PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CHILE

FACULTAD DE QUÍMICA
DEPTO. DE QUÍMICA INORGÁNICA
LAB. DE QUÍMICA INORGÁNICA I
Profesor: Francisco Castillo

LABORATORIO N°4
DETERMINACIÓN
DE FOSFATOS EN
BEBIDA COLA

Fecha de realización del laboratorio: 29 de abril, 2019

Nombre: Fresia Luque Sanchéz
Felipe Anyelo Valenzuela Llanquiman
1.- Resumen
El fósforo cumple una diversidad de funciones en el buen funcionamiento del organismo, por
lo que la concentración excesiva o inferior al valor recomendado, puede traer consecuencias
importantes como una disminución del nivel cálcico. Las bebidas cola son de alto consumo,
aportando una gran cantidad de fósforo, debido a esto es importante que la cantidad de
fósforo sea consistente con lo informado por control de calidad. En esta oportunidad se
analizó una bebida cola marca Fruna, de la cual se tomó 1 mL y se llevó a 25 mL, 50 mL,
100 mL, es decir, se realizaron tres diluciones. Luego, de cada una de ellas se tomó 1 mL, y
se añadieron 4 mL de solución reductora en un matraz de 10 mL. Para cada una de las
diluciones se midió la absorbancia, obteniéndose los siguientes valores: 0,520; 0,450 y 0,138,
que mediante la extrapolación de una curva de calibración, se determinó la concentración de
fosfatos en la bebida Frucola, teniendo un valor promedio de 19,358 mg/L.

2.- Introducción

El fosforo fue descubierto en 1669 por el alquimista Henning. Debido a su marcada actividad,
el fósforo no se encuentra libre en la naturaleza, pero se presenta abundantemente distribuido
en forma de fosfatos. Sus principales minerales son la fosforita y los apatitos (1).

El fósforo (P) pertenece a la categoría de minerales que están presentes en el cuerpo en

magnitudes de cientos de gramos. De hecho, el fósforo alcanza los 800 g en un cuerpo
humano adulto. Gran parte del fósforo se encuentra en huesos y dientes, principalmente en
forma de hidroxiapatita, con una relación en peso de 1:2 con el calcio (Ca). También forma
parte de la composición de músculos, hígado, intestino y piel (2).

En organismos como el ser humano, el fosforo en su forma de fosfato tiene una diversidad
de funciones en el metabolismo de los azucares, ser parte de la estructura molecular del ADN
y los fosfolípidos y como co-factor de algunas proteínas. Dada la importancia que tienen el
fosforo y los fosfatos en el buen funcionamiento del organismo, la alteración en su cantidad
puede ser critica. Por ejemplo, la deficiencia de fosforo, llamada hipofosfatemia, provoca la
pérdida del volumen de huesos, inducir raquitismo en niños y osteomalacia en adultos. Otro
efecto de la deficiencia de fosforo es una significativa reducción de la secreción de insulina
por el páncreas (3).

Existes diferentes fuentes en la dieta humana donde se pueden obtener fosforo o fosfatos,
como la leche, las carnes y varios tipos de vegetales (2). Por ello, casi siempre la ingestión
de fosforo es suficiente. No obstante, actualmente existen otras fuentes de consumo común
que pueden estar aumentando considerablemente la cantidad de fosfatos que se consumen
diariamente. Estas fuentes corresponden a las bebidas analcohólicas gasificadas, más
específicamente las del tipo “cola”. Las consecuencias de un consumo excesivo de fosfatos
puedo originar insuficiencia renal, hipoparatiroidismo y erosionar el esmalte dental. Dado
esto, es importante determinar la cantidad de fosfatos presentes en este tipo de producto.

Una forma de determinar las concentraciones de diferentes moléculas en las disoluciones es

mediante la técnica de espectrofotometría. Este es un método físico que permite el estudio de
la emisión y la absorción de radiación electromagnética por los compuestos, aprovechando
la luz UV y visible. Estos tipos de luz tienen la capacidad de excitar electrones π y no
enlazantes, llevándolos a un estado de mayor energía. Las moléculas absorben luz a
longitudes de onda determinadas, permitiendo un reconocimiento específico (4).

Los espectros de absorción de las moléculas son importantes cuantitativamente, ya que,

según la cantidad de energía absorbida, medida a partir de una disolución a determinada
longitud de onda, se puede determinar la cantidad presente de una molécula. La relación entre
cantidad de materia presente y cantidad de energía absorbida está dada por las leyes de
Lambert y Beer. La primera, relaciona la absorción con la longitud del recorrido de la luz.
La segunda, indica que la absorción de luz depende de la concentración de moléculas
absorbentes. Ahora la ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia es proporcional a la
concentración de la solución que absorbe y la longitud del trayecto que recorre el haz de luz.
Esto se expresa en la siguiente ecuación (5):

A=ε c l

Donde A es la absorbancia, ℇ el coeficiente de extinción molar propio de cada sustancia, c la

concentración molar y l la longitud recorrida por el haz de luz. Para cuantificar la absorción
de luz se utilizan los espectrofotómetros.

La técnica de espectrofotometría requiere el uso de sustancias capaces de absorber la luz en

un rango que pueda ser detectado. Por ello, para la determinación de la cantidad de fosfatos
en una bebida cola de marca Fruna, se utilizará una técnica llamada azul de molibdeno. Esta
utiliza la siguiente reacción con el fosfato:

7H3PO4 + 12(NH4)6Mo7O24 ∙ 4H2O ↔ 7(NH4)3(PO4(MoO3 )12) + 51NH4 + + 51OH- + 33H2O

El complejo de fosfomolibdato tiene una mezcla de Mo+5 y Mo+6, su composición es indefinida.

Este complejo es reducido a un compuesto azul soluble cuya absorbancia es medida
espectrofotométricamente a una longitud de onda de 830 nm y es proporcional a la cantidad de
fósforo presente en la muestra, como agente reductor se utiliza el ácido ascórbico (6).
3.- Hipótesis y objetivos

3.1.- Hipótesis

Se debe encontrar fosfatos presentes en una bebida cola marca fruna (frucola) mediante la
técnica del azul de molibdeno.

3.2- Objetivo

Determinar la concentración de fosfatos disueltos en bebidas analcohólicas gasificadas

disponibles en el mercado chileno

3.2.1.- Objetivos específicos

 Aplicar la técnica de azul de molibdeno en una muestra de frucola en tres diluciones

(25 mL, 50 mL y 100 mL).
 Determinar la absorbancia de las diluciones mediante espectrofotometría.
 Determinar la concentración de fosfatos en las diluciones mediante la extrapolación
de una curva de calibración de una disolución patrón.

4.- Resultados y Discusión

Para la determinación de fosfatos en la bebida cola mediante azul de molibdeno y

espectrofotometría es necesario realizar una curva de calibración con una disolución patrón
de fosfato a concentraciones de 0,2 mg/L, 0,4 mg/L, 0,6 mg/L, 0,8 mg/L y 1 mg/L. A
continuación, se muestra la tabla con las absorbancias a 830 nm de longitud de onda
obtenidas por cada concentración.

Tabla n°1: absorbancia de distintas concentraciones de fosfato de una disolución patrón.

Concentración de fosfato (mg/L) Absorbancia (λ) a 830 nm
0 0
0,2 0,179
0,4 0,347
0,6 0,506
0,8 0,655
1 0,828

Con estos datos es posible obtener una gráfica concentración vs absorbancia, que corresponde
a la curva de calibración de fosfatos. A continuación, se presenta la curva de calibración con
su respectiva ecuación:
 Concentración vs absorbancia
0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4
y = 0,8181x + 0,0101
0.3
R² = 0,9993
0.2

0.1

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

Grafico n°1: curva de calibración de la disolución patrón de fosfatos.

Luego de tener preparada la curva de calibrado, se procedió a determinar la concentración de

fosfatos. Para ello, se hicieron diluciones seriadas a partir de una muestra de bebida tipo cola
marca Fruna, tomando 1 mL de la muestra y llevándola a 25 mL, 50 mL y 100 mL. Se tomó
1 mL de cada dilución, se les agregó el reactivo y puedo se midió la absorbancia. A
continuación, se presenta una tabla que muestra las absorbancias de cada dilución.

Tabla n°2: Absorbancia de las diluciones de la muestra de bebida cola marca Fruna
Dilución (mL) Absorbancia (λ) a 830 nm
25 mL 0,520
50 mL 0,450
100 mL 0,138

A partir de los resultados de absorbancia y de la extrapolación mediante la curva de calibrado,

se obtuvieron las concentraciones de fosfatos en cada una de las diluciones mediante el
siguiente cálculo:

y = 0,8181x + 0,0101
Donde, y = absorbancia y x = concentración

De la ecuación y el cálculo se obtiene la siguiente tabla que muestra la concentración por

cada una de las diluciones:
Tabla n°3: Concentración de fosfatos en cada dilución.
Dilución de la muestra (mL) Concentración (mg/L)
25 0,623
50 0,538
100 0,156

El uso del método de azul de molibdato se explica por la mayor sensibilidad de este tipo de
reacciones. Uno de los criterios de calidad que tiene gran relevancia en la estandarización y
validación de un método analítico es la exactitud, ya que este parámetro refleja de manera
evidente, el grado de concordancia entre un valor real (medido) y un valor teórico (verdadero)
y generalmente se sustenta a través del porcentaje de recuperación o recobro. En este caso,
no fue posible evaluar la exactitud del procedimiento porque los datos acerca de la
concentración de fosfatos en la bebida tipo cola marca Fruna no están disponibles (7).

Para la determinación de la concentración de fosfatos se utilizó una curva de calibración y la

extrapolación de los datos obtenidos en ella. Por ello, para comprobar que las concentraciones
obtenidas a través de la curva son correctas, se debe evaluar la linealidad del procedimiento
(7). La linealidad es la capacidad para proporcionar resultados que son directamente
proporcionales a la concentración de la muestra examinada. En este caso, se evaluó la
linealidad de la curva de calibrado mediante el R2, que indica qué tan bueno es el modelo de
regresión utilizado. Este parámetro debe tener un criterio de aceptación superior a 0.995. En
este caso, el R2 obtenido corresponde a 0,9995, siendo este valor mayor a 0.995 y por lo tanto
se corrobora que la linealidad obtenida es aceptable.

Para cuantificar la concentración de fósforo en la bebida cola marca Fruna®. Se utilizó la

curva de calibración en un rango de 0,2 a 1 mg/L de P2O5. Con los datos obtenidos y
aplicando regresión lineal se llegó a la ecuación y = 0.8181x + 0.0101, con un R2 de 0.9995.
La absorbancia de las lecturas de las muestras analizadas se extrapoló en la curva de
calibración para obtener la concentración de P2O5. Posteriormente, considerando las
diluciones realizadas se obtuvo la concentración de fósforo en el refresco de la siguiente
forma (7):

[ ]dilución x fd = [ ]muestra de bebida

Del cálculo de la concentración de la muestra de bebida aplicando a las concentraciones de

dilución el factor de dilución correspondiente, se obtiene la siguiente tabla:
Tabla n°4: Concentración de la muestra de bebida cola marca Fruna a partir de las diluciones
Dilución (mL) Concentración fd Concentración de la
(mg/L) muestra (mg/L)
25 0,623 25 15,575
50 0,538 50 26,9
100 0,156 100 15,6
Promedio 19.358

Según los resultados mostrados en la tabla, la dilución de 25 mL y la de 100 mL reflejan una

concentración de muestra consistente entre ellas. Sin embargo, la dilución de 50 mL da un
resultado mucho mayor al esperado. Por ello, se compararon estos datos con los de otro grupo
que determino una bebida de las mismas características. De esto, se obtuvo los siguientes
datos:

Tabla n°5: Concentración de la muestra de bebida cola marca Fruna a partir de las diluciones
de otro grupo de trabajo.
Dilución (mL) Concentración fd Concentración de la
(mg/L) muestra (mg/L)
25 0,854 25 21,35
50 0,420 50 21,0
100 0,204 100 20,4
Promedio 20,916

Los datos entregados por este grupo de trabajo indican mayor consistencia del valor de la
concentración de la muestra de bebida cola a partir de las diluciones hechas. La diferencia
entre los datos que se obtuvieron en nuestro procedimiento versus los datos obtenidos por el
otro grupo se puede explicar mediante una serie de factores.

La diferencia entre el promedio de la concentración de nuestro procedimiento (19,358 mg/L)

y la del otro grupo (20,916 mg/L) puede ser producto de la procedencia de la muestra
utilizada. Ambos grupos utilizando botellas diferentes, que pudieron haber sido producidas
con diferentes de producción, lo que podría significar que pueden tener diferencias en los
ingredientes utilizados y que, cuyo control de calidad no fue el suficiente.

Sobre la falta de consistencia en los datos entregados por nuestro procedimiento, se puede
explicar mediante el mismo método de espectrofotometría. Esta técnica requiere una buena
integridad de la muestra, así como analistas que sepan ejecutar adecuadamente las etapas.
Por ello, se cree que la preparación de la dilución de 50 mL no fue tan prolija como las demás
diluciones. Se descarta un fallo en el equipo de espectrofotometría debido a que el otro grupo
utilizó la misma máquina.
5.- Conclusión

Se determinó la absorbancia, mediante la técnica de espectrofotometría de tres diluciones

provenientes de una muestra de 500 mL de bebida cola marca Fruna.
La técnica azul de molibdeno es eficaz, ya que permite identificar, mediante la adquisición
de un color azul en poco tiempo y cuantificar la concentración de fosfato en una bebida cola
marca Fruna, por lo que la hipótesis se cumplió obteniéndose en la muestra una concentración
de fosfato promedio igual a 19,358 mg/L, la cual se determinó a partir de la extrapolación de
una curva de calibración, cuya linealidad fue comprobada por el valor de R2 (0,9995).

6.- Bibliografía

1.- N. Rayo & S. Zelles, “Aplicación y comparación de dos métodos espectrofotométricos para la
determinación de fosforo en cereales”, Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua (2012).
Recuperado de:
http://riul.unanleon.edu.ni:8080/jspui/bitstream/123456789/5946/1/222085.pdf

2.- G. Tomassi, “Fosforo: un nutriente esencial en la dieta humana”, IMPHOS Newsletter 2002 16:
1-3 Recuperado de:
http://www.ipni.net/publication/ia-
lahp.nsf/0/289032DF947647DA852579A300788EC9/$FILE/F%C3%B3sforo-
Un%20nutriente%20esencial%20en%20la%20dieta%20humana.pdf

3.- David L. Nelson, Michael M. Cox, Albert L. Lehninger, “Lehninger Principles of Biochemistry.
(5° Edicion)”. Estados Unidos: W. H. Freeman and Company. 2009

4.- Adams E. & Rosenstein L. The color and ionization of crystal violet. Contribution from the
Chemical Laboratory of the University of California mayo, 1914.

5.- Boyer R. (2000). Modern Experimental Biochemistry (3° Ed). San Francisco, California: Addison
Wesley Longman. Capítulo 5, págs. 141-142.

6.- Depto. De Ciencias Básicas, “Determinación espectrofotométrica de fosforo en bebidas colas”.

Academia de Química, ITESM

7.- M. Cañez & A. García, “Validación de un método analítico para la determinación de fosforo por
espectrofotometría ultravioleta-visible”. Universidad de Sonora, XVII (1): 32-39(2015)