PRÁCTICA 3.

VERIFICACIÓN DE ESPECTROFOTÓMETROS

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➢ Introducción

El espectrofotómetro constituye una herramienta fundamental en el

laboratorio. Más del 90% de las determinaciones que se realizan en
Química tienen como paso final la lectura de una absorbencia o una
transmitancia.

La revisión del rendimiento de los espectrofotómetros UV-VIS es

indispensable en el control de la calidad. Para llevar a cabo este tipo
de comprobaciones es común el empleo de substancias estándar
cuyas propiedades espectrales han sido estudiadas cuidadosamente.
El correcto desempeño de los espectrofotómetros es entonces
determinante, en última instancia, de la calidad analítica de los
resultados que emite el laboratorio.

➢ Objetivo.

El alumno verificará el correcto funcionamiento de los

espectrofotómetros por medio de la evaluación de tres
características: calibración, sensibilidad y linealidad.

➢ Resultados.

Tabla 1. Espectro de absorción del CoCl2, para verificar la calibración

y sensibilidad del aparato.

Longitud de
onda Absorbancia
450 0,14
460 0,2
470 0,29
480 0,34
490 0,39
500 0,43
510 0,485
520 0,51
 530 0,53
540 0,5
550 0,42

Figura 1. Espectro de absorción del cloruro de cobalto obtenido

en el Spectronic 20 Bausch & Lomb. Esta figura nos permitirá hacer
una comparación con el espectro de absorción del CoCl2 teórico,
verificando así la calibración y sensibilidad de este aparato.

Tabla 2. Verificación de la linelidad.

Concentración Absorban
de CoCl2 cia
26,5 0,24
53 0,4
106 0,81
159 1,1
212 1,48
265 1,6
318 1,9
371 2
424 2
477 2
530 2

Figura 2. Curva de calibración de K2Cr2O7. En el gráfico anterior se

verificará la linealidad del Spectronic 20 Bausch & Lomb. La línea
pintada de negro indica la recta que se debió haber obtenido.

➢ Calculo del factor:

F=concentraciónabsorbancia=1060.81 = 130.8641

Tabla 3. Determinación del porcentaje de error.

 Valor Valor % de
observado real error
31,41 26,5 0,19
52,35 53 -0,01
106,00 106 0,00
143,95 159 -0,09
193,68 212 -0,09
209,38 265 -0,21
248,64 318 -0,22
261,73 371 -0,29
261,73 424 -0,38
261,73 477 -0,45
261,73 530 -0,51

Figura 3. Verificación del % de error.

Tabla 4. Verificación de calibración y sensibilidad de varios equipos

espectrofotométricos

Espectrofotóm Calibraci Sensibilid

Equipo etro ón ad
1 spectronic 20 530 0,53
2 spectronic 20 510 0,464
3 génesis 4 510 0,467
4 spectronic 23 510 0,52
5 génesis 8 530 0,46
6 génesis 5 510 0,479

➢ Discusión:

De acuerdo con los resultados obtenidos el Spectronic 20 Bausch &

Lomb, no es apto para un uso o determinaciones en el área industrial
o clínica, este se puede usar solo con fines de enseñanza, estas
aservaciones se constatan con la verificación de calibración (tiene
que coincidir con la longitud de onda de referencia), sensibilidad
(debe coincidir con la absorbacia esperada) y linealidad (al trazar la
recta esta debe ser lineal):

Calibración y Sensibilidad: el aparato Spectronic 20 Bausch & Lomb

no esta calibrado y la sensibilidad que presenta es muy baja ya que
con base a la referencia bibliográfica la longitud de onda a la que
absorbe mayormente el CoCl2 es a 510 nm con una absorbancia
máxima de 0.5; en la práctica obtuvimos una mayor absorbancia de
0.53 a 530 nm lo cual se aleja de los valores estándar dando lugar a
una aparato mal calibrado y poco sensible.

En la tabla 4 con base a la verificación de la calibración y sensibilidad

se muestra que los aparatos mas confiables son los génesis ya que
varian muy poco los datos obtenidos de los esperados.

Con respecto a la linealidad el aparato no lee concentraciones altas

de dicromato de potasio lo cual indica que no hay linalidad ya que al
graficar las concentraciones contra absorbancia se llega a una
determinada concentración donde la absorbancia se vuele constante
generando una pequeña “curva” en valores altos de esta. Por lo tanto
la linealidad no es confiable porque se satura desde concentraciones
pequeñas.

Al calcular el porcentaje de error se obtuvieron valores positivos pero

mayormente negativos, lo cual se debe principalmente al mal uso de
instrumentos, reactivos y aparatos por el analistay a la linealidad
presente en el espectrofotómetro.

➢ Conclusiones:

1. El Spectronic 20 Bausch & Lomb esta descalibrado, no presenta

sensibilidad ni linealidad
2. El Spectronic 20 Bausch & Lomb no es apto para su uso
industrial o en el área de la salud.
3. Los espectrofotómetros génesis son los que tienen mayor
confiabilidad para su uso.
4. La verificación de los espectrofotómetros es importante para
poder obtener resultados confiables y trabajar con calidad.

➢ Bibliografía.

Skoog. Principios de Análisis Instrumental. Ed. Mac Graw Hill. 2002.