Universidad Francisco José de Caldas.

Facultad de ciencias y educación.

Licenciatura en Biología.

EXTRACCIÓN DE ADN.

Daniela Moreno Solano, 20152140045; Camila Castellanos González,

20152140017.

RESUMEN.

El ADN es una macromolécula química, ésta pertenece al grupo de los ácidos

nucleicos. Forma los cromosomas del núcleo presentes en las células y es
portador de la información genética de cada individuo. El código genético
(formado por el ADN) es un lenguaje basado en combinaciones que se pueden
formar a partir de la guanina, timina, citosina y adenina, (Uracilo en vez de timina
en el ARN). Cualquier característica biológica está determinada por su orden y
forman un triplete; cada triplete es una palabra cifrada o señal que conduce a
un aminoácido. Éste constituye el material genético de los organismos y es el
componente químico principal presente en las células tanto animales como
vegetales controlando todos los procesos vitales que en ella acontecen.

Por otra parte, la separación de éste es un proceso de métodos que intervienen

en procesos naturales provocando lisis o separación del mismo de la estructura
celular y de moléculas presentes en el sistema, liberando, por último dicha
estructura. Estas disgregaciones se inducen a partir de diferentes sustancias a las
cuales nombraremos lisis. Todo esto por medio de procesos de centrifugado que
mezclaran las sustancia de tal forma que pueda reaccionar.

Palabras Clave: Separación, ADN, macromolécula, estructura, biológica, código

genético.

ABSTRACT.

DNA is a chemical macromolecule, it belongs to the group of nucleic acids.

Shaped nucleus chromosomes in cells and carries genetic information of the
individual. The

1
 Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.

Genetic code (consisting of DNA) is based on combinations that can be formed

from guanine, thymine, cytosine and adenine language (uracil instead of thymine
in RNA).

Any biological characteristic is determined by their order and form a triplet; each
triplet is an encrypted word or signal that leads to an amino acid. This is the
genetic material of organisms and is the main chemical component present in
both animal and plant cells controlling all life processes that occur in it.

Moreover, separation thereof is a process methods natural processes involved in

causing lysis or separation of the same cell structure and molecules present in the
system, releasing finally the structure. These divestitures are induced from different
substances which will name lysis. All this by means of centrifugation processes to
mingle the substance so that it can react.

Key Words: Separation, DNA macromolecule, structure, biological, genetic

code.

minuciosamente pasos adecuados

INTRODUCCIÓN:
El presente informe contempla una
serie de pasos que describiremos
detalladamente a continuación y la
explicación conceptual de cada uno
de los avances que se realicen en el
proceso de extracción.
Tras la substracción de sangre a partir
de un tejido humano, se obtiene la
extracción del ADN, ésta requiere un
orden de etapas elementales de
separación en donde se retira
material que se encuentra alrededor
del ADN para lograr su liberación en
forma de mota para su posterior
observación. En el siguiente
laboratorio, seguiremos
para su extracción e indagación.
El ácido desoxirribonucleico es una
biomolécula que permite la
continuidad y evolución de las
especies, el ADN almacena la
información genética codificada,
éste, está presente en todas las
células de los seres vivos y siempre
tiene la misma composición (bases
nitrogenadas, ácidos fosfóricos y
pentosas). La extracción de las
células donde se halla confinado, es
una serie de pasos previos analíticos
y diagnósticos los cuales llevaremos a
cabo, junto con ciertas precauciones
de contacto que evitaran la
contaminación por material
biológica humana, la contaminación
microbiológica, e incluso química.

2

Marco teórico:
El ADN es el código genético
universal; presenta una estructura
general de doble hélice en donde se
encuentran las bases nitrogenadas
las cuales brindan características
genéticas a cada individuo, estas
bases se unen a través de enlaces
químicos generando tripletes
formando cerca de 20 aminoácidos
esenciales para la vida. Dichos
tripletes se hayan dispuestos de una
manera lineal y continua, de manera
que en ellos no exista algún espacio
para alguna otra estructura diferente
a la que conforma este ácido
nucleico.
Figura 1. Triplete de ADN.
Darwin y su evolución: ADN, eslabón ignorado.
https://jolimu.wordpress.com/2008/09/29/darw
in-y-su-evolucion-adn-eslabon-ignorado/
La imagen de las dos hélices, es una
imagen paradigmática del gran
avance logrado por la genética a
partir de mediados del siglo XX.
1 Neumococo, microbiología.
Bacteria Streptococcus pneumoniae,
Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.
El ADN fue identificado inicialmente
en 1868 por Friedrich Miescher,
biólogo suizo, en los núcleos celulares
del pus obtenido de los vendajes
quirúrgicos desechados y en el
esperma del salmón. Él llamo a ésta
sustancia nucleína. Aunque no fue
reconocida hasta 1943 gracias al
experimento realizado por Oswald
Avery.
Oswald Avery, uno de los primeros
biólogos moleculares, dedicó gran
parte de su vida a la biología
molecular y a la inmunoquímica, es
reconocido por su descubrimiento en
1944 en donde, trabajando con
cepas de neumococo 1 , reveló la
existencia de material genético en
los seres vivos. Éste experimento
consistía en homogeneizar y filtrar la
capa virulenta (es decir, con
neumococo) y filtrarlo en un
Erlenmeyer. Posteriormente se
realizaba un tratamiento de filtrado
con enzimas que destruían el ARN, las
proteínas y el ADN, terminado este
paso se procedía a añadir un cultivo
de X cepas las cuales no contenían
virus alguno. Los resultados obtenidos
eran cepas transformadas, cada
cultivo de cepas no virulentas se
trataban con un Erlenmeyer
diferente, (con ADN, ARN y
proteínas), los cultivos tratados con
ARN o proteínas contenían unas
cepas completamente
transformadas y los que eran tratados
con ADN aparecían las mismas
cepas X añadidas al principio del
experimento. Esto llevo a la
agente bacteriano de la pulmonía, es gram
positiva, inmóvil y generalmente aeróbica.
3

conclusión de que el principio
transformante era el ADN y en él se
encontraba la herencia genética
principal de cada individuo
Figura 2. Esquema explícito, experimento de Oswald
Avery realizado en 1944.
http://geneticaumbiomedicac1.blogspot.com.co/2012
/11/experimento-de-avery_23.html
Otros precursores de su
descubrimiento fueron Macleod 2 y
MacCarty 3 , quienes demostraron
2 Colin Munro MacLeod era un
genetista canadiense-
estadounidense. Nacido en Port
Hastings, Nueva Escocia, Canadá
MacLeod entró en la Universidad
McGill a la edad de 16 años, y
completó sus estudios de medicina a
los 23 años.
Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.
que el ADN de bacterias muertas
podía influir en el material genético
de las bacterias vivas (explicado en
el anterior experimento).
La estructura molecular del ADN es
una pareja de larga cadenas de
nucleótidos, una larga hebra de
ácido nucleico está enrollada
alrededor de la hebra formando un
par entrelazado. Dicha hélice mide
3.4 nm de paso de rosca y 2.37 nm de
diámetro, y en cada vuelta se
encuentra formada por 10.4 pares
de nucleótidos enfrentados entre sí
por sus bases nitrogenadas.
El hallazgo de dicha estructura de
doble hélice y el mecanismo por el
cual ésta se duplica y realiza una
trasmisión de información a células
hijas fue llevada a cabo por los
biólogos Crick y Watson en un
laboratorio de investigación de
Cambridge, basándose en
radiografías de ADN tomadas por
Wilkins, por lo que recibieron los tres el
premio Nobel de Medicina y
Fisiología en 1962.
3 Maclyn McCarty fue un genetista
estadounidense, quien dedicó su vida
como médico-científico al estudio de
organismos que causan enfermedades
infecciosas.
4
 Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.
¿QUÉ ES EL ADN? El ácido desoxirribonucleico forma los
cromosomas del núcleo de las
Composición y estructura: células y es portador de la
información genética del individuo.
La molécula de ADN es una larga
doble hélice enrollada sobre sí Existen diferentes tipos de ADN, estos
misma, en ella, dos ramales son:
compuesto de moléculas de azúcar
(desoxirribosa) y fosfatos, se  ADN recombinante: Es un
conectan gracias a la unión de fragmento de ADN transferido
cuatro moléculas denominadas artificialmente a una célula.
bases formando los eslabones de la Esta es formada de manera
cadena. Estas cadenas están artificial o in-vitro por la unión
formadas por cuatro nucleótidos de secuencias de ADN
diferentes, compuestos además por proveniente de dos organismos
un azúcar, un ácido fosfórico y una distintos que normalmente no
base nitrogenada. se encuentran juntos.

Figura 4. ADN recombinante.

Figura 3. Composición del ADN.  ADN no codificante: Secuencia

de nucleótidos de una
molécula que no codifica y
En dichos eslabones, la adenina se cuya información es
une a la timina y la guanina a la desconocida. Este no
citosina. Un gen es un segmento de codifica para aminoácidos y
ADN que tiene una función se encuentra entre los genes
específica y está constituido por una en el cromosoma sin alguna
secuencia determinada de bases función conocida. Otros,
nitrogenadas. llamados intrones, se

5

encuentran dentro de los
genes.
Función principal:
La función principal del ADN consiste
en transmitir los genes, es decir, los
caracteres biológicos de un individuo
determinado, en dicho genes está
grabada la instrucción necesaria
para la construcción de cada
individuo completo. Siguiendo dichas
instrucciones, cada célula es capaz
de sintetizar sus proteínas y de
adoptar la forma y función que le
corresponde a cada organismo.
Solo tenemos un 30% más de genes
que un diminuto gusano, el cual tiene
sólo un milímetro de longitud y posee
alrededor de 959 células, en tanto
que nosotros alrededor de 100
billones. Y mientras que los seres
humanos poseemos
aproximadamente 100.000 millones
de neuronas, el diminuto gusano
cuenta con 302 aproximadamente.
¿En dónde encontramos el ADN?
El ADN se encuentra en todas las
células de los seres vivos. Si la célula
es eucariota se encuentra en el
núcleo, en cambio, si es procariota,
encontramos dicha información
genética dispersa en todo el
citoplasma. En las células eucariotas
encontramos el nucléolo y la
cromatina, el nucléolo está formado
por ARN y proteínas, éstos intervienen
en la formación de ribosomas, la
cromatina está formada por ADN y
Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.
también proteínas, estos, originan los
cromosomas.
SANGRE:
Figura 5. Glóbulos rojos y blancos presentes en la
sangre.
En la siguiente lisis se utilizó la sangre
como medio de contención del ADN.
La sangre es un líquido que recorre el
sistema circulatorio de los animales,
ésta aporta nutrientes, oxígeno y
otras sustancias a las células del
organismo y recoge los elementos de
desecho para conducirlos a los
órganos de excreción, éste líquido de
color rojo en los vertebrados,
impulsado por el corazón, circula por
los vasos sanguíneos del cuerpo, está
formada por el plasma que lleva el
agua y sustancias de disolución, y por
las células sanguíneas; la sangre es
intermediaria entre los elementos
anatómicos y el medio exterior.
¿Qué es la sangre?
La sangre es un tejido líquido que
recorre el organismo a través de los
vasos sanguíneos. La cantidad de
sangre se encuentra en un organismo
en relación con la edad, el peso,
sexo, y la altura. Esta es un tejido
renovable del cuerpo humano, esto
quiere decir que la médula ósea se
6

encuentra fabricándolo toda la vida.
Ante una hemorragia aumenta hasta
siete veces la producción de
glóbulos rojos y ante una infección
ésta aumenta la producción de
glóbulos blancos.
¿Qué funciones cumple?
La sangre como todos los tejidos del
cuerpo cumple múltiples funciones
necesarias para la vida como la
defensa ante infecciones, los
intercambios gaseosos y la
distribución de nutrientes. Para éstas
funciones cuenta con diferentes
células que se encuentran en el
plasma, todas éstas células se
fabrican en la médula ósea, ésta se
encuentra en el tejido esponjoso de
los huesos planos, es decir, cráneo,
vertebras, esternón, crestas ilíacas, y
en los canales medulares de los
huesos largos como el fémur y el
húmero.
Composición sanguínea:
Figura 6. Composición sanguínea.
Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.
 Glóbulos rojos: Transportan el
oxígeno de los pulmones hacia
los tejidos y captan el anhídrido
carbónico producido en los
tejidos que es eliminado por las
vías respiratorias.
 Glóbulos blancos: Defienden al
organismo contra las
infecciones bacterianas y
virales.
 Plaquetas: Impiden
hemorragias, favoreciendo la
coagulación en la sangre.
 Plasma: Permite el transporte
de nutrientes, contiene
diversas proteínas que son de
utilidad en la terapia
transfusional.
Existen diferentes grupos sanguíneos
A, B, AB y O y el sistema Rhesus,
conocido como el factor Rh, (Positivo
o negativo), éstos se encuentran
presentes simultáneamente en los
seres vivos. Cuando se habla de
grupo y factor nos referimos al
sistema ABO y Rh.
La sangre no se puede fabricar
En Argentina, como en todo el mundo,
dependemos de la generosidad de los
ciudadanos para que los centros de
atención de la salud puedan realizar
trasplantes, operaciones y tratamientos
oncológicos, entre otros.
La sangre no se puede almacenar
indefinidamente ya que caduca: las
plaquetas se tienen que utilizar antes de
cinco días, los glóbulos rojos antes de 42 días
y el plasma antes de un año.
7
 Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.
MATERIALES Y MÉTODOS:

Extracción del ADN:

La extracción de ADN consta de unos

procedimientos adecuados de lisis en
donde se rompen estructuras que
confinan el citoplasma y liberar al
medio su contenido y otra de
purificación, que implica la retirada
de la solución final de la mayoría de
residuos que se encuentran a su
alrededor.

Los pasos necesarios para la Figura 7. Centrifuga, configurada para centrifugar a

extracción correcta de ADN 14.000 rpm (revoluciones por minuto) a lo largo de 10

mediante un procedimiento se minutos.

encuentran en el anexo 1 al final del

informe. Las muestras se centrifugan durante
un tiempo estipulado, permitiendo
La adecuada extracción del ADN se que ésta y las lisis agregadas se
lleva a cabo de la siguiente manera: mezclen de tal manera que se limpie
de forma apropiada la muestra de
1. Realizando la lisis de las células sangre.
o virus. Las sales caotrópicas
ayudan a romper la estructura
tridimensional de las
macromoléculas como las
proteínas.
2. Degradación de la fracción
proteica asociada al ADN. Se
consigue mediante la acción
de una proteasa, ésta fracción
proteica puede precipitarse
mejor con la ayuda de las sales
como el acetato de amonio, o
el acetato sódico.

Materiales y métodos:

MATERIALES Figura 8. Vortex. Utilizado para la mezcla de las

muestras a continuación de la lisis 2

8
 Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.

Figura 9. Puntas para micropipetas de laboratorio. Figura 11. Tubos de eppendorf para verter sangre en él.
(Cada color tiene una capacidad diferente).

Figura 12. Lisis I para la disgregación de ADN.

Para la extracción del ADN se

Figura 10. Micropipeta, regulada para la extracción de realizan los siguientes pasos a través
300 microlitros de cada lisis. de una lisis (separación):

1. Lisis celular.
2. Lisis nucleica.
3. Precipitación nucleica (Por
medio de acetato de amonio).
4. Precipitación de ADN.

9
 Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.

Figura 13. Se agregan 300 microlitros de sangre a un

tubo eppendorf.
Figura 15. Centrifugación de tubos eppendorf por 10
minutos a 14.000 rpm.

Figura 14. Se agregan 900 microlitros de lisis I.

Figura 16. Pellet y sobre donante obtenido después de

centrifugar la muestra.

Figura 14. Muestra de sangre encubada por 10 minutos.

10
 Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.

Discusiones:

Conclusiones:

BIBLIOGRAFÍA.

http://highered.mheducation.co
m/olc/dl/120078/micro15.swf

Figura 17. Adición de lisis II tras la extracción del http://www.microbial-

sobredonante. systems.com/web/docs/Newslett
er_Microbial_03.pdf

http://www.jpimentel.com/cienci
as_experimentales/pagwebcienci
as/pagweb/la_ciencia_a_tu_alca
nce_II/quimica/Experiencias_qui
mica_extraccion_de_adn.htm

http://es.slideshare.net/marcia_k
arina/extraccion-adn

http://limavirtual.unicordoba.edu.
Figura 18. Fusión de lisis y sangre en el vortex por 5 co/naturales/informe-practica-
minutos. campo

http://jem.rupress.org/search?sub
mit=yes&pubdate_year=1944&vol
ume=&firstpage=&DOI=&author1
=Avery&author2=&title=&andorex
acttitle=and&titleabstract=&ando
rexacttitleabs=and&fulltext=&and
orexactfulltext=and&fmonth=Jan
&fyear=1896&tmonth=Jan&tyear=
2008&fdatedef=1+January+1896&
tdatedef=21+January+2008&flag=
&RESULTFORMAT=1&hits=10&hitsbr
ief=25&sortspec=relevance&sorts
Figura 18. Adición de lisis 3 a la muestra extraída del
vortex.

11
 Universidad Francisco José de Caldas.
Facultad de ciencias y educación.
Licenciatura en Biología.
pecbrief=relevance&sendit=Sear sangre/index.php?option=com_c
ch ontent&id=315&Itemid=39

http://www.msal.gob.ar/plan-
nacional-

Protocolo de extracción del ADN.

1) Agregar 300 microlitros de sangre en un tubo de eppendorf (Agitar por inmersión más de 5 veces).
2) Agregar 900 microlitros de lisis 1.
3) Incubar en las manos por 10 minutos.
4) Centrifugar por 15 minutos a 13.000rpm.
5) Evaluar la calidad del pellet, si no es buena desechar sobre el donante y aplicar 300 microlitros de lisis 1.
6) Eliminar el sobredonante sin eliminar el pellet.
7) Adicionar 300 microlitros de lisis 2 (Verificar que ésta no se encuentre precipitada).
8) Dar vortex por 5 minutos.
9) Adicionar 300 microlitros de lisis 3.
10) Dar vortex por 5 minutos.
11) Centrifugar por 15 minutos a 13.000 rpm.
12) Transferir el sobredonante a un nuevo tubo eppendorf.
13) Adicionar 300 microlitros de lisis 4.
14) Agitar por inversión 5 veces.

Anexo 1. Tabla del protocolo a seguir para la extracción de ADN.

12