RESUMEN LAB.

ANALÍTICA II

OTROS:

(a) Método estándar Externo: consiste en inyectar en el equipo volúmenes constantes de

disoluciones conocidas y de concentraciones crecientes del compuesto que se
pretende cuantificar; tras este proceso, se representa la cantidad del compuesto
frente al tamaño del peak (área o altura), debiéndose obtener una línea recta.
(b) Método estándar Interno: Consiste en añadir una cantidad conocida de un compuesto
patrón a la muestra a analizar antes de realizar con ella cualquier manipulación. En el
cromatograma aparecerán picos correspondientes al analito y al patrón añadido, y de
la relación entre el tamaño de ambos (razón de áreas), podrá calcularse la cantidad de
analito existente en la muestra (se preparan disoluciones de concentración creciente
del compuesto a analizar a las que se añade una cantidad idéntica en todos los casos
del compuesto patrón).

ABSORCIÓN/EMISIÓN ATÓMICA (AA)(EA)

El principio de ésta técnica de AA es la absorción de energía proveniente de una fuente

(Ej: lámpara de cátodo hueco) por parte de los átomos del elemento que se desea
determinar.

El principio de la técnica de EA es la medición de la energía liberada luego de ser excitada

la muestra.

La cantidad de combustible y agente oxidante es siempre la misma, independiente de la

muestra a estudiar.

Las curvas de calibración en la determinación de Na+ o K+ obtenidas utilizando la

espectroscopia de emisión atómica, tiene forma de ecuación cuadrática.

Las principales partes del equipo son:

- Fuente de energía (Lámpara de cátodo hueco para AA)

- Sistema de atomización (Manguera de succión, nebulizador y manguera de desechos)
- Mechero
- Control de entrada de gases (O2 y Acetileno)
- Control de Longitud de onda y SLIT (Obtenido del “libro de cocina”)
PREGUNTA PRUEBA: Respecto a la técnica de EA explique la pérdida de linealidad
observada en las curvas de calibrado de K+ y Na+ a concentraciones elevadas de analito:

A concentraciones elevadas de analito, la causa principal de la pérdida de

linealidad en emisión atómica es la auto-absorción. Aún a elevadas concentraciones, la
mayor parte de los átomos del analito se encuentran en estado fundamental y solo una
pequeña parte está excitada. Los átomos que se encuentran en estado exitado,
rápidamente vuelven al estado fundamental, emitiendo fotones. Estos fotones pueden ser
absorbidos por los átomos del analito que está en el estado fundamental, ya que poseen
niveles de energía apropiados para la absorción de esta energía.

PREGUNTA PRUEBA: Se determinó la presencia de sodio y potasio mediante

espectrometría de emisión atómica de llama, utilizando una curva de calibración externa
formada por soluciones acuosas de estándar correspondiente. De acuerdo a su
experiencia en el laboratorio, explique cuál sería la principal desventaja de construir la
curva con soluciones de este tipo, y como solucionaría éste problema.

- Desventaja: Ausencia del interferente principal en estas soluciones de calibrado, en

este caso el alcohol.
- Solución al problema: Preparar una curva de calibración externa, adicionando etanol
en las soluciones de acuerdo al contenido aproximado de alcohol en la muestra, o
realizar una curva de adición estándar procurando trabajar en el intervalo lineal.

PREGUNTA PRUEBA:
CROMATOGRAFÍA DE GASES (GC):

* En éste práctico se utilizó estándar interno, para minimizar la desviación de los valores
de las áreas.

Ventaja de un programa de temperaturas (A altas temperaturas disminuye resolución y

hay señales no resueltas)

- Disminución tiempo de análisis

- Mejora resolución
- Mejora sensibilidad
- Mejorar performance de la señal

El detector de ionización de llama FID requiere hidrógeno, aire y nitrógeno de alta pureza
para su funcionamiento

En el cromatógrafo la muestra se deposita primero en el inyector donde se vaporiza y

luego pasa a la columna

En el modo splitless toda la muestra pasa a la columna (sirve para medir trazas)

Para una serie de ésteres de largo de cadena hidrocarbonada creciente, los cuales se
separan en una columna con fase estacionaria apolar, el tiempo de retención es
directamente proporcional al largo de cadena.

La disminución del tiempo de retención de un analito al incrementar la temperatura se

debe al menor tiempo de interacción con la fase estacionaria y a la mayor presión de
vapor del analito en la fase móvil. Así, a mayor temperatura mayor presión de vapor y
menor duración de la interacción con la fase estacionaria.

La razón entre las áreas de analito y estándar interno en GC, permite minimizar las
variaciones que se producen en el área del analito, se afectan por igual las áreas del
analito y del estándar interno.

PREGUNTA PRUEBA: En una columna de carácter polar se determinó la Cte. De

Distribución Kc de una serie de ésteres que pertenecen a una misma familia de
compuestos. Al respecto, explique cómo varía Kc.

Kc =

(Si k>1 afinidad por F.E. , Si k<1 afinidad por F.M.)

(a) Si se incrementa el largo de la cadena hidrocarbonada de los compuestos y se
mantiene la temperatura. La concentración de soluto en la F.M. aumentará, por lo que
Kc se hará más pequeña y por lo tanto tendrá más afinidad por la fase móvil.
(b) Para un mismo compuesto al incrementar la temperatura. El analito disminuirá su
tiempo de retención producto del aumento de la temperatura. Así, se encontrará en
mayor concentración en la F.M. disminuyendo la interacción con la F.E. y por ende
disminuyendo también la Kc.
(c) Al usar una columna de carácter apolar sin variar la temperatura. Los ésteres son
compuestos hidrocarbonados con cabeza polar, así al aumentar el tamaño de la cola
hidrocarbonada, será más a fin por la fase estacionaria apolar, obteniéndose una Kc>1,
que indicaría una mayor afinidad por la F.E.

PREGUNTA PRUEBA:
ABSORSIÓN MOLECULAR (AM)

La absorbancia cambiará de valor si se

modifica “La concentración de analito”, “el
pH” y el “Material de la cubeta (a una de
vidrio para el AAS)”

La pendiente de una curva de calibración

realizada a 250nm será mayor que la
pendiente de una curva de calibración
realizada a 300nm.

El error espectrofotométrico asociado a la

medida es mayor a 250nm que a 300nm.

El intercepto de una curva de calibración realizada a 250nm será menor que el intercepto
que una curva de calibración realizada a 300nm.

Para la cuantificación de AAS siempre se debe seleccionar la banda de 300nm.

La absorbancia de una solución se puede medir correctamente en soluciones

transparentes y coloreadas (rango UV o visible).

La absorbancia de una solución no se puede medir correctamente en soluciones turbias.

La absorbancia de una solución acuosa de cobre incrementa si se agrega amoniaco en

exceso.

El espectro de absorción del AAS a cualquier pH, cambia al pasar de una cubeta de cuarzo
a una de vidrio.

En el gráfico se muestra en qué

longitudes de onda se puede
determinar selectivamente el
compuesto A, B y C.
PREGUNTA PRUEBAS (SIN RESPUESTA):
 CROMATOGRA LÍQUIDA DE ALTA EFICIENCIA (HPLC)

Al utilizar cromatografía de fase inversa, las especies más polares presentan menores
tiempos de retención.

La desgasificación de la fase móvil es imprescindible, ya que nos puede ayudar a obtener

menos ruido de fondo y mejor sensibilidad.

Para decidir si existe una adecuada separación cromatográfica de dos picos adyacentes, es
necesario calcular la resolución porque da cuenta de la separación en la base de los picos
cromatográficos, no basta con calcular la selectividad.

La incorporación de estándar interno en la preparación de una curva de calibración,

permite hacer correcciones en la cuantificación, por problemas en la inyección de
volumen de muestra.

Al realizar una corrida cromatográfica con gradiente se modifica la composición de la fase

móvil para obtener mejores separaciones de analitos, que salen muy cercanos entre si.

Al repetir la inyección cromatográfica de un determinado analito en un equipo HPLC,

usted esperará tener un alto grado de precisión tanto en los tiempos de retención como
en las áreas.

Es posible ajustar el pH de la fase móvil para asegurar que los analitos se encuentren en
una determinada forma estructural, se debe tener precaución de lavar posteriormente la
columna con abundante agua de baja conductividad (miliQ).

PREGUNTA PRUEBA: Para la cuantificación de un analito problema (A) se requiere

comparar la metodología mediante curva absoluta y curva con estándar interno (SI), cuyas
ecuaciones son Y = 10667X – 16484 (r = 0,9978), e Y = 0,072X + 0,011 (r = 0,9995). Para la
determinación en una muestra se pesaron 500mg de analito (en triplicado), los que fueron
disueltos en 100mL de agua. Posteriormente, 500 uL de esta solución fueron diluidos a 10
mL en fase móvil, obteniéndose los resultados de la siguiente tabla:

Área A Área SI Área A/SI [A] abs [A] SI X fd norm x fd SI mg/g norm mg/g SI
Muestra 196675 338132 0,58165 19,9830 7,9257 399,6606 158,5143 79,93 31,70
Muestra 151928 290496 0,52300 15,7881 7,1110 315,7626 142,2209 63,15 28,44
Muestra 188070 336730 0,55852 19,1763 7,6044 383,5268 152,0885 76,71 30,42
Prom 18,3 7,5 73,3 30,2
S 2,2 0,4 8,9 1,6
a) Determine la concentración de analito (A) en la muestra problema en mg/g, por
ambos métodos.

Conc. por curva normal: 73 + 9 mg/g

Conc. por st interno: 30 + 2 mg/g

b) Si la concentración real del analito es 29,5 + 0,2 mg/g, indique qué método eligiría
para la cuantificación, considerando tanto la precisión como la exactitud. Justifique su
respuesta.

Tanto la precisión como la exactitud fueron superiores en el método con estándar interno,
por lo tanto sería el método más adecuado para la cuantificación.

PREGUNTA PRUEBA: Al inyectar en un cromatografo líquido, una solución que contiene

dos componentes (A) y (B) a diferentes flujos y composición de fase móvil (MeOH, agua)
se obtuvieron los resultados de la tabla. A partir de estos resultados:

(a) Determine la resolución y el número de platos teóricos.

Resolución es óptima cuando > 1,5
(b) ¿Qué condiciones son las óptimas para la determinación? Justifique su respuesta.

FORMULAS:

) )) )
Rs = N= ( )2 α=
) ) )
R./

PREGUNTA PRUEBA (SIN RESPUESTA):