TECNICAS DE NUMEROS MÁS PROBABLES (NMP)

Daniela Galvis Hernández, Yandry María Urango Bravo, Dina Luz Pereira Fuentes,
Juan Carlos Flórez Córdoba
MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
UNIVERSIDAD DE CORDOBA-FACULTAD DE INGENIERIAS
INGENIERIA DE ALIMENTOS
BERASTEGUI-CORDOBA
2019

INTRODUCCION

En nuestro campo es muy importante tener un control del número de

microorganismos que pueden estar presentes en un alimento, para así saber, si
están aptos para el consumo cumpliendo con los parámetros establecidos. Un
método para obtener datos es la técnica del número más probable la cual nos
permitirá estimar de una forma eficiente la presencia de microorganismos en una
muestra determinada.

Es muy importante destacar que este tipo de método se utiliza en microorganismos

de difícil aislamiento en medios sólidos, también es utilizado para determinar el
número de células de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio líquido.

OBJETIVOS - agua peptonada 0.1%

- alcohol 70%
- Conocer y aplicar la técnica de
- pipeta graduada
números más probables.
- tubos de ensayo
- Identificar la presencia de
- cajas de petric
coliformes (fecales o totales)
- asa redonda
presenten en una muestra de
- caldo billis verde brillante
queso
lactosa
- Determinar la población de
- agar EMB
coliformes fecales y totales en
- caldo triptófano
alimentos utilizando la técnica
- reactivo de Kovacs
de números más probables
- Algodón
(NMP).
- Mechero
MATERIALES - Encendedor
- Cinta de enmascarar
- Muestra (queso fresco) - Marcador sharpie
- Bolsa plástica para - Balanza analítica
homogeneizado
 (observando la formación de un anillo
rojo en la superficie del medio
METODO triptófano, adicionando 0.2 ml o 5
COLIFORMES TOTALES gotas de reactivo de Kovacs en el
caldo triptófano).
La determinación de microorganismos
coliformes totales por el método del RESULTADOS
Número más Probable (NMP), se COLIFORMES TOTALES
fundamenta en la capacidad de este
grupo microbiano de fermentar la PRUEBA PRESUNTIVA Imagen (1)
lactosa con producción de ácido y gas
al incubarlos a 35°C  1C durante 48
h., utilizando un medio de cultivo que
contenga sales biliares. Esta
determinación consta de dos fases, la
fase presuntiva y la fase confirmativa.

En la fase presuntiva el medio de

cultivo que se utiliza es el caldo billis
verde brillante lactosa que nos permite
el análisis de coliformes totales.
Durante la fase confirmativa se
emplea el agar EMB que nos permite
mejor rendimiento en el aislamiento
selectivo de enterobacterias y otras
especies de bacilos Gram negativos.

La determinación del número más

probable de microorganismos PRUEBA CONFIRMATIVA
coliformes fecales se realiza a partir de
Imágenes (2)
los tubos positivos de la prueba
presuntiva y se fundamenta en la
capacidad de las bacterias para
fermentar la lactosa y producir gas
cuando son incubados a una
temperatura de 44.5  0.5°C por un
periodo de 24 a 48 h.

Finalmente confirmar como coliformes

de origen fecal los tubos que
presentan gas en el caldo lactosado
bilis brillante y producción de indol
 ANALISIS DE RESULTADOS Y
DISCUSIÓN

COLIFORMES TOTALES

Para la prueba presuntiva de

coliformes totales realizada mediante
la técnica de números más probables,
se observó que sí había presencia de
microorganismos en el queso fresco
analizado, debido a que se observo
presencia de gas y turbidez en los
COLIFORMES FECALES tubos que contenían el caldo billa
verde lactosa con tubo Durham, por lo
tanto, la prueba de coliformes totales
resulto positiva. En las imágenes (1)
se observa la prueba luego de las 24
horas de incubación.

Para la prueba confirmativa de

coliformes totales sacamos de los
tubos de 10-1, 10-2 y 10-3 y lo
sembramos en una caja de petric con
el medio EMB posteriormente dividida
en 3 partes iguales. Y dejamos
incubadas por 24 horas; se observó
crecimiento de colonias de color negro
azulado con brillo verde metálico.
Imágenes (2)

Los microorganismos fermentadores

de lactosa originan colonias de color
azulado-negro, con brillo metálico. Las
colonias producidas por
microorganismos no fermentadores de
lactosa son incoloras. Algunas
bacterias Gram positivas (cepas de
estafilococos, enterococos) y
levaduras, pueden crecer, originando
colonias incoloras y puntiformes; esto
nos permite confirmar que nuestras
muestras son positivas para
Coliformes totales.
COLIFORMES FECALES
Para el duplicado que se le realizo
para la prueba confirmativa de
coliformes fecales en el caldo brilla
nos dio positiva para las diluciones 10-
1, 10-2 y 10-3 donde los
microrganismos fueron capases de
fermentar la lactosa ya que se dio la
presencia de gas y turbidez donde su
presencia en alimentos puede
deberse a la elaboración inadecuada,
contaminación del alimento ya
preparado por el manipulador.
Para el duplicado que se le realizo en
el caldo triptófano este nos arrojo un
resultado donde se observó un anillo
rojo en la superficie para 10-2 pone de
manifiesto la presencia de la encima
Triptofanasa producida por el
microrganismo lo que nos indica que
hay presencia.
estimación de los resultados se
encontraron microorganismos de este
tipo en dicha muestra. Indicando así
que la calidad del queso fresco es
inaceptable.
Este análisis nos indicó también que
los manipuladores en cuanto a la
elaboración del queso fresco no
mantienen higiene al momento de
elaborar dicho producto, ya que estos
son la mayor vía de infección de
coliformes que tienen los alimentos.
Cabe destacar, que una sola prueba
no puede ser el parámetro para decidir
por completo la calidad de un
alimento, ya que la identificación de
coliformes totales y fecales no
garantiza la ausencia de virus y
parásitos en el alimento en cuestión.
BIBLIOGRAFIAS

CONCLUSION

Los altos niveles de contaminación de

origen fecal y total hacen necesario un
estricto control de calidad
microbiológica de los alimentos. En
este caso, al llevar a cabo la técnica
de números mas probables para la
identificación de coliformes fecales y
totales en una muestra de queso
fresco se obtuvieron resultados
negativos debido a que en la