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DETERMINACION DE PROTEINAS

I. INTRODUCCION:

El término "proteína” proviene de la palabra griega “proteous”, que significa


primero. Las proteínas son los compuestos bioquímicos más abundantes en los
seres vivos. Son verdaderamente especiales por ser las sustancias centrales en
casi todos los procesos biológicos. A primera vista podría pensarse en las
proteínas como polímeros lineales de aminoácidos unidos entre sí por medio de
enlaces peptídico. Sin embargo, la secuencia lineal de aminoácidos puede adoptar
múltiples conformaciones en el espacio.

La estructura primaria viene determinada por la secuencia de aminoácidos en la


cadena proteica, es decir, el número de aminoácidos presentes y el orden en que
están enlazados. La conformación espacial de una proteína se analiza en términos
desestructura secundaria y estructura terciaria. La estructura secundaria es el
plegamiento que la estructura primaria adopta gracias a la formación de puentes
de hidrógeno entre los átomos que forman el enlace peptídico. La estructura
terciaria, en cambio, se refiere a la disposición tridimensional de todos los átomos
que componen la proteína.

Presentan numerosas funciones. Por ejemplo, casi todas las enzimas están
compuestas de estructuras proteicas. Las enzimas son los catalizadores que
permiten que ocurran casi todas las reacciones químicas en los seres vivos. La
vida, como la conocemos no sería posible sin las enzimas. Junto con los lípidos,
las proteínas son los componentes estructurales de las membranas celulares. Las
proteínas de las membranas ayudan a transportar sustancias a través de la doble
capa lipídica y trabajan como sitios receptores de los neurotransmisores y de las
hormonas. Las proteínas son responsables del soporte estructural y del
movimiento del cuerpo humano.

El tejido conectivo está compuesto de fibras proteicas fuertes que ayudan a unir la
piel y el hueso. Los tejidos musculares están compuestos de proteínas que se
contraen; los huesos se mueven por músculos que se contraen. Otras funciones
de las proteínas incluyen el transporte y almacenamiento de iones y moléculas;
por ejemplo, transportar el oxígeno de los pulmones a las células (hemoglobina).
Numerosas hormonas, agentes de comunicación química, son estructuras
proteicas. Una de las líneas de defensa más importantes contra los agentes
infecciosos son las proteínas denominadas inmunoglobulinas

La siguiente práctica se realizara con la finalidad de que se pueda determinar la


concentración de proteínas totales de suero sanguíneo y en el suero de la leche
de vaca y leche de soya.
II. REACTIVOS Y MATERIALES:

Reactivo de Biuret.
Espectrofotómetro.
Centrifuga.
Aguja descartable Nº21.
Algodón y gasa.
Alcohol medicinal.
Pipetas de 1 y 5 ml.

ESPECTRÓMETRO

GASA
ALGODÓN
III. PROCEDIMIENTO:

 Obtención del suero:

En un matraz medir 50 ml. de leche de soya.


En un matraz medir 50 ml. de leche de vaca.
En un tubo de ensayo obtenemos 15ml. de de muestra de sangre.
Adicionamos limón a los matraces contenidos con leche de soya y de vaca,
hasta llegar a un pH 4
Incubamos a 37 ⁰C durante 30min.
Filtramos ambas soluciones en gasa.
Medimos 10 ml. del filtrado y centrifugamos a 100 RPM durante 5min.
Separar el sobrenadante para su evaluación.

Obtención del Sobrenadante luego del Centrifugado

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES

TUBOS (ml.) I II III IV


Plasma o suero sanguíneo diluido al 1/20 1.0 -- -- --
Suero de leche de soya -- 1.0 -- --
Suero de leche de vaca -- -- 1.0 --
Agua destilada (control) -- -- -- 1.0
Reactivo de Biuret 4.0 4.0 4.0 4.0
Mezclar. Dejar en reposo durante 30min. Leer a 540nm
IV. RESULTADOS:

SUERO SANGUINEO LECHE VACA

LECHE SOYA CONTROL

Se Puede Afirmar La Existencia De Péptidos Ó En Este Caso Proteínas.


 RESULTADOS DE LA LECTURA DE MUESTRAS:

Suero sanguíneo: 0.808

Leche de vaca: 0.633

Leche de soya: 0.618

Muestra control: 0.52

 CALCULO DE LA LECTURA DE PROTEINAS:

Suero sanguíneo:

0,808 − 0,52 ∗ 15 = 4,32𝑔/%

Suero de leche de vaca:

0,633 − 0,52 ∗ 15 = 1,695𝑔/%

Suero de leche de soya:

0,618 − 0.52 ∗ 15 = 1,47𝑔/%


V. DISCUCIONES:

La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de


urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción.

La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la


reacción del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa
alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto
de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los
iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma
parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm.

Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces
peptídicos consecutivos en sus moléculas.

VI. CONCLUSIONES:

Se conoció la reacción de biuret, la cual se basa en la ruptura del enlace


peptídico el cual se forma entre aminoácidos.
Se aprendió a calcular la cantidad de proteína presente en una muestra
mediante la fórmula enseñada en laboratorio.

VII. CUESTIONARIO:

1. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Biuret?

La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de


urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción.
La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la
reacción del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa
alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto
de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los
iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma
parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm.

2. ¿Qué es un enlace peptídico?

En las proteínas, los aminoácidos están unidos uno seguido de otro, sin
ramificaciones, por medio del enlace peptídico, que es un enlace amido entre el
grupo -carboxilo de un aminoácido y el grupo -amino del siguiente. Este enlace
se forma por la deshidratación de los aminoácidos en cuestión. Esta reacción es
también una reacción de condensación, que es muy común en los sistemas
vivientes.
Los enlaces peptídicos no se rompen con condiciones que afectan la estructura
tridimensional de las proteínas como la variación en la temperatura, la presión, el
pH o elevadas concentraciones de moléculas como el SDS (dodecil sulfato de
sodio, un detergente), la urea o las sales de guanidinio. Los enlaces peptídicos
pueden romperse de manera no enzimática, al someter simultáneamente a la
proteína a elevadas temperaturas y condiciones ácidas extremas.

3. ¿Qué es la electroforesis?

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la


movilidad de estas en un campo eléctrico.1 La separación puede realizarse sobre
la superficie hidratada de un soporte sólido, o bien a través de una matriz porosa,
o bien en disolución

La gran mayoría de macromoléculas están cargadas eléctricamente y, al igual que


los electrolitos, se pueden clasificar en fuertes y débiles dependiendo de la
constante de ionización de grupos ácidos y básicos. Por ejemplo los ácidos
nucleicos son poliácidos fuertes.

Por lo general, para caracterizar la molécula se determina la velocidad a la que


esta se mueve en un campo eléctrico y se utiliza para determinar, en el caso de
proteínas, la masa molecular o para detectar cambios de aminoácidos y separar
cuantitativamente distintas especies moleculares; en el caso de ácidos nucleicos
se determina su tamaño, medido en pares de bases

VIII. REFERENCIAS BIBLOGRAFICAS:

- Bioquímica, McGraw Hill Interamericana, 2ª. Ed., España, 1998.


- Principios de bioquímica, Lehninger, 5ª. Ed.,2000
- Principios de Bioquímica, McGraw Hill, 1989.