Grupo G Karolain Dayan Junco

Juan Diego Tibaquicha

Informe 1 laboratorio de química

Karolain Dayan Junco

Juan Diego Tibaquicha

02 de Octubre del 2018

Resumen
El ADN es una macro molécula química, esta pertenece al grupo de los ácidos nucleicos.
Forma los cromosomas del núcleo presentes en las células y es portador de la información
genética de cada individuo. El código genético (formado por el ADN) es un lenguaje
basado en combinaciones que se pueden formar a partir de la guanina, timina, citosina y
adenina, (uracilo en vez de timina en el ARN). Cualquier característica biológica está
determinada por su orden y forman un triplete; cada triplete es una palabra cifrada o señal
que conduce a un aminoácido. Este constituye el material genético de los organismos y es
el componente químico principal presente en las células tanto animales como vegetales
controlando todos los procesos vitales que en ella acontecen.

Por otra parte, la separación de este es un proceso de métodos que se intervienen en

procesos naturales provocando lisis o separación del mismo de la estructura celular y de
moléculas presentes en el sistema, liberando por ultimo dicha estructura. Estas
disgregaciones se inducen a partir de diferentes sustancias a las cuales nombraremos lisis.
Todo esto por medio de procesos de centrifugado que mezclaran las sustancias de tal forma
que pueda reaccionar.

Palabras clave: Separación, ADN, macromolécula, estructura, biológica, código genético.

Abstract
DNA is a macro chemical molecule; this belongs to the group of nucleic acids. It forms the
chromosomes of the nucleus present in the cells and is the carrier of the genetic information
of each individual. The genetic code (formed by DNA) is a language based on
combinations that can be formed from guanine, thymine, cytosine and adenine, (uracil
instead of thymine in RNA). Any biological characteristic is determined by its order and
form a triplet; Each triplet is an encrypted word or signal that leads to an amino acid. This
is the genetic material of organisms and is the main chemical component present in both
animal and plant cells controlling all vital processes that occur in it.
On the other hand, the separation of this is a process of methods that intervene in natural
processes causing lysis or separation of the cell structure and molecules present in the
system, ultimately releasing said structure. These disintegrations are induced from different
substances to which we will name lysis. All this by means of centrifugation processes that
mix the substances in such a way that it can react.

Keywords: Separation, DNA, macromolecule, structure, biological, genetic code.

Facultad de Ciencias
Plantilla para presentación de trabajos escritos Página 1 de 6
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(1) Introducción
El presente informe contempla una serie
de pasos que describiremos
detalladamente a continuación y la
explicación conceptual de cada uno de los
avances que se realicen en el proceso de
extracción.
Tras la sustracción de la sangre a partir de
un tejido humano, se obtiene la extracción
del ADN, esta requiere un orden de etapas
elementales de separación en donde se
retira material que se encuentra alrededor
del ADN para lograr su liberación en
forma de mota para su posterior
observación. En el siguiente laboratorio,
seguiremos minuciosamente pasos
adecuados para su extracción e
indagación.
El ácido desoxirribonucleico es una
biomolécula que permite la continuidad y
evolución de las especies, el ADN
almacena la información genética
codificada, este, está presente en todas las
células de los seres vivos y siempre tiene
la misma composición (bases
nitrogenadas, ácidos fosfóricos y y fundamentos. Para obtener ADN a
pentosas). La extracción de las células
donde se halla confinado, es una serie de
pasos previos analíticos y diagnósticos los
cuales llevaremos a cabo, junto con
ciertas precauciones de contacto que
evitaran la contaminación por material
biológica humana, la contaminación
microbiológica, e incluso química.
(2) OBJETIVOS
• Identificar las etapas indispensables
en los protocolos de extracción de
ADN
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• Comparar varias técnicas de
extracción de ADN
• Realizar un procedimiento modelo
para la obtención de ADN.
(3) Marco teórico
El primer paso en cualquier protocolo de
separación es el rompimiento del material
inicial, ya sea de origen viral, bacteriano,
vegetal o animal. El método utilizado
para romper la célula debe ser tan leve
como sea posible con el fin de causar el
menor daño posible al ADN. La lisis
celular se puede hacer por acción
mecánica, pulverizando el tejido con hielo
seco o nitrógeno líquido, también se
puede utilizar la degradación enzimática
de la pared celular (si está presente) y
lisis con detergentes de las membranas
celulares. Seguido al rompimiento celular
la mayoría de métodos involucran una
desproteinización, lo cual se lleva a cabo
con un solvente orgánico, seguido de una
precipitación con isopropanol o etanol y
posterior solubilizarían con agua o
tampón. Existen diferentes técnicas para
la extracción del ADN, aunque todas
conservan el uso de los mismos principios
partir de leucocitos totales (obtenidos de
sangre periférica), células en cultivo,
tejidos animales, vegetales, levaduras y
bacterias; se usa generalmente una
técnica de cuatro pasos secuenciales:
• El primer paso consiste en la lisis de las
células y los núcleos.
• Luego, la separación del ADN a partir
de sangre total involucra la lisis de
eritrocitos, seguida por una lisis de
leucocitos y de sus núcleos.
• Las proteínas celulares son entonces
removidas por un paso de precipitación
salina, y
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• Finalmente el ADN genómico es al líquido inicial observamos

concentrado por precipitación con
isopropanol
. agrega 200 micrómetros de
El ADN purificado por medio de este
proceso, está listo para ser utilizado en
diferentes aplicaciones, las cuales
involucran: amplificaciones (PCR),
digestión con endonucleasas de
restricción, Southern blot y Dot blot.
Existen otras técnicas que permiten la
obtención de ADN genómico a partir de
muestras sólidas y líquidas, que permiten
la separación simple, rápida, segura y
eficiente del ADN. Esta separación se
basa en la utilización del isotiocianato de
guanidina, como solución de lisis celular,
lo cual permite una precipitación selectiva
del ADN con etanol y solubilización en
agua o en 8 mM de NaOH. Este
procedimiento se puede realizar en 30
minutos, recobrando un 70% a un 100%
del ADN.
(4) DISCUSIÓN Y
RESULTADOS
En una muestra de sangre
LEUCOSITOS:
como la sangre se torna más clara,
sin embargo a la mezcla se le
(buffer AL) luego disponemos la
sustancia a mezclar durante 5
segundos en el vórtex, lo que
ocurre a aquí es que. El buffer
Tienen la propiedad de mantener
estable el pH de
una disolución frente a la adición
de cantidades relativamente
pequeñas de ácidos o bases
fuertes. Este hecho es de vital
importancia en diversos contextos
en donde es necesario mantener el
pH en un umbral estrecho, por
ejemplo, con un leve cambio en la
concentración de hidrogeniones en
la célula se puede producir un
paro en la actividad de las
enzimas. Teniendo en cuenta que
el bufferBuffer AL se suministra
como un tampón de lisis de 264
ml que se utiliza durante el
aislamiento del ADN cuando se
siguen los protocolos QIAamp y
DNeasy.

La separaci6n física de los distintos tipos

de células sanguíneas es una práctica
biomédica que exige prontitud y destreza
para asegurar mayor viabilidad celular.
Esto es posible con el protocolo aquí
descrito ya que permite que una vez
obtenida la muestre de sangre, esta pasa
de inmediato a ser centrifugada.

1. En un tubo de ensayo agregamos

20 micrómetros de proteína k o
QIAGEN produce el quid de
extracción, sacados con la micro
pipeta, después procedemos
adicional 200 micrómetros de
sangre periférica, al adicional esta
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2. Una vez lista la mezcla de los
diferentes líquidos procedemos a
calentar durante 10 min a 56 c, La
temperatura tiene efectos sobre
la medida del pH porque su
variación afecta a todos los
elementos implicados, buffers
de calibración, muestras, y
electrodos, que debemos
conocer y tener en cuenta
cuando necesitamos medidas de
precisión. Para preparar
las soluciones de calibración
(buffers) debemos respetar la
temperatura de trabajo indicada
por el fabricante, este punto es
crítico para evitar errores de
medida.
3. Al retirar el tubo de ensayo con la
mezcla esta se tornó de un color
café oscuro con la reacción al
agua caliente, al sacarlo nos
disponemos a adicionar 200
micrómetros de etanol y lo
llevamos de nuevo al vórtex pa
hacer una especie de sopa es decir
96- 100 % = 620 micrómetros de
lisado a la columna.
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- En el siguiente paso
transvasamos la muestra al
tubo eppendorf y del tubo a la
columna cuidando que la
muestra no humedezca el
borde, luego lo llevamos a la
centrifuga a 6000 rpm * 2min,
sin embargo lo peculiar de este
procedimiento es el uso de la
columna ya que es Apropiado
para purificación y limpieza
de DNA post RT.
- La columna y placa de
filtración permiten la elución
de ADN en pequeños
volúmenes de agua o tampón
TE.
- El ADN eludido es apropiado
para el uso en PCR,
secuenciación de ADN,
ligación, digestión enzimática,
transcripción de ARN, radio
marcaje, etc....
- Podemos observar en la
imagen la columna de célica
-
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4. Al sacar el tubo de la centrifuga
una capa café adherida al algodón
es la que llamaríamos ADN,
desechamos el tubo eppendorf y
conservamos l columna con el
restante de leucocitos , para
después meterla en otro tubo
5. Antes de meter la columna de la
muestra del ADN a un nuevo
tubo, le adicionamos buffer AW1
contiene un lavado riguroso con
baja concentración de quanidina, y
ay mismo pasamos la columna a
otro tubo, la llevamos a
centrifugar a 6000 rpm * 2min.
- La reacción que hace el buffer
AW1 Son tampones de lavado
suministrados como
concentrados, ya que contiene
un lavado riguroso con baja
concentración de quanidina.
- Al retirar el tubo de la
centrifuga con la columna
adentro observamos que el
algodón ya no estaba del color
café oscuro como en un
principio sino que esta vez, la
columna presentaba una
delgada capa transparente
sobre el algodón, dicha capa
debe contener el ADN
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6. En este paso hacemos el mismo
procedimiento que anteriormente
solo que agregamos 500
micrómetros de tampón AW2 , y
pues teniendo en cuenta desechar
los tubos de recolección y usamos
nuevos cada centrifuga, esta
centrifugación duro más que las
otra con un tiempo de 7 min a
6000 rpm
- AW2 es una solución de etanol
basada en Tris para eliminar
las sales.
7. una vez finalizado el paso anterior
sacamos nuevamente la columna
de los tubos usados los
desechamos, la pasamos a un tubo
nuevo y agregamos 200
micrómetros de buffer ae y
centrifugamos a 6000 rpm * 2min
(5) CONCLUSIONES
- Por lo que encontré, el
tampón AL contiene sales de
guanidina para una mejor
fijación de la columna y
detergente.
- al realizar adecuadamente el
procedimiento sobre
extracción del AN pudimos
observar la estructura fibrilar
del ADN
(6) BIBLIOGRAFIAS
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Kustimur S, Balaban N, et al.
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Juan Diego Tibaquicha

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47/INFORME_EXTRACCION_
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