FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERIA

GUÍA DE PRACTICA DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA. 2019-I

PRÁCTICA 05: Observaciones microscópicas de células procariotas y eucariotas

I.- FUNDAMENTACIÓN.
El yogurt, agua estancada y levadura, son muestras muy apropiadas para la observación de
organismos microscópicos, ya sea en seco o en fresco y permite su identificación según sus
características en procariotas y eucariotas.
II.-OBJETIVOS.
 Reconocer células procariotas y eucariotas mediante visualización microscópica.

III.- PROFESORAS RESPONSABLE.

Blga. Mblga. MSc. Mirna Rodríguez Barrantes

Blga. Mblga. MSc. Adela Jaramillo Llontop

IV.- METODOLOGÍA.
1. Metodología:
1.1.Materiales:

 03 microscopios por mesa  Alcohol

 01 caja de láminas porta objeto  Safranina
por mesa  Pinza sujetadora de lámina
 01 caja de láminas cubre objeto portaobjeto
por mesa
 01 Encendedor
 03 Mecheros
 01 Gradilla para colorear laminas
 Aceite de inmersión
 250 mL de agua estancada
 01 sobre de levadura en polvo
 01 cebolla
 01 fsco. pequeño de Yogurt con
probióticos.
 01 sobre pequeño de palillos
montadientes
 Azul de metileno
 Violeta de genciana
 Lugol
1.2.Procedimiento:

Preparación de organismos celulares procariotas y eucariotas para su observación al

microscopio:
A) Preparados en fresco

a. Observación de organismos unicelulares eucariotas (protozoos de vida

libre)
En un portaobjetos coloque una gota de agua estancada, cúbrala con un
cubreobjetos y Observa al microscopio, enfoque la muestra con el objetivo de 10X
y 40X.

b. Observación de organismos unicelulares eucariotas (levaduras)

En un tubo de ensayo coloque unos granos de levadura fresca o seca activa,
agregue agua tibia y agite hasta tener una solución muy diluida; deposite
una gota sobre el portaobjetos, ponga el cubreobjetos y observe al
microscopio con los objetivos de 10X, 40X y 100X.
c. Observación de células de epidermis de cebolla (pluricelulares)
Realizar un corte en el bulbo de la cebolla y desprenda cuidadosamente la
membrana transparente y delgada (catáfila) que recubre al mismo. Llevar la
muestra extraída a un portaobjetos que contenga una gota de agua. Cubrir con
el cubreobjetos y observar al microscopio en 10X y 40X. Realizadas las
observaciones respectivas dejar caer una gota de azul de metilo al borde del
cubreobjetos, de tal manera que el colorante penetre en la muestra por capilaridad.
Eliminar el exceso de colorante y observar.
B) Preparados en seco
a) Observación de organismos procariontes en sarro dentario
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte
de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos, sales
minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. La flora bacteriana de
la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el
momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas,
pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos,
diplococos y bacilos.
Con un mondadientes tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en
una gota de agua sobre el portaobjetos. Extender la muestra en el portaobjetos con
una gota de agua y hacer el frotis. Dejar secar y fijar con calor. Realiza una tinción
compuesta o diferencial (Tinción Gram) por 2-3 minutos, lavar el exceso de
colorante y secar.
 b) Observación de organismos procariontes en yogur
El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche.
A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4%
de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco
productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy
acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías
bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos,
cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30μm
de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el
enfoque del microscopio.
Para ello debe realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una
pequeña gota de agua. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa y teñir
con la tinción Gram. Finalmente observar al máximo aumento del microscopio.

C) Tinción compuesta (Tinción Gram)

 Teñir con cristal violeta por 1min.
 Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
 Cubrir con Lugol por 1min.
 Lavar con agua el exceso de Lugol.
 Decolorar con alcohol-acetona o simple-mente con alcohol hasta que la preparación
deje de perder color (30 seg)
 Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
 Teñir con safranina por 1min.
 Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
 Secar la preparación.
 Examinar al microscopio con el objetivo de inmersión.

3. Resultados
Observación:

Muestra:

Coloración:

Aumento total: x =
(Ocular) (Objetivo)

Observación:

Muestra:

Coloración:

Aumento total: x =
(Ocular) (Objetivo)

Observación:

Muestra:

Coloración:

Aumento total: x =
(Ocular) (Objetivo)

Observación:
Muestra:

Coloración:

Aumento total: x =
(Ocular) (Objetivo)

Observación:

Muestra:

Coloración:

Aumento total: x =
(Ocular) (Objetivo)