Electroforesis capilar

La electroforesis capilar (EC) es una técnica de separación utilizada en distintas

áreas (química, bioquímica, etc.) para separar las diferentes moléculas presentes
en una disolución de acuerdo con la relación masa/carga de las mismas. La
separación se lleva a cabo en un tubo hueco de diámetro muy pequeño (menos de
50 µm de diámetro)
Dentro del capilar de separación se encuentra la disolución que contiene los analitos
o las moléculas a separar y el tampón o medio electrolítico que es el encargado de
conducir la corriente. El interior se encuentra formado por grupos silanol (Si-OH),
los cuales al ser desprotonados (Si-O), elevan considerablemente pH y favorecen
la presencia de analitos específicos.

La detección de los analitos se realiza dentro del capilar, removiendo una sección
del polímero permitiendo el paso de luz hacia el detector. Los factores principales
que pueden afectar la eficiencia de la separación de los analitos son el calor de
Joule generado, la absorción de la muestra a las paredes, la concentración de los
analitos en la muestra, la fuerza iónica, el pH de las soluciones amortiguadoras, la
temperatura, etcétera.

Por lo cual es necesario realizar una optimización del método considerando el costo-
beneficio de cada una de las variables.

Separación
La migración de los analitos dentro de un campo eléctrico (movilidad electroforética
μe) está determinada por la fuerza del campo eléctrico y la carga del analito; sin
embargo, esta velocidad disminuye de acuerdo con la ley de Stokes, conforme se
incrementan las fuerzas de fricción (viscosidad del amortiguador) y radio iónico de
los analitos.3 La movilidad total (μt) de los analitos dentro del capilar es la suma
vectorial de μfeo y μe, por lo que en los procesos de separación de electroforesis
capilar de zona, donde se involucra principalmente la relación carga/masa de los
analitos, los cationes de la muestra adquieren mayor μt seguido por los analitos
neutros, y los aniones serán los que presenten menor μt
Imagen 5. Esquema de la electroforesis capilar

Potenciometría
La potenciometría es una técnica electroanalítica con la que se puede determinar la
concentración de una especie electroactiva en una disolución empleando
un electrodo de referencia (un electrodo con un potencial conocido y constante con
el tiempo) y un electrodo de trabajo (un electrodo sensible a la especie electroactiva)
y un potenciómetro.
Existen electrodos de trabajo de distinto tipo útiles para distintos cationes o aniones.
Cada vez son más usados los electrodos selectivos de iones (ESI) o electrodos de
membrana. Uno de los más empleados, que se comenzó a utilizar a principios del
siglo XX, es el electrodo de pH (un electrodo de vidrio).
Tipos de electrodos:

 Electrodo metálico

 Electrodo de membrana cristalina

 Electrodo de vidrio
 Electrodo de membrana líquida
 Electrodo de membrana polimérica

Imagen 6. Esquema de la potenciometria

También existen diferentes tipos de electrodos Indicadores:
- Electrodos de Membrana:

 Vidrio
 Membrana Líquida
 Membrana Cristalina
 Gases
- Electrodos Indicadores Metálicos:

 Metales Inertes
 Primera Especie
 Segunda Especie
Amperometría
Como su nombre lo indica esta técnica implica la medición de la cantidad de
corriente que circula por el circuito de medida. Para tener una utilidad analítica el
parámetro que se determina tiene que tener una relación con la concentración del
analito que se desea cuantificar. Esto se logra si se trabaja en condiciones donde el
único mecanismo de transporte actuante con el analito sea la difusión. En este caso
se tiene una "corriente límite" que será directamente proporcional a la
concentración. En general los métodos amperométricos pueden ser realizados
variando el potencial aplicado a un electrodo de trabajo, como es el caso de la
polarografía, la voltamperometría, etc. Otra opción es trabajar a un valor de
potencial constante. Este es el caso de las titulaciones amperométricas, donde se
monitorea constantemente el valor de la corriente y se trabaja a un potencial
adecuado de modo que en el punto equivalente ocurra un brusco cambio en el valor
de la misma. Las titulaciones amperométricas pueden realizar de dos maneras
diferentes: empleando dos electrodos empleando un electrodo. En el primer caso,
conocido también como detección biamperométrica, se introduce en la solución dos
electrodos idénticos, por ejemplo, de platino, entre los que se establece una
diferencia de potencial constante (del orden de algunos milivoltios) y se monitorea
durante la titulación el valor de la corriente que pasa entre ellos. Para entender el
funcionamiento de esta técnica, debemos analizar las condiciones que se deben
cumplir para que efectivamente circule corriente por los electrodos. La circulación
de corriente nos dice que el circuito ha sido cerrado, es decir que por los
conductores externos están circulando electrones mientras que en la solución se
establece una adecuada corriente iónica, para este propósito se debe cumplir que
se produzca una reacción de reducción sobre un electrodo y la correspondiente
reacción de oxidación sobre el otro electrodo. Si se analiza la reacción de titulación

Referencias:

1. Skoog& West (2001) Principios del análisis Instrumental 5° edición Mc Graw Hill,
Madrid España
2. González C. (2002) Introducción al análisis instrumental Editorial Ariel, Barcelona
España
3. https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2012/ir122g.pdf