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Introducción

La Química Analítica brinda información sobre la composición química de una sustancia

Analito: Sustancia que está siendo analizada, cuantificada o identificada

Q.A.Cualitativa: Analiza la identidad de las especies o grupos funcionales (Identificaciones, Reacciones de


reconocimiento)

Q.A.Cuantitativa: Analiza la información numérica de la cantidad relativa de una sustancia (Gravimetría-diferencia de


peso, volumetría-titulaciones)

Análisis Instrumental: Apoyo de equipamiento automatizado (cromatografía, electroforesis, espectrofotometría)

Expresar resultados

Cualitativa: Cationes, aniones, elementos, compuestos, presencia, ausencia

Cuantitativa: Cantidades, concentraciones

Estructural: Estructura química de la sustancia

Aplicaciones:

1. Alimentos: Detección de toxinas, pesticidas, macronutrientes (grasas, proteínas), micronutrientes (vitaminas,


minerales), tiempo de vida, metales pesados.
2. Materiales: Caracterizar irregularidades microcristalinas en materiales, cuantificar trazas de impurezas en
aleaciones metálicas, Analizar materias primas, control de calidad, compuestos de interés
Grado alimenticio: apropiado para estar en contacto con los alimentos.
3. Aire/contaminantes: Medir la calidad del aire de interiores, Identificar contaminantes emergentes.
4. Medicina: Analizar venenos, dopaje, abuso de drogas, medicina forense (recrear escenas del crimen),
muestras biológicas
5. Industria: Farmacéutica, alimentos, petróleo, materias primas, metalurgia
6. Aguas: Análisis de pesticidas, calidad de agua, contaminantes, mejora de aguas residuales.
7. Suelos: Composición, minerales, nutrientes, clasificación.

Ejemplo:

Programa Mundial de Alimentos (poblaciones vulnerables) -> fortificar con micronutrientes


Control de la vitamina A,C y Fe
Cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) -> Vitaminas A y C
Espectrofotometría de absorción atómica -> Fe
Control de producto terminado

Industria farmacéutica:
Materias primas: pureza (principio activo, efectos secundarios), esterilidad
Productos intermediarios: Pasos intermedios hasta llegar al producto final (analizar concentración)
Productos a granel: No empacados individualmente
Producto terminado: control de calidad
Empaques: Presentación de los fármacos
Apariencia: sólido, líquido, suspensión, color, forma, tamaño, emulsiones, sueros orales
Grado de pureza: contenido, componentes, impurezas
Ensayo de disolución: comportamiento del fármaco en el cuerpo (efectos secundarios)
- Tiempo que demora en llegar al torrente sanguíneo y cuánto demora en el torrente sanguíneo
Unificación de unidades de dosificación: homogeneidad
Ensayos biológicos: esterilidad, efectividad

Suspensiones: (antibióticos inyectables) ->tiene partículas, no se disuelve


Antibióticos de amplio espectro: utilizados con una alta gama de bacterias.
Técnica de análisis destructiva: preparación de la muestra (destruir las unidades)

Dopaje
Doping: presencia de una sustancia prohibida, sus metabolitos y/o marcadores en el cuerpo de un atleta
Eritropoyetina: EPO, hormona glicoprotéica, estimula la formación de eritrocitos (Glóbulos Rojos o hematíes)
Propanolol: atenúa manifestaciones físicas de ansiedad – Beta bloqueadores
Anfetaminas, esteroides, testosterona

Análisis
- Sangre: se pueden analizar cantidades muy pequeñas de sustancia, raro, costoso e intrusivo
- Cabello: uso a largo plazo (sustancias que se pueden acumular en el cuerpo humano – metales pesados),
costoso, mayor cantidad de muestra
- Orina: Barato, 1-4 semanas en el cuerpo, fácil de falsificar
- GS-MS: 15-500 ng/mL

Proceso analítico:
Serie de pasos a realizar para realizar el análisis de una muestra
Muestra: debe ser representativa, debe tener las mismas características que la población

1. Muestreo: Primer contacto con la muestra, toma de la muestra.


2. Preparación de la muestra: Tener el analito libre de interferencias, separarlo de la matriz, compatible con el
método de análisis
No hay procedimientos estandarizados de preparación de muestras (Existen normas INEN, ASTM, AOAC-
Alimentos)
Matriz: Todo lo que no es analito
3. Medición: Realizada en el equipo
4. Tratamiento de datos: Estadístico, depende de los objetivos del análisis
Estadística inferencial: Conclusiones sobre la población a partir de la muestra
Preparar el informe o reporte

Resultados:
Confiables-verdaderos
Garantizados
Requisitos de calidad
Metrología: aseguramiento de la calidad de los resultados
Muestra: Parte del todo, parte de la población (DEBE SER REPRESENTATIVA)
Error: no es hacer las cosas mal -> Pequeña desviación del valor que se considera verdadero
- El error es aditivo

Fuentes de error
Error total: Error de muestreo y Error de análisis
- Error de muestreo:
Lote, muestra y submuestra
- Error de análisis:
Instrumento de medida (desgaste, precisión), Operador (Apreciación, subjetividad), Factores ambientales
(Temperatura, luz, altura, humedad)
El analista es la mayor fuente de error en un análisis
El material volumétrico no se coloca en la estufa, se coloca etanol y se utiliza un compresor (material tipo A y B)
La apreciación es distinta de una persona a otra
Sustancias higroscópicas: absorben la humedad
En los laboratorios de análisis se reporta la incertidumbre, no la desviación estándar
Objetivos
Muestreo:
Consideraciones
Plan de muestreo:
• Número de muestras
• Tipo de muestra (homogénea, heterogena, sólida, líquida, gaseosa)
• Instrumentación (cómo se va a tomar la muestra)
• Costo
• Lote (montaña, bodega, barco)
• Manejo (en qué voy a tomar la muestra)
• Transporte
• Almacenamiento (congelarse)
• Tamaño de la muestra

“El método más sensible no puede entregar resultados confiables de una muestra mala muestra”
Se debe tener muestras de respaldo
Tomar en cuenta las condiciones ambientales

Tipos de muestreo
 Probabilísticos: equiprobabilidad-> todos los miembros de la población tienen la probabilidad de ser elegidos
Muestra representativa más recomendable
 Muestreo aleatorio simple: bolas, tabla de números aleatorios
 Muestreo aleatorio sistemático: primer elemento al azar – luego un sistema
 Muestreo aleatorio estratificado: estratos homogéneos
Dividir en categorías- se manejan porcentajes de cada estrato de la población
 Muestreo por conglomerados: Estudios sociales (parroquias, cantones, distritos, regiones)
 No probabilísticos:
 Muestreo por cuotas o accidental: cuotas
 Muestreo intencional o de conveniencia: voto
 Muestreo de criterio: el criterio prima
Personas que conocen el proceso, la producción, etc.

Criterios para Alimentos


 Clase de alimento: frutas, verduras, carne, pescado, balanceado para animales, lácteos, etc. Se clasifica por
el componente mayoritario.
 Tamaño del lote: Unidades de producción (botellas, latas, frascos)
 Naturaleza del posible efecto: Contaminación bacteriana, toxinas, residuos químicos
 Grado de riesgo: Alto o bajo
 Criterios de aceptación: ausencia de patógenos, adulteración, límites de tolerancia, normas de composición
 Grado de confianza analítica: 95% de confianza – riesgo alto : 99% de confianza

Preparación de la muestra
Es la mayor fuente de error en el análisis
Cuantitativo->Tomar valores para los cálculos
Operaciones previas (Operaciones sobre la muestra previo el análisis)
- Trituración: Disminuir el tamaño de partícula y aumentar la superficie de contacto
- Tamizado: Separar por tamaños, seleccionar el tamaño adecuado y homogeneizar la muestra
- Secado: Eliminar el agua (debido a microorganismos, puede ser interferencia)
Concentrar (eliminar solventes)
Se volatiliza
Se realiza en una estufa (puede ser de vacío->disminuye el punto de ebullición), liofilización (alimentos,
fármacos-> -30°C, alto vacío) -> se protege el compuesto activo
- Calcinación: Volatilizar materia orgánica (400°C-1200°C)
Se realiza en una mufla (hecha con material refractario)
Rx o preparar compuestos de interés
Microondas: Reduce el tiempo de horas a minutos – disgregación de la muestra (preparación de la muestra)
(secado-calcinación-extracción-solubilización)
- Solubilización: tratamientos ácidos o básicos (romper la matriz y liberar los analitos) – En frío o en caliente –
mechero o plancha (baño de aceite o de arena) -> NO CON SUSTANCIAS VOLÁTILES
La preparación de la muestra demanda mayor tiempo, dinero, reactivos, etc.

Procesos de separación
Si hay interferencia es necesario hacer procedimientos de separación
Interferencia: enmascara el analito- error al cuantificar- Tiene propiedades parecidas al analito
- Cristalización: modificar la solubilidad (cristalizar la interferencia o el analito)
- Destilación: Diferentes puntos de ebullición
- Extracción L-L: Líquidos no miscibles- solvente afin a los analitos

Derivatización: derivar el analito a otra sustancia

GAS
- Analizar como gas ( filtrar el gas)
- Líquido (condensar la muestra)
Atrapamiento en fase líquida -> absorción – se burbujea el gas
Cromatografía gas-líquido
- Sólido
Atrapamiento en fase sólida -> adsorción (carbón activado o silica) – se adhiere a un soporte poroso
Cromatografía gas-sólido

LÍQUIDO
- Gas -> volatilización o evaporación
- Líquido -> Destilación (condensación)
Extracción L-L (puede ser a Contracorriente)
- Sólido -> Precipitación ( cambio químico)
Electrodeposición (galvanizado, zinc)
Cristalización

SÓLIDO
- Gas -> sublimación (liofilización) -> cromatografía de gases
- Líquido -> disolución (NO ES LO MISMO QUE DILUCIÓN) -> solubilización
- Sólido -> tamizado
Trituración
Técnicas magnéticas

Medición
Se debe tener alguna propiedad del analito que sea medible
Propiedades generales:
 Masa: gravimetría, balanza, precipitado
 Volumen: volumetría, neutralización, redox, complexometría -> indicadores
 Interacción de las sustancias con la radiación electromagnética
 ABSORCIÓN DE LA RADIACIÓN
Se puede absorber en la región visible: se ven colores (400-800 nm)
También en ultravioleta
ANALITO EN SOLUCIÓN (sin sólidos)
𝐼
𝐼0 𝐼 𝑇=
𝐼0
𝐼 < 𝐼0

Cantidad de luz absorbida es directamente proporcional a la concentración


Técnicas: Espectrometría UV-VIS – Resonancia magnética nuclear – Espectrofotometría de absorción atómica

 EMISIÓN DE LA RADIACIÓN
Radiación: Energía que se propaga como ondas electromagnéticas
Técnica: Espectroscopia de emisión
Emisión: UV – Visible – Fluorescencia – Rayos X

 DISPERSIÓN DE LA RADIACIÓN
Al chocar la luz con las partículas esta se dispersa en varias direcciones
Hace que se vea turbia una solución por la presencia de sólidos
La luz que se ha dispersado puede relacionarse con la concentración
Técnica: Turbidimetría – Nefelometría (contaminación de aire y agua: sólidos en suspensión, humos,
nieblas, polvos)
Turbidímetro de doble haz:
- Blanco: mido sin partículas el solvente donde están los analitos
- Dos haz : 1 atraviesa la muestra / 1 atraviesa el blanco

 REFRACCIÓN DE LA RADIACIÓN
Refracción: Cambio de dirección de la radiación por cambio de medio
Técnica: Refractometría (índice de refracción) – medir concentración de sólidos solubles

 DIFRACCIÓN DE LA RADIACIÓN
Técnica: Difracción de Rayos X – Determinación de estructuras cristalinas (cambio de ángulo)

 ROTACIÓN DE LA RADIACIÓN
Técnica: Polarimetría (concentración de isómeros ópticos)

 Propiedades eléctricas
 Potencial eléctrico (potenciometría)
Concentración de una especie electroactiva en disolución
Ejemplo: Potencial Hidrógeno
 Conductancia eléctrica (conductimetría)
Deja pasar la electricidad
Salinidad del agua, titulaciones conductométricas
Propiedad inversa a la resistencia eléctrica
Conductividad -> Conductancia específica de un material
 Corriente eléctrica (polarografía) -> subclase de la voltamperometría
 Masa depositada (electroanálisis) -> Electroquímica

 Propiedades térmicas
 Variación de peso (termogravimetría)
 Variación de temperatura (análisis térmico diferencial) -> cerámica, vidrio, polímeros

 Radiactividad
 Carbono 14 -> isótopo radiactivo que está en el ambiente por los rayos cósmicos.
Procesos de Separación

Extracción: Es un proceso de separación que se basa en la diferencia de solubilidad de un soluto en un solvente

 Extracción S-L:
La matriz es un sólido
Soxhlet: generalmente para la extracción de aceites / Es el más eficiente / No tiene contacto la muestra con el
vapor, si no con el líquido condensado
Solventes típicos: hexano o heptano
Es un método de referencia para comparar con cualquier otro método de extracción

 Extracción L-L:
Se usa generalmente un embudo
Solvente selectivo, inmiscible
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 1
Ley de distribución de las fases 𝐾𝐷 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 2
Hay que agitar para mejorar la superficie de contacto
Ejemplo: Solución acuosa de cafeína – Solvente orgánico no miscible con el agua (benceno, cloroformo)

Limitantes Ventajas

• Tiempo • Se da a temperatura
• Presenta pérdidas ambiente
• El solvente puede ser tóxico o • Costo (barato ->
no amigable con el medio instrumentación sencilla)
ambiente • Técnica simple y accesible
• Tratamiento posterior
relativamente sencillo

 Extracción en fase sólida (SPE)


Cartuchos de silica hidratada
Diferentes cartuchos de acuerdo a lo que se va a extraer
Cartuchos de polipropileno
Sirve para extraer compuestos polares o no polares
Normalmente se extraen soluciones acuosas
El analito debe estar en solución
Los gastos son muy pequeños en volumen
Proceso:
- El cartucho se acondiciona, se coloca el solvente (solvatación: se coloca el solvente
correspondiente)
- Cargar la muestra en solución ( cartucho afin a las impurezas o a los analitos)
- Recuperar con solvente selectivo (*si es afin a las impurezas lavar y desechar el cartucho)
- NO SE DEBEN SATURAR LOS CARTUCHOS (pérdidas)

Ventajas Desventajas

•Volúmenes de trabajo variables dependiendo de la •Costo de cartuchos


concentración del componente de interés (+conc-> +cap •Son descartables
cartucho)
•Alta capacidad (60 mg)
•concentrar los analitos
•Es selectivo (variedad de materiales de empaque)
•cantidades bajas de solvente
•El procesamiento de la muestra se puede hacer en campo
- Cartuchos no polares: hidrocarburos
- Cartuchos polares: alcaloides, azúcares, alcoholes
- Cartuchos de intercambio iónico: resinas aniónicas (amonio), resinas catiónicas (sodio,
potasio)
- Material de empaque: silica hidratada (óxido de silicio con agua) – técnica preparativa para
cromatografía de gases y cromatografía líquida – se pueden procesar varias muestras

 Microextracción en fase sólida (MSPE)


Cromatografía de gases -> compuestos volátiles
Los compuestos volátiles se encontraran en el espacio de cabeza
De la aguja sale una fibra que atraviesa el cartucho (biselada)
Los compuestos volátiles afines se van a adsorber en esa fibra luego de un determinado tiempo
Realizar la desorción (térmica + común)
También, se puede sumergir en solvente si la muestra es líquida
Aplicaciones: maduración de los quesos o vinos.

Cromatografía
Método FÍSICO de separación de mezclas complejas (no hay rx química)
Se basa en el principio de retención selectiva (los analitos se retienen por diferentes propiedades)
Puede ser cualitativa o cuantitativa
Fase móvil: Fluido que arrastra a la muestra a través de la fase estacionaria (gas, líquido) – A veces interviene en la
separación
Fase estacionaria: Sólido o líquido en un soporte sólido que interaccionará con los componentes de la muestra
separándolos
Revelado físico: Exponer el papel a luz UV, se observa fluorescencia
Revelado químico: Se utilizan reactivos químicos

 Cromatografía de papel
- Fase estacionaria: papel cromatográfico (tamaño de poro y tamaño de papel)
- Fase móvil: diferentes solventes
- Proceso:
1. Selección de la capa fina (número de poros, tamaño del papel)
2. Selección del solvente afin con los analitos
3. Se coloca la muestra con capilares varias veces
4. Se coloca inclinada en la cámara de desarrollo con la fase móvil, Se cierra la cámara y se
satura la cámara
El solvente no tiene contacto directo con la muestra
5. Desarrollo: Sube el solvente por capilaridad hasta ¾ partes de la placa
6. Se marca las manchas (frente del solvente y las manchas)
7. Se deja evaporar el solvente en la sorbona
8. Si las manchas no tienen color se procede al revelado
- Se tiene cromatografía ascendente o descendente

 Cromatografía bidimensional
- Papel cuadrado. Eluye con solvente1, se evapora el solvente, se gira 90°, se hace pasar un
solvente de diferente polaridad.
- Revelado químico: sustancia reveladora que genera un complejo coloreado (se mejora
calentando en una estufa)
- Si quiero cuantificar necesito varios estándares o uno solo – Solución madre de la
concentración más alta (realizar curva de calibración) – Se diluye (5 puntos de concentración)
– aplico la técnica.
- La separación depende de la identidad de la sustancia (recorrido)
- El área de la mancha depende de la concentración
- Se debe marcar las áreas apenas se forman las manchas y anotar el color por que los complejos
no son estables
𝑑𝑖
- Interpretación: Cualitativa 𝑅𝑓 = ∗ 100 Recorrido relativo (se expresa en números enteros)
𝑑𝑠
Cuantitativa: Curva de calibración
En curvas de calibración con disoluciones independientes (+error) o diluciones sucesivas (con
concentraciones bajas no se recomienda diluir)
Solo se puede cuantificar cuando la propiedad es directamente proporcional a la
concentración (no se puede cuantificar fuera del rango)

Análisis espectrofotométricos

1. Características de una onda electromagnética


La radiación electromagnética es una onda
Propiedades: Longitud de onda – Frecuencia – Amplitud
2. Ley de Lambert y Beer
La cantidad de luz absorbida depende de:
- El tipo de sustancia por la que atraviesa la luz
- La distancia que recorre la luz
- La concentración de la sustancia
𝐴 =𝑐∗𝑑∗Ɛ
𝐼 𝐼0
𝐴 = − log(𝑇) = − log ( ) = log( )
𝐼0 𝐼
3. Espectro electromagnético
UV-VIS
Los colorímetros trabajan en el rango visible
4. Efectos de la radiación UV y visible sobre las moléculas
La radiación UV y visible al actuar sobre las moléculas puede producir excitaciones electrónicas sobre
determinados grupos funcionales, que en caso de la luz visible se llaman grupos cromóforos (responsables del
color – responsables de la absorción de la radiación)
Grupos cromóforos: Metales de transcición, dobles y triples enlaces, sistemas aromáticos, grupo carbonilo,
imino, nitro

Longitud de onda de máxima absorbancia (SOLO SE DEBE CUANTIFICAR A ESTA LONGITUD DE ONDA)

Cuando hay varias sustancias se puede utilizar otra banda pero se cuantifica en exceso o defecto (análisis
semicuantitativo)

Grupos auxocromos: grupos sustituyentes del cromóforo y alteran la longitud de onda de máxima
absorbancia. (halógenos, metilo, hidroxi, alcoxi, amino)

Efectos:
- Desplazamiento batocrómico: absorción -> mayor longitud de onda
- Desplazamiento hipsocrómico: absorción -> menores longitudes de onda
- Efecto hipsocrómico: banda -> mayor intensidad
- Efecto hipocrómico: banda -> menor intensidad