MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL INGENIERIA AGRONOMICA

TRABAJO ENCARGADO

ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA

DOCENTE: ING. JUAN ZAPANA PARI

ESTUDIANTE: Sonia Solórzano Mamani

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ÍNDICE
1. Introducción
2. Practica 1
3. Practica 2
4. Practica 3
5. Practica 4
6. Practica 5
7. Practica 6
8. Practica 7
9. Practica 8
10. Practica 9
11. Conclusiones de las practicas

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INTRODUCCIÓN

La microbiología es la rama de la biología encargada del estudio de los microorganismos,

seres vivos pequeños también conocidos como microbios. Es la ciencia de la biología dedicada a
estudiar los organismos que son solo visibles a través del microscopio: procariotas y eucariotas
simples.

Son considerados microbios todos los seres microscópicos, estos pueden estar
constituidos por una sola célula (unicelulares), así como pequeños agregados celulares formados
por células equivalentes (sin diferenciación celular), estos pueden ser eucariotas (células con
núcleo) tales como hongos y protistas, procariotas (células sin núcleo definido) como las
bacterias.

Sin embargo la microbiología tradicional se a ocupado especialmente delos

microorganismos patógenos entre bacterias, virus y hongos, dejando a otros microorganismos
en manos de la parasitología y otras categorías de la biología.

Aunque los conocimientos microbiológicos de que se dispone en la actualidad son muy

amplios, todavía es mucho lo que queda por conocer y constantemente se efectúan nuevos
descubrimientos en este campo. Tanto es así que, según las estimaciones más habituales, solo
un 1% de los microbios existentes en la biosfera han sido estudiados hasta el momento.

Por lo tanto, a pesar de que han pasado más de 300 años desde el descubrimiento de los
microorganismos, la ciencia de la microbiología se halla todavía en su infancia en comparación
con otras disciplinas biológicas tales como la zoología, la botánica o incluso la entomología.

Finalmente al tratar la microbiología sobre todo los microorganismos patógenos para el

hombre, se relaciona con categorías de la medicina como patología, inmunología y epidemiologia.

PRACTICA N01 LAVADO DE MATERIAL DE VIDRIO

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INTRODUCCIÓN

Para llevar a cabo el proceso de lavado, se recomienda el empleo de detergentes

biodegradables, neutros, que no dejen residuos, de manera de no interferir con los resultados de
los ensayos analíticos. Se prepara una solución a la concentración indicada para remojar el
material por el tiempo necesario, siguiendo las instrucciones del fabricante, posterior a ello se
enjuaga con abundante agua potable hasta eliminar todo resto de jabón, luego se enjuaga 2 o 3
veces con agua destilada,

Por lo tanto, es conveniente que luego de lavar todo el material de vidrio, esta sea
enjuagada dos veces con agua destilada, para eliminar todo residuos de detergente antes de ser
esterilizado.

Finalmente se deja secar en la estufa (de secado de material) a 60-700C por el tiempo
necesario y finalmente se procede a su acondicionamiento de acuerdo al método de esterilización
a utilizar.

OBJETIVOS

 Aprender a mantener la limpieza y asepsia del material en laboratorio.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales:

 Detergente
 Lavadores o baldes
 Fosforo
 Franelas
 Olla
 Cocina a gas
 Esponja
 Algodón
 Agua de caño

Equipos:

 Placas Petri

Reactivo:

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 Alcohol
 Agua destilada

Metodología:

Lavado de placas Petri:

Pasos a seguir:

1. Prender la cocina con fosforo y colocar la olla con agua de caño.

2. Colocar las placas Petri infectadas dentro de la olla, esperar hasta que hierva.
3. Bajar la olla al suelo con cuidado cogiendo las asas con franelas.
4. Aumentar agua fría a la olla hasta que este tibia.
5. Eliminar el papel (suciedad).
6. Lavar con la esponja y detergente en una segunda agua sin dañar las placas petri.
7. Enjuagar mínimo 5 veces con abundante agua con la yema de los dedos para que no
quede restos de hongos.
8. Por ultimo enjuagar con agua destilada.
9. Llevado a la mesa que previamente fue desinfectada con alcohol manipulando el
algodón (dejando orear).
10. Colocar las placas Petri del lado de la cabecera (base).

RESULTADOS

Los resultados de la práctica fueron las siguientes:

Figura N01. Placas en la cocina por 15 minutos.

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Figura N02. Lavado de placas

Figura N03. Enjuague final de las placas con agua destilada

Figura N02. Oreado de placas Petri del lado de la cabecera

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PRACTICA N02 EMPAQUETADO DE PLACA PETRI ESTERILIZACIÓN

INTRODUCCIÓN

La muerte microbiana se produce por una esterilización, ya sea como consecuencia de

mecanismos de transferencia de energía, además de la oxidación. En la esterilización por Calor
seco existe una destrucción de los microorganismos oxidando sus constituyentes químicos,
desnaturalizando las proteínas y los ácidos nucleicos de las células así como fragmentando las
membranas celulares.

Por lo tanto, es conveniente que luego de empacar todo el material de vidrio, éste sea
ordenado para así poder esterilizarlo fácilmente y evitar problemas más adelante.

El material a esterilizar se deberá de empacar correctamente con papel estraza, Una de

las razones de la importancia del papel es que se puede adaptar a diferentes usos como: Impedir
el ingreso de microorganismos al interior, Sellar en forma completa para evitar contaminación,
Soportar la tracción y manipulación habitual sin sufrir deterioro y hacer permeable al método de
esterilización seleccionado.

OBJETIVOS

- Aprender la forma de doblar el papel para empaquetar las placas Petri correctamente.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales:

 Papel bond o crap

 Mesa
 Cajón
 Algodón

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Equipos:

 Placas Petri

Reactivo:

 Alcohol

Metodología:

Lavado de placas Petri:

Pasos a seguir

1. Tener listo los materiales como (placas Petri y papel bond)

2. Doblar el papel bond en tres partes los dos lados iguales y en el medio el doble alado.
3. Poner la placa Petri en el medio de la hoja bond y doblarla de los cuatro lados
4. Finalmente ordenar dentro de una caja de tal manera que ya esté listo para esterilizar.

RESULTADOS:

Los resultados de la práctica fueron las siguientes:

Figura N01. Doblado de la placa listo para empaquetarlo

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PRACTICA N03 CÁMARA HÚMEDA

INTRODUCCIÓN

Consiste en colocar la muestra enferma en una bolsa de nylon o un recipiente con un

trozo de algodón embebido en agua. Es necesario mantener el recipiente cerrado a temperatura
ambiente, hasta que se visualice el signo del hongo.

Por lo tanto la muestra a colocar en el recipiente debe estar limpia para que los
resultados no se vean alterados por posibles contaminantes bajo condiciones estables de
temperatura, de manera que la condensación del vapor de agua existente en el interior.

Finalmente este procedimiento de la cámara húmeda nos ayudara a ver qué tipo de
hongos se encuentra en una muestra seca infectada colocándole un poco de agua para que el
hongo encontrado en dicha muestra se active y se desarrolle.

OBJETIVOS

 Identificar los agentes causantes de algunas enfermedades, de diferentes muestras.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales:
 Recipiente con tapa
 Soporte de vidrio o de plástico
 Algodón
 Papel bon
 Alcohol
Muestra:
 Ajo seca, debidamente lavada
Metodología:

Lavado de placas Petri:

Pasos a seguir:

1. Lavar el recipiente y desinfectar con alcohol.

2. Colocar el papel bon dentro del recipiente.
3. Echar gotas de agua destilada hasta que el papel esta mojado.
4. Colocar los soportes y sobre eso se pone la muestra seca.
5. Por ultimo tapar el recipiente.
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RESULTADOS DE LA CÁMARA HÚMEDA

Imágenes de vista normal:

Figura N0 1. Muestra de hongo fitopatogeno

Imágenes vistas en el macroscópico:

Figura N° 2. Hongo fitopatogeno

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Imágenes vistas en el microscópico:

Figura N° 3. Hongo fitopatogeno visto en el microscopio

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PRACTICA N04 ESTERILIZACIÓN DE PLACAS PETRI

INTRODUCCIÓN

Para trabajar con microorganismos es requisito indispensable mantenerlos en estado de

cultivo puro, para lo cual el procedimiento aséptico es esencial. El primer paso para conseguir
este propósito es la esterilización de la cristalería y de los medios de cultivo.

La esterilización es la eliminación por muerte o separación de todo organismo viviente

de un material. Esto se consigue por medio de calor, filtración, u otros métodos físicos o químicos.
Los métodos más comunes incluyen el uso de calor en sus formas de calor seco o calor húmedo.

La asepsia consiste en la aplicación de un conjunto de procedimientos para eliminar o

reducir la contaminación por microorganismos sin el empleo de antisépticos. Conjuntamente con
la aplicación de métodos asépticos se utiliza esterilización, desinfestantes, medios selectivos y
técnicas especiales según el tipo d microorganismo.

OBJETIVOS

 Mantener aséptico el material de vidrio y aprender a manejar la autoclave.

 Eliminar todo microorganismo que este contaminando el material de vidrio y esté
completamente limpio.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales:

 Algodón
 Energía eléctrica
 Papel destreza
 Rejilla
 franela

Equipos:

 Placas Petri (lavadas y empaquetadas en papel crap)

 Autoclave (olla express)
 Cámara estéril

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Reactivo:

 Alcohol
 Agua destilada

Metodología:

Esterilizando placas:

Pasos a seguir:

1. Verificamos el nivel de agua destilada en la autoclave que siempre debe estar por debajo
de una malla o rejilla.
2. En el depósito de la autoclave colocamos las placas empaquetadas.
3. Cerramos la autoclave colocando la tapa y presionando los tornillos correspondientes.
4. Conectamos a la energía eléctrica y dejamos que la aguja marque el nivel de temperatura
hasta llegar a 1210 C y 15 libras de presión, marcamos o esperamos 15 minutos.
5. Pasado los 15 minutos aflojamos los tornillos y destapamos con mucho cuidado.
6. Por ultimo llevar las placas esterilizadas a la cámara estéril en donde lo dejamos para
que enfrié

RESULTADOS

Los resultados de la práctica fueron las siguientes:

Figura N01. Placas Petri listas para la esterilización en el autoclave en la olla express

PRACTICA N05 PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO PDA

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INTRODUCCIÓN

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el

crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que los hongos crezcan adecuadamente
en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,
grado de humedad y presión de oxígeno adecuado,

Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y

debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de los hongos requieren
nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano.

Por eso el PDA es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios
de cultivos de microorganismos.

OBJETIVOS

 Aprender a preparar el medio de cultivo para hongos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales:

 Dextrosa
 Papa
 Agar
 Cuchillo
 Espátula
 Cocina
 Agua destilada
 Fosforo

Equipos:

 Balanza electrónica

Metodología:

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Preparación de PDA

Pasos a seguir

1. Lavar la papa orear y si es necesario trozar

2. Pesar la papa y hervir en una olla en medio litro de agua más o menos por los 30
minutos.
3. Cuando el agua cambie de color bajarlo de la cocina porque ya salieron sus sustancias.
4. En otra olla colocar el Erlenmeyer con la dextrosa y hacer hervir en baño maría.
5. En un vaso de vidrio graduado mezclar el agua de papa con el agar y dextrosa
previamente diluidos.
6. Si falta completar con agua destilada a un litro de PDA se necesita 250gr de papa 18gr
de agar y 18gr de dextrosa.

RESULTADOS

Los resultados de la práctica fueron las siguientes:

Figura N01. PDA preparado listo para esterilizar en la autoclave

PRACTICA N06 DISTRIBUCIÓN DEL MEDIO O PLAQUEADO

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INTRODUCCIÓN

Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que contienen azucares almidón que
es extraída de la papa y también se encuentra la dextrosa. Se distribuye el medio de cultivo sólido
donde los hongos podrán reproducirse y desarrollarse.

Sin embargo en la actualidad la desnaturalización de estos fitopatogenos sufren frente a

los químicos que se les adhiere para su control y esto hace que día a día se hagan más fuerte,
para esto cultivos hongos fitopatogenos para el control de los cultivos frente a plagas con esto
nosotros damos a conocer que son los medios propicios.

OBJETIVOS

 Aprender a manipular la placa Petri y el medio esterilizado

MATERIALES MÉTODOS

Materiales

 Medio esterilizado caliente no menos de 380C

 Mechero
 Fosforo

Equipos

 Placa esterilizada
 Cama estéril

Metodología

Distribución del medio:

Pasos a seguir

1. Tomar las placas esterilizadas y el medio a no menos de 380C

2. Distribuir delante del mechero, manipulando la placa con la mano izquierda y el medio
con la derecha.

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3. La cantidad de PDA es un litro y debe alcanza para 60 placas y se deja en la cámara

estéril hasta que enfrié y quede listo para la siembra del microorganismo.
4. La cámara estéril debe estar previamente desinfectado con alcohol y algodón.
5. Si algunas de las placas resultaran contaminado se desecha antes de utilizar para la
siembra.

RESULTADOS

Figura N°1. Distribución del medio PDA

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PRACTICA N07 SIEMBRA DEL HONGO

INTRODUCCIÓN

Los hongos pueden ser de gran beneficio así como también perjudiciales al ser humano.
Aquellos que habitan en el suelo ayudan a descomponer plantas y animales muertos, manteniendo
fértil el terreno. Los hongos que llevan a cabo fermentación son de gran importancia industrial.
La industria de la cerveza, el vino, los quesos, los antibióticos, las enzimas, la repostería,
dependen de los hongos.

Algunas especies son capaces de producir drogas como toxinas y alucinógenos. Algunas
especies pueden causar enfermedades al hombre, plantas o un ser hospedante. De éstos son las
micosis superficiales (en piel, pelo y uñas) y las micosis sistémicas (en pulmones, sistema
nervioso, genitales).

OBJETIVOS

 Aprender a sembrar el hongo a la placa Petri con su respectivo medio de cultivo.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales

 Lápiz con aguja

 Mechero
 Hongo

Reactivo

 Alcohol

Equipos

 Placa Petri

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Metodología

Siembra del hongo:

Pasos a seguir

1. Primero Coger el asa por el cabo en forma similar cuando escribimos.

2. Introducimos el asa de alambre de platino en la zona de color azul del mechero hasta
que tome el color rojo.
3. Retirar el instrumento de la llama y esperar de 4 a 5 segundos para que enfrié.
4. Tomamos las placas Petri previamente distribuidas con el medio y cultivamos en forma
de cruz sacudiendo suavemente.
5. Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la cámara estéril boca abajo.

RESULTADOS

Figura N°1. Siembra del hongo en la cámara estéril

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PRACTICA N08 COLORACIÓN GRAM

INTRODUCCIÓN

La coloración Gram es una de las más importantes en microbiología porque permite

diferenciar a las bacterias en Gram negativas y Gram positivas con relación a la diferencia de la
pared celular.

En esta coloración los reactivos actúan de la siguiente manera: el cristal violeta

colorante primario tiñen las bacterias y la solución yodada hace de mordiente o fijador de color
y los hongos se observaran teñidas de un azul más fuerte. El alcohol acetona, actuara como
decolorante al eliminar de la pared celular de las Gram negativas

OBJETIVOS

 Demostrar la diferenciación de bacterias en dos grupos: Gram positivas (retienen el

color azul) y Gram negativas (retienen el colorante de contraste).
 Familiar a los estudiantes con las técnicas de coloración diferencial.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales

 Laminas porta
 Cubre objeto
 Mechero
 Fosforo
 Papel toalla

Muestra

 Cultivo fresco de bacterias

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Reactivo

 Cristal violeta
 Lugor
 Alcohol 95%
 Aceite de cedro
 Safranina

Metodología

Coloración Gram:

Pasos a seguir

1. Extender sobre un porta objeto limpio y desengrasado una gota de suspensión

microbiana transferida con la aguja de sembrar
2. Fijar el preparado pasando la lámina rápidamente a través de la llama del mechero
hasta que el frotis seque
3. Cubrir la preparación con cristal violeta y dejar actuar un minuto
4. Lavar cuidadosamente con agua para eliminar el exceso de reactivo
5. Hacer actuar el lugor por un minuto
6. Lavar con agua
7. Decolorar con alcohol cetona
8. Aplicar safranina como colorante de contraste por 30 segundos
9. Lavar con agua, secar con papel toalla, colocar una gota de aceite de cedro (inmersión)
y observar al microscopio con objetivo de inmersión
10. Anotar en el informe y el resultado de las informaciones

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RESULTADOS

Figure N° 1. Coloración cristal violeta y vista en el microscopio

CUESTIONARIO

¿Explique qué sucesos ocurre en la célula bacteriana en el tratamiento de cada una de los
pasos?

- Primero se hace la desinfección del material de vidrio

- Esterilizar la bacteria a trabajarse
- Poner la bacteria en el material de vidrio y dejarla secar por unos segundos
- Colocar el cristal violeta sobre la bacteria y luego de unos seg. Lavar con sumo cuidado
con agua y de esto muestra una coloración violeta, pasamos a echar el lugor dejando
actuar por unos min, colocar alcohol cetona donde muestra un color negruzco, lavar con
agua, colocar safranina dando color rosa y luego echar aceite de cedro luego de estos
pasos el material de vidrio con la muestra se le pasa por encima del mechero hasta que
quede un poco tibio para luego llevar al microscopio para su posterior observación.

¿Qué factores tiene influencia en la variabilidad de la reacción del Gram en las bacterias?

- Que las Gram positivas responden al color azul y el color violeta a las Gram negativas

Mencione 10 especies bacterianas Gram positivas y Gram negativas

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- Gram positivas:
Bacillus anthrasis causante del Antrax, Clostridium, perfringens, causante de enteritis
necrosante y gangrena, Clostridium tetani, causante del tétanos, Clostridium botulini,
causante del Botulismo, Corynebacterium pyogenes, causante de abscesos hepáticos,
Lactobacillus acidofillus, usados en la fabricación de yogurt y quesos, Listeria
monocytogenes, causante de la Listeriosis, Staphylococcus aureius causante de
amigdalitis, atritis y muchas otras infecciones y Streptococcus epidermidis causante de
forúnculos, acné y abscesos cutáneos.

- Gram negativas:
La gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria meningitidis) y síntomas
respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. Los bacilos Gram-negativos incluyen
un gran número de especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades
respiratorias (Hemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila,
Pseudomonas aeruginosa), enfermedades urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis,
Enterobacter cloacae, Serratia marcescens) y enfermedades gastrointestinales
(Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi).

¿Qué importancia tiene la reacción Gram en el diagnostico bacteriológico?

- Demostrar la diferenciación de bacterias en dos grupos: Gram positivas (retienen el

color azul) y Gram negativas (retienen el colorante de contraste)

CONCLUSIONES

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De las prácticas realizadas se concluye que:

1. El lavado de material de las placas Petri es muy importante porque nos ayuda a mantener
una limpieza y asepsia en el material de vidrio con el que estemos trabajando usando los
materiales indicados ya, para evitar que otros microorganismos infecten las placas.
2. El empaquetado de un material de vidrio en este caso las placas Petri, es importante
aprender a envolver con el papel bond para así guardarlo en su respectivo sitio en este
caso fue un cajón.
3. En la cámara húmeda llegamos a conocer los diferentes tipos de hongos en las muestras
secas de vegetales que dejamos en un taper para poder observar su reproducción,
desarrollo y crecimiento y así poder controlar su proliferación ya sea en laboratorio o
en el campo.
4. En este proceso aprendimos a esterilizar las placas Petri y también hacer el uso de la
autoclave para eliminar todo microorganismo que pueda ser contaminante para la
siembra de hongos.
5. El medio de cultivo es utilizado para la alimentación y nutrición del hongo para su buen
crecimiento y desarrollo del fitopatogeno para soportar las adversidades del medio
ambiente en el campo de cultivo.
6. Es mejor homogenizar para tener un buen resultado de hongo, ellos requieren de mucho
azúcar para seguir su ciclo biológico.
7. La siembra del hongo es necesario para la reproducción para su posterior control de
control de plagas o patógenos que causan daño a los cultivos de nuestra región.}
8. La coloración Gram se hizo con el fin de poder reconocer los tipos de bacterias que
pueden ser dañinos o contribuyentes con el medio (Gram positiva, Gram negativa).

BIBLIOGRAFÍA

Collins C.H, Lyne Patricia, Métodos Microbiológicos Edición Acribia, S.A, Zaragoza, España, quinta
edición.

Editorial DOYMA, Barcelona, 1992

López a. 2002 editorial m. de los ángeles Caamaño. Microbiología. 1º ed. Madrid – España. 1103p.
866 – 868 pp.

Principles of Microbe and Cell Cultivation. S.J. Pirt. Blackwell Scientific Publications, 1975

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