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Objetivos
Introducción
α-(1,6)
α-(1,4)
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Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular
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Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular
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Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular
Una vez que el tejido ha sido sometido a digestión con KOH y precipitación con
etanol, el glucógeno es determinado espectrofotometricamente mediante la reacción con
antrona. La antrona es un derivado fenólico que forma complejo coloreado con todos los
carbohidratos, excepto alditoles y aminoazúcares. La reacción de los glúcidos con
antrona es muy sensible y tiene como fundamento la conversión en medio ácido de los
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Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular
CH2OH
O
O H2COH CHO
+
H
Glucosa 5-hidroximetilfurfural
OH
O
H2COH CHO
H+
+ Compuestos de color
verde-azul
5-hidroximetilfurfural Antrona
MATERIALES Y REACTIVOS:
Materiales
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Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular
PARTE EXPERIMENTAL
Extracción: (digestión alcalina y precipitación etanólica).
- En un tubo de centrífuga de 15 mL coloque 5 mL de KOH al 30%.
- Agregar entre 0,1 y 0,5 g de hígado o músculo.
- Colocar el tubo en baño de agua hirviente por 15 minutos agitando ocasionalmente.
- Dejar enfriar.
- Agregar 6 mL de etanol al 95% y mezclar durante 5 minutos. Centrifugar por 10
minutos.
- Descartar el sobrenadante y dejar drenar los tubos sobre el papel de filtro por unos
minutos.
Reactivo de antrona 2 mL 2 mL 2 mL
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Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular
- Leer la absorbancia de todos los tubos a una longitud de onda de 620 nm utilizando
el espectrofotómetro.
TUBO ABSORBANCIA
Estándar
Muestra
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Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular
Am x CSt
Cm =
ASt x alicuota de tejido utilizado
Donde:
Cm: concentración de la muestra
Am: absorbancia de la muestra
CSt: concentración del estándar
ASt: absorbancia del estándar
AUTOEVALUACIÓN:
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Prácticas de Bioquímica II Práctica: Extracción y cuantificación del glucógeno tisular
Bibliografía
Alemany, M; Font, S. Práctica de Bioquímica. Editorial Alhambra. España, 1983.
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Hernández, Marta y col. Manual de Prácticas de Laboratorio. Cuba, 1988.
Robyt, John; White Bernard. Bioquemical Techniques. Waveland Press. 1987.
Scott, T.; Melvin, E. Determination of dextran with anthrone. Analytical Chemistry. 25:
1656-1658. 1953.
McKee, T.; McKee, J. Bioquímica. 3era Ed. Editorial McGraw Hill-Interamericana.
España, 2003.