DISCUSION

La cuantificación de la Hemoglobina se llevó a cabo mediante dos técnicas; Método de Bradford y

Método de Lowry. Fueron empleados estos métodos debido a la especificidad y característica de las
proteínas de absorber a 590 nm, para demostrar esto, se realizó una curva de calibración en donde
se midieron las absorbancias de cinco tubos con contracciones crecientes de hemoglobina, para
cada una de ellas se trabajaron dos series o replicas, esto de tal manera que nos proporcionara
certeza en los resultados para la determinación de concentración de dicha proteína. Se detectó un
incremento en las absorbancias, a lo largo de la serie de cinco tubos, debido a que la intensidad del
color formado está basada en la Ley de Amber-beer, por lo que a mayor concentración de
hemoglobina, genero una mayor absorbancia. De esta manera fue posible interpolar la curva de
calibración a su valor aproximado de concentración. La absorbancia se midio a través de un
espectrofotómetro SP-V1000-PRO.
A travez de la comparación de las pendientes de las curvas de calibración de los dos métodos, se
analizó la relación que existe entre las veces que es más sensible el método de Bradford con
respecto al de Lowry.
Mediante el análisis estadístico se pudo determinar que el analista es el que tuvo errores, porque el
coeficiente de variación es mayor al 5%, siendo los valores para el método de Bradford de 16.8% y
el de Lowry, de 27%.
Con respecto al experimento de las interferencias no proteicas, mediante el método de Lowry, y
aplicando una clasificación con respecto a aquellas sustancias que entran en un intervalo µ, fue
posible observar que las sustancias no proteínicas; EDTA, detergente comercial y fenol, generan una
interferencia en el desarrollo de color, a diferencia del método de Bradford, en donde no se observo
dicha interferencia. Tanto el método de Lowry como el método de Bradford, se clasifican como
métodos sensibles. El método de Bradford es un método es sensible simple, rápido, barato y pocas
sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren están los
detergentes y las soluciones básicas, algunas de sus ventajas son: la unión de colorante-proteína es
un proceso muy rápido, y el complejo permanece estable algún tiempo, y no requiere tiempo crítico
para el ensayo, las interferencias son mínimas, otras sustancias que interfieren son las fuertes
alcalinas.
El método de Lowry tiene también ventajas y desventajas, como; Reacción lenta, en medio acido,
dando lugar a un producto inestable, no todas las proteínas reaccionan igual, tiene muchas
interferencias, sobre todo los detergentes no iónicos, y es muy sensible también.
Finalmente, las pruebas de significancia nos arrojaron que el método de Lowry es de mayor
precisión que el de Bradford.

CONCLUSION
-La cuantificación de proteínas se efectúa en base a una curva de calibración, la cual sigue la ley de
Amber-Beer.
-Existe diferencia entre la precisión y exactitud entre los métodos de Lowry y Bradford. Siendo el
método de Lowry el más preciso.

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-Las sustancias no proteínicas son interferentes en el desarrollo de color y su posterior lectura a 590
nm, cada una de ellas posee características químicas específicas, y alteran cifras significativas en la
cuantificación de proteínas.
-Los métodos de Lowry y Bradford son frecuentemente utilizados para la determinación de
concentración de proteínas mediante reacciones que consisten en la formación de complejos, cada
uno posee exactitud y precisión determinada, y depende de la utilidad para su caracterización.

REFERENCIAS
-Carbajal,A. 2012. “Informe sobre ensayos para cuantificar proteínas y análisis bibliográfico de los
ensayos de proteínas basado en 194 publicaciones. Argentina. Synatom Research. Tomado de:
http://www.labome.es/method/Protein-Quantitation.html.
-Reyes,E., Galván,A. 2001.Métodos para la cuantificación de proteínas. Departamento de
Bioquímica y Biología Molecular, Campus Universitario de Rabanales, Edificio Severo Ochoa,
14071-Córdoba.
-Gomez,S.,Rueda,M.,Rodriguez,J. 1994. La inmunología en el diagnóstico clínico. Colección de
Textos y Manuales. Colombia. Pp-57.
-Abascal,F. Leon,E. Fregoso,A. 2009. Experimentos de Quimica en Microescala para Nivel Medio
Superior. Mexico. Pp-292.

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