLOGIA DEL UNIVERSIDAD DE CHILE

DESARROLLO.
Facultad de Ciencias
Dra. Verónica Palma
vpalma@uchile.cl

•Desarrollo y Diferenciación Celular en

vertebrados
• Desarrollo preimplantacional en mamíferos

2010
Plan corporal básico en embriones de vertebrados

Concepto de
Bauplan
Embriología: Estudio descriptivo del desarrollo embrionario de
todos los organismos multicelulares

Biología del desarrollo:

Incluye estudio de cambios
Postembrionarios, tales como
Crecimiento, metamorfosis
Regeneración, envejecimiento
 Conceptos básicos:

1. Diferenciación: generación de la diversidad celular

2. Morfogénesis: generación de la forma de manera ordenada

3. Crecimiento: control de la división celular

4. Reproducción: generación de la linea germinal

5. Evolución: cambios heredables en el desarrollo generan diversidad

6. Integración con el ambiente: influencias no genéticas en el desarrollo

Enfoques para el estudio del BD:
•Anatómicos
•Experimentales
•Genéticos

La tradición anatómica.
•Embriología comparada
•Embriología evolutiva
•Teratología
•Modelamiento
 Reseña Histórica

Aristóteles (384-322ac). Historia Animalium

-El desarrollo comienza después que “algo” (secreciones) del macho
y la hembra interactúan.
-El semen interactúa sobre la sust. femenina haciendo que la potencia
del individuo (embrión) se actualice (desarrollo).
Sangre sustancia; Semen materia activa
-Clasificación entre ovíparos, vivíparos
 Reseña Histórica
Fabricio (1533?-1619).
Universidad de Padua.
De Formatione Ovi et Pulli (1600)

Descripción del desarrollo del pollo

(sin magnificación)
 Reseña Histórica
William Harvey (1578-1657).
Exercitationes de Generaione Animalum (1651)

Estudiante de Fabricio,
lo corrige al mostrar que el embrión
proviene del blastodermo
Rechaza a Aristóteles:
igual contribución de macho y hembra
 Reseña Histórica
Preformismo vs Epigénesis (sXVII- sXVIII)

Todo lo que un adulto tiene, proviene

de partículas muy pequeñas (invisibles) presentes
en el semen o huevo, las que al crecer originan el embrión
1667- Leeuwenhoek, observó espermios (animalículos)
en el semen.
Melabranche (1672)
Von Haller (1767) Espermistas vs Ovistas
Bonnet (1770)
Caspar Friederich Wolff (1759). Observación
temprana de embriones de pollono encontró órganos.
Si encontró la transformación de estructuras del
embrión en órganos.
Las estructuras y órganos surgen de novo en cada generación,
existiría una “fuerza vital” que organiza la embriogénesis.
HOY
Genética

Biología Genómica
Molecular Biología
del
Desarrollo

Biología Evolución
Celular
 Biología de la Diferenciación Celular
Concepto y mecanismos de diferenciación, especificación y determinación
celular

1. Conceptos: totipotencia, pluripotencia, unipotencia

2. Especificación celular.

 Especificación autónoma

 Especificación condicional

 Especificación sincicial

3. Diferenciación celular

4. Compromiso celular

5. Determinación celular

6. Establecimiento de patrones (patterning)

 Grupos animales utilizados en BD Dictyostelium
(Protista, amoebozoa)
Invertebrados: Caenorhabditis elegans (nemátodo)
Invertebrados:

moluscos

anélidos

equinodermos

Drosophila melanogaster
(Insecta, mosca de la fruta)
Vertebrados: Gallus gallus (pollo)

Danio rerio (pez cebra)

Mus musculus (ratón)

Xenopus laevis (rana africana)

 Conceptos básicos

Totipotente (totus: entero, completo)

 Oocito fertilizado o cigoto

 Potencial de generar todos los tejidos y células que forman el embrión

mediante procesos de división y especialización celular

Pluripotente (plures: varios, muchos)

 Células que originan células derivadas de las tres capas germinales

embrionarias (ectodermo, mesodermo, endodermo)

Unipotente (unus: uno)

 Células capaces de diferenciarse en un solo linaje

¿Cuáles son las preguntas importantes que un Biólogo
del Desarrollo debería formular?
¿Cuándo pierden su totipotencia las células individuales del embrión en
desarrollo?

¿En qué momento del desarrollo las células individuales que formarán,
por ejemplo, el corazón, se distinguen del resto?

¿Cuándo adquieren el potencial restringido de desarrollo los

descendientes del oocito fertilizado?

Esta determinación: ¿es un proceso irreversible?

¿Las células especializadas que formarán los órganos provienen de una

única célula o de un grupo de ellas?

¿Existen “decisiones” que dirigen a las células embrionarias tempranas

por diferentes vías?

Los límites del crecimiento y la forma de las distintas partes del cuerpo:
¿cómo se establecen?
Diferenciación
 Desarrollo de tipos celulares especializados
 Proceso por el que los genes se expresan selectivamente y la acción de los
productos génicos da lugar a una célula con fenotipo especializado
 Cambios en la morfología, bioquímica, metabolismo y función celulares

Compromiso (commitment)
 “Decisión” de una célula de entrar en el proceso de diferenciación a un
cierto destino
 Fases:
Especificación: la célula es capaz de diferenciarse
autónomamente en un medio ambiente neutral

Determinación: es capaz de diferenciarse autónomamente

incluso si se le coloca en otra región del embrión
DIFERENCIACIÓN ESPACIAL:
GENERACIÓN DE PATRONES (patterning)
 Información posicional:
las células reconocen su posición y se diferencian de
acuerdo a esta
BIOLOGÍA DEL DESARROLLO:
DIFERENCIACIÓN EN EL TIEMPO Y
EN EL ESPACIO
 Algunos tipos celulares diferenciados
Tipo celular Producto Función especializada

Queratinocito Queratina Protección (abrasión, desecación)

Eritrocito Hemoglobina Transporte de oxígeno
C. del cristalino Cristalinas Transmisión de la luz
Linfocitos B Inmunoglobulinas Síntesis de anticuerpos
Linfocitos T Linfoquinas Destrucción células extrañas
Melanocitos Melanina Producción de pigmento
C. islotes pancreáticos Insulina Metabolismo carbohidratos
C. de Leydig Testosterona Caracteres sexuales masculino
Condrocito Condroitín-S, colágeno Tendones y ligamentos
Osteoblastos Matriz ósea Soporte esquelético
Miocitos Actina y misosina Contracción muscular
Hepatocitos Albúmina, enzimas Proteínas séricas y enzimas
Neuronas Neurotransmisores Transmisión impulso eléctrico
 Tipos de especificación celular
1. Especificación autónoma (carácterístico de la mayoría
de los invertebrados)
 Desarrollo en mosaico
 Determinantes morfogenéticos

2. Especificación condicional (vertebrados, algunos

invertebrados)
 Interacción con células vecinas
 Regulación: Desarrollo regulado
 Gradientes de morfógenos
 Campos morfogenéticos

3. Especificación sincitial (mayoría de clases de

insectos)
 Interacciones entre distintas áreas de una célula
 1.Especificación autónoma (desarrollo en
mosaico)

Figure 3.7. Autonomous specification (mosaic

development). (A-C) Differentiation of
trochoblast (ciliated) cells of the mollusc
Patella. (A) 16-cell stage seen from the side;
the presumptive trochoblast cells are shaded.
(B) 48-cell stage. (C) Ciliated larval stage,
seen from the animal pole. (D-G)
Differentiation of a Patella trochoblast cell
isolated from the 16-cell stage and cultured in
vitro. (E, F)Results of the first and second
divisions in culture. (G) Ciliated products of
(F). Even in isolated culture, the cells divide
and become ciliated at the correct time.
(Gilbert, 2003).

Estadío de Estadío de Larva

16 células 48 células

Modelo mosaico: los determinantes se distribuyen

asimétricamente en el cigoto
1.Especificación autónoma (desarrollo en
mosaico) en embriones de tunicado

Figure 3.8. Autonomous specification

in the early tunicate embryo. When the
four blastomere pairs of the 8-cell
embryo are dissociated, each forms
structures that it would have formed if
it had remained in the embryo. (The
fate map of the tunicate shows that
the left and right sides produce
identical cell lineages.) (Gilbert, 2003).
Tipos de especificación celular

2. Especificación condicional

 Interacción con células vecinas: concepto

de inducción

 Regulación: Desarrollo
regulativo/regulado

 Regeneración: Gradientes de morfógenos

 Campos morfogenéticos
2. Especificación condicional

Figure 3.11. Conditional specification.

(A) What a cell becomes depends
upon its position in the embryo. Its fate
is determined by interactions with
neighboring cells. (B) If cells are
removed from the embryo, the
remaining cells can regulate and
compensate for the missing part.
(Gilbert, 2003).
Mangold y
Spemann:
Inducción- 1
célula (o
tejido) influye
sobre el
desarrollo de
otra célula (o
tejido)
 Especificación condicional en el armadillo de
nueve bandas (Dasypus novemcinctus)

Figure 3.12. In the early developmental stages of many vertebrates, the separation of the embryonic cells into two parts can create twins. This phenomenon occurs
sporadically in humans. However, in the nine-banded armadillo, Dasypus novemcinctus, the original embryo always splits into four separate groups of cells, each of
which forms its own embryo. (Gilbert, 2003).
Tipos de especificación celular

3. Especificación sincicial

 Interacciones entre distintas áreas de una

célula
Especificación sincicial en D. melanogaster

Figure 3.25. Syncytial specification in the fruit fly

Drosophila melanogaster. Anterior-posterior
specification originates from gradients within the egg
cell. Bicoid mRNA is stabilized in the most anterior
portion of the egg, while Nanos mRNA is tethered to the
posterior end. (The anterior can be recognized by the
micropyle on the shell; this structure permits sperm to
enter.) When the egg is laid and fertilized, these two
mRNAs are translated into proteins. The Bicoid protein
forms a gradient that is highest at the anterior end, and
the Nanos protein forms a gradient that is highest at the
posterior end. These two proteins form a coordinate
system based on their ratios. Each position along the
axis is thus distinguished from any other position. When
nuclear division occurs, each nucleus is given its
positional information by the ratio of these proteins. The
proteins forming these gradients will activate the
transcription of the genes that specify the segmental
identities of the larva and the adult fly. (Gilbert, 2003).
 Etapas del Desarrollo

1. (Gametogenesis) Fecundación
2. Divisiones celulares ( clivaje, blástula)
3. Movimientos celulares y formación de
capas germinales (gastrulación)
4. Aumento y diferenciación de las células
5. Organogénesis
Fecundación
Primeras etapas del desarrollo embrionario. (Segmentación, Compactación,
Blastulación, Implantación, Gastrulación, Neurulación)
Fecundación
En mamíferos se formará el blastocisto
 Clivaje en el reino animal

Clivaje:no hay aumento de Volumen

Carácterísticas distinctivas de clivaje

en Mamíferos:
-Lento
-Plano de orientación
-Asincrónico
-Genoma se activa temprano
 División rotacional en ratón

Figure 21-84. Scanning

electron micrographs of the
early mouse embryo. The
zona pellucida has been
removed. (A) Two-cell stage.
(B) Four-cell stage (a polar
body is visible in addition to the
four blastomeres see Figure
20-22). (C) Eight-to-sixteen-cell
morula compaction occurring.
(D) Blastocyst.
Mouse early Development:
Sequence of events:
Ovulation: 8-12 eggs, eggs complete meiosis I
Fertilization: in oviduct
Cleavage: in oviduct
Compaction: at 8 cell stage
First cell polarization: 16 cells, called morula
Inner cell mass= pluripotent (ES cells)
Trophectoderm
Blastocyst: day 3.5, now in uterus, implantation
Gastrulation: day 6.5, primitive streak, node (gut outside)
Turning: day 8.5 to 9.5
 Fertilización y terminación de la meiosis

Figure 14.42. Fertilization and completion of meiosis (A) Fertilization induces the transition from metaphase II to anaphase II, leading to completion of oocyte
meiosis and emission of a second polar body (which usually degenerates). The sperm nucleus decondenses, so the fertilized egg (zygote) contains two haploid nuclei
(male and female pronuclei). In mammals, the pronuclei replicate DNA as they migrate toward each other. They then initiate mitosis, with male and female
chromosomes aligning on a common spindle. Completion of mitosis and cytokinesis thus gives rise to a two-cell embryo, with each cell containing a diploid genome.
(Cooper, 2000).
Clivaje
Segmentación Estadío de 2 células Estadío de 4 células Estadío de 8 células

Compactación
Blastulación
Implantación
Gastrulación
Neurulación
Diferenciación

Compactación Mórula Blastocisto

Figure 11.22. The cleavage of a single mouse embryo in vitro. (A) 2-cell stage. (B)
4-cell stage. (C) Early 8-cell stage. (D) Compacted 8-cell stage. (E) Morula. (F)
Blastocyst. (Gilbert, 2003).
3.5dpc
 Formación del blastocisto

Masa celular interna

Blastocele

Cavitación Trofoblasto
Segmentación
Compactación
Blastulación
Implantación
Gastrulación
Neurulación
Diferenciación

Figure 21-83. The early stages of mouse development. The zona pellucida is a jelly capsule from which
the embryo escapes after a few days, allowing it to implant in the wall of the uterus. (Alberts et al., 2002).

Trofoectodermo o trofoblasto Masa celular interna

Núcleo interno de células
 Capa externa de células provenientes de la
Genera todos los tejidos embrionarios y sus
división de las células de la capa exterior de la
asociados saco vitelino, alantoides y amnios (tejidos
mórula
extraembrionarios)
 Genera las células trofoblásticas del corion Libera FGF-4 para ayudar a la embriogénesis y regular
la proliferación y diferenciación del trofoectodermo
(anexos embrionarios)
 Liberación del blastocisto
de la zona pelúcida

Figure 11.25. Mouse

blastocyst hatching from
the zona pellucida. (Gilbert,
2003).
 Escape de la zona pelúcida
A blastocyst starting to hatch from its shell - lower right of
photo
After hatching, the embryo can implant in the uterine lining
Photo taken a few minutes prior to embryo transfer
Hatching mouse blastocyst stained with fluorescent dye
Embryo was cultured on human tubal cells (coculture)
Red-stained cells (trophectoderm) - would become
placenta
Blue-stained cells are inner cell mass - fetal cells 6
"hatching" blastocyst
It is almost completely hatched out of its shell, or zona
pellucida (zona is at lower left of image)
After the blastocyst hatches, it begins to invade into the
uterine lining to "implant"
The dark areas at the top and lower right of this image are
shadows in the drop of culture media
Implantación del blastocisto
de mamífero

Figure 11.24. Implantation of the

mammalian blastocyst into the uterus.
(A) Mouse blastocysts entering the
uterus. (B) Initial implantation of the
blastocyst in a rhesus monkey.
(Gilbert., 2003).

Trofoblasto
 Na+/K+ ATPasa: entrada de Na+ y H2O en el blastocele
Estripsina: lisis de la matriz fibrilar de la membrana pelúcida
 Integrinas: unión a fibras de colágeno, laminina y fibronectina del endometrio
 Sintetiza heparán-sulfato
 Sintetiza colagenasa, estromelisina y activador del plasminógeno

Endometrio
 Fibras de colágeno, laminina, fibronectina y ácido hialurónico
 Receptores de heparán-sulfato
 Formación de tejidos en el embrión humano de 7-11 días

Figure 11.30. Human

embryo and placenta after
40 days of gestation. The
embryo lies within the
amnion, and its blood
vessels can be seen
extending into the chorionic
villi. The small sphere to the
right of the embryo is the
yolk sac. (Gilbert, 2003).

Figure 11.27. Tissue formation in the human embryo between days 7 and 11. (A, B) Human blastocyst immediately prior to gastrulation. The inner cell mass delaminates hypoblast cells that
line the blastocoel, forming the extraembryonic endoderm of the primitive yolk sac and a two-layered (epiblast and hypoblast) blastodisc similar to that seen in avian embryos. The trophoblast
in some mammals can be divided into the polar trophoblast, which covers the inner cell mass, and the mural trophoblast, which does not. The trophoblast divides into the cytotrophoblast,
which will form the villi, and the syncytiotrophoblast, which will ingress into the uterine tissue. (C) Meanwhile, the epiblast splits into the amnionic ectoderm (which encircles the amnionic
cavity) and the embryonic epiblast. The adult mammal forms from the cells of the embryonic epiblast. (D) The extraembryonic endoderm forms the yolk sac. (Gilbert, 2003)..
Y en humanos…
 Early Human Cleavage
t=30 hrs to 2 days

8 Cell
2 Cell

16 cell 32 Cell
Blastocyst t=4 Days
Trophoblast will
Help form the
placenta
And other membranes,
but not the embryo

Inner
Cell Mass:
Pluripotent
cells that will
form the embryo
proper.
 humano

Resumiendo

Primeros estadíos del desarrollo

embrionario en mamíferos

Segmentación
Compactación
Blastulación
Implantación
Gastrulación
Neurulación

ratón
 Common features of gastrulation

1. Involves cell movement and reorganization

2. Gut (inner tube) forms from the archenteron, replacing the blastocoel
- deuterostomes ( vertebrates, sea urchins)
- protostomes ( “mouth first”, all other inverts)

3. The three primary germ layers are formed (endoderm, ectoderm and
mesoderm)

4. Form the two basic cell types

epithelia - endoderm and ectoderm
mesenchyme – mesoderm

Gastrulation involves a major epithelial/ mesenchymal transition

- mesoderm forms from an epithelial blastula
Gastrulación en mamíferos
 movimientos celulares en la
gastrulación de ratón

Embrión de ratón de 7 días (equivale a 16 días en humanos)

Figure 11.28. Amnion structure and cell movements during human gastrulation. (A) Human embryo and uterine connections at day 15 of
gestation. In the upper view, the embryo is cut sagittally through the midline; the lower view looks down upon the dorsal surface of the
embryo. (B) The movements of the epiblast cells through the primitive streak and Hensen's node and underneath the epiblast are
superimposed on the dorsal surface view. At days 14 and 15, the ingressing epiblast cells are thought to replace the hypoblast cells (which
contribute to the yolk sac lining), while at day 16, the ingressing cells fan out to form the mesodermal layer. (Gilbert., 2003).
Las tres capas germinales
Formación de la notocorda en el ratón

Embrión de ratón de 7 días

(equivale a 17 días en humanos)

Figure 11.29. Formation of the notochord in the mouse. (A) The ventral surface a the 7.5-day mouse embryo, seen by scanning electron microscopy. The presumptive
notochord cells are the small, ciliated cells in the midline that are flanked by the larger endodermal cells of the primitive gut. The node (with its ciliated cells) is seen at
the bottom. (B) The formation of the notochord by the dorsal infolding of the small, ciliated cells. (Gilbert., 2003).
Fecundación

Blastulación

Implantación

Gastrulación

Neurulación
 Formación del tubo
neural

Figure 12.3. Primary neurulation: neural tube

formation in the chick embryo. (A, 1) Cells of the
neural plate can be distinguished as elongated cells in
the dorsal region of the ectoderm. Folding begins as the
medial neural hinge point (MHP) cells anchor to
notochord and change their shape, while the
presumptive epidermal cells move towards the center.
(B, 2) The neural folds are elevated as presumptive
epidermis continues to move toward the dorsal midline.
(C, 3) Convergence of the neural folds occurs as the
dorsolateral hinge point (DLHP) cells become wedge-
shaped and epidermal cells push toward the center. (D,
4) The neural folds are brought into contact with one
another, and the neural crest cells link the neural tube
with the epidermis. The neural crest cells then disperse,
leaving the neural tube separate from the epidermis.
(Gilbert., 2003).

Figure 21-92. Formation of the neural tube. The scanning electron micrograph
shows a cross section through the trunk of a 2-day chick embryo. The neural tube is
about to close and pinch off from the ectoderm; at this stage it consists (in the chick)
of an epithelium that is only one cell thick. (Alberts et al., 2002).
BIOLOGÍA DEL DESARROLLO:
TRANSFORMACIÓN DE UN HUEVO FECUNDADO EN
UN ORGANISMO
Modes of cell type specification and their characteristics
I.Autonomous specification
Characteristic of most invertebrates.
Specification by differential acquisition of certain cytoplasmic molecules present in the egg.
Invariant cleavages produce the same lineages in each embryo of the species.
Blastomere fates are generally invariant.
Cell type specification precedes any large-scale embryonic cell migration.
Produces "mosaic" ("determinative") development: cells cannot change fate if a blastomere is lost.

II.Conditional specification
Characteristic of all vertebrates and few invertebrates.
Specification by interactions between cells.
Relative positions are important.
Variable cleavages produce no invariant fate assignments to cells.
Massive cell rearrangements and migrations precede or accompany specification.
Capacity for "regulative" development: allows cells to acquire different functions.

III.Syncytial specification
Characteristic of most insect classes.
Specification of body regions by interactions between cytoplasmic regions prior to cellularization of the
blastoderm.
Variable cleavage produces no rigid cell fates for particular nuclei.
After cellularization, conditional specification is most often seen.
Gilbert, 2003