TSB. PRACTICA NO.
5 NTRODUCCIÓN AL
MANEJO DEL LABORATORIO Y TÉCNICAS
EMPLEADAS PARA EL ESTUDIO DE
MICROORGANISMOS
INTRODUCCIÓN:
El medio de cultivo es la mezcla de materiales
alimenticios para el crecimiento y desarrollo de
microorganismos. Una vez preparado, puede ser
inoculado y a continuación incubado en
condiciones que favorezcan el crecimiento
microbiano. Los cultivos deben ser axénicos o
puros. Deben contener nutrientes y estar exentos
de otros microorganismos contaminantes. De
acuerdo a su consistencia pueden clasificarse en:
líquido so caldos de cultivo, semisólidos y sólidos.
Acorde a su composición, se clasifican en: definidos
y complejos. De acuerdo a su función, se clasifican
como: medios selectivos o específicos, medios
diferenciales, medios de enriquecimiento y
medios enriquecidos.
MATERIAL:
-2 mecheros Bunsen y 2 Fisher
-1 agitador -1 mosca (magneto)
-1 parrilla de agitación
-1 matraz de 500 ml
-1 balanza granataria-1 espátula
-1 probeta de 250 ml
-2 pipetas de 1 ml y 1 de 5 ml
-2 jeringas desechables estériles
-10 cajas de Petri estériles desechables
-Masking tape
-Papel aluminio
-Plumón indeleble
“PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
Y MÉTODOS DE SIEMBRA”
subir. Tiene que llegar hasta 15 lb/in2o 121 °C. y
se deberá tomar el tiempo de 15 a 20 minutos.
Cuidar que la presión de la autoclave, nunca
rebase los 20 lb/in2, ni está por debajo de los
-Trapo
15lb/in2. Esto se puede controlar conectando y
-Algodón, gasa
desconectando la autoclave.
-Reactivos para el medio de cultivo
7.Transcurridos los 15 -20 minutos, desconecta la
-Autoclave
autoclave. Comienza a abrir la válvula para liberar
el vapor y que la presión comience a bajar. La
Medios de cultivo: autoclave puede abrirse únicamente cuando el
Papa dextrosa Agar (PDA)
manómetro marque cero.
*100 ml de infusión de papa (filtrada)
8.La autoclave se abre desde atrás y con ayuda del
-10 g de dextrosa
trapo sacar los matraces.
-7.5 g de agar
-500 ml de agua destilada (aforar)
VACIADO DE MEDIO DE CULTIVO EN CAJAS DE
-30-35 ml por caja
PETRI:
1.Con el medio de cultivo se ha esterilizado, se
METODOLOGÍA procede a vaciar en las cajas.
1.Pesar reactivos necesarios y ponerlos en un 2.Limpiar área de trabajo, empleado como
matraz. desinfectante con una solución de NaOCl al 2%
2.Con la probeta, medir el agua destilada y añadirla 3.Encienda 2 mecheros Bunsen, manteniéndolos
al matraz junto con los reactivos. separados a una distancia de 30 cm y proceda de la
3.Poner el matraz sobre la parrilla de agitación a siguiente manera:
60 °C con una mosca para mezclar 4.Tome el matraz que contiene el medio de cultivo,
homogéneamente. destápelo en el campo estéril y vacíe el medio.
4.Cuando la solución esté homogénea, retirarla del •Con la mano izquierda levante un lado de la
agitador, sacar la mosca y tapar con un tapón de caja de Petri y vacíe el medio, aproximadamente
algodón rodeado con gasa, elaborado 10 ml por caja.
previamente y un capuchón de aluminio. •Coloque la tapa de la caja en su sitio, tome
5.La autoclave estará prendida previamente. otra caja y siga vaciando el medio. Procure agitar
Introducir los matraces en el interior de la el medio de vez en cuando.
autoclave. Cerrar apretando los tornillos. •Las tapas no se tocan por dentro con los dedos,
6.Cuando empiece a salir vapor, coloca la válvula ni se sacan del área de esterilidad.
en la autoclave, para que la presión comience a
•Permita que el medio se solidifique e invierta
las cajas para evitar la formación de gotas de
condensación en la tapa de las mismas.
•Ya sólidas, se cierran y se etiquetan con los datos
correspondientes. Guardar en el refrigerador para
utilizar la siguiente práctica.
AISLAMIENTO, SIEMBRA Y PURIFICACION DE
HONGOS.
OBJETIVOS:
1) Introducir al alumno en las técnicas generales del
manejo de los hongos en el laboratorio.
2) Aislará y sembrará hongos de material
contaminado y/o del ambiente.
3) Utilizará las técnicas de esterilización
requeridas para aislamiento y siembra de hongos.
MATERIAL:
Cajas de petri con los medios de cultivo ya
elaborados anteriormente, asa de siembra,
mecheros, material contaminado con hongos,
alcohol.
METODO:
De acuerdo con las medidas de esterilización
adecuadas, tome con su asa
bacteriológica o aguja de disección, desinféctela
con alcohol al 70% y esterilice colocándola
directamente a la flama del mechero hasta ponerse
al rojo vivo, espere a que enfríe.
1.Tome un poco de micelio y siembre en la caja
de petri (con el medio de cultivo) de la manera que
se le indique:
2. La siembra se puede hacer por estría, picadura o
bien en un solo punto central de la caja de petri o
en tres puntos equidistantes.
3. Aísle hongos del ambiente exponiendo sus cajas BIBLIOGRAFIA:
con medio de cultivo. •Gaviño, G. et al., Técnicas biológicas selectas de
4. Incube a temperatura ambiente. Anote los datos laboratorio y de campo. México, Limusa, 1984.
correspondientes: substrato donde se •Ingraham, J. y C. Ingraham. Introducción a la
aisló la colonia, color de ésta, fecha de siembra, microbiología. Vol 1. Reverté. 1998.
medio que utilizó, etc. Observe el crecimiento en •Ulloa, M. y R. Hanlin, 1978. Atlas de Micología
días posteriores a partir del tercer día, tomará nota Básica. Editorial Concepto, S.A., México. QK601 A84
de sus características, para un posterior 1978
identificación. •Atlas, R. M. y R. Bartha. 1981. Microbial Ecology.
5. Deje algunas cajas con medio de cultivo, para Fundamentals and applications. Wesley
que posteriormente intente purificar algunos de Massachusts.
sus aislamientos. • Atlas, R. M. y R. Bartha. 1993. Microbial Ecology.
6. Realice resiembra para lo obtención de cultivos Fundamentals and apllications. 2nd. Ed. The
puros. Benjamin-Cummings Publishing Company Inc.
Merlo Park. London
RESULTADOS:
Cuando regresamos del puente y pudimos ver
nuestros resultados (aproximadamente una
semana después) observamos como todos nuestros
cultivos habían tenido éxito, incluso los
ambientales aunque eran los que tenían los cultivos
de menor tamaño, mientras que los alimentos en
descomposición habían crecido de manera
impresionante y de muchas formas y colores
diferentes.
DISCUSION Y CONCLUSIONES:
En esta práctica, aparte de aprender paso a paso a
preparar medios de cultivos y conocer y poner en
práctica las distintas siembras de cultivos, pudimos
ver claramente que hay una enorme variedad de
hongos, en el caso de los alimentos vimos que
dependiendo el alimento será el hongo y en el caso
de los ambientales pudimos ver cómo es que
incluso en los ambientes más “comunes” también
podemos encontrar hongos.