“PREPARACIÓN DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA TINCIÓN PARA EL ESTUDIO

DE LA CITOLOGÍA MICROBIANA”

1. OBJETIVOS

General:

 Comprender la bioquímica de la tinción diferencial en bacterias.

Específicos:

 Diferenciar formas y agrupaciones bacterianas mediante el contraste de colores de la

tinción.
 Diferenciar baterías Gram (+) y Gram (-) utilizando la tinción de Gram.

2. RESULTADOS

Gráfico 1. Muestra microbiológica

Estreptococos

OBJETIVO 100x

BACTERIA GRAM (+)

Elaborado por: Romero E.

Fuente: Lab. De Microbiología de los alimentos - FCIAL

3. DISCUSIÓN
Según (Atilano, 2013). Las tinciones diferenciales son aquellas tinciones que se usan para
diferenciar de manera más explícita los microorganismos. Estas tinciones utilizan los
colorantes diferenciales, que se componen de más de una sustancia tintórea. En algunas
técnicas de coloración, las tinciones diferenciales más importantes que se emplean en
bacteriología son las de Gram y la tinción ácido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para
obtener información acerca de la composición de las capas de la pared celular de las células
bacterianas.
 Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular
de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo.
La pared celular de las bacterias Gram (-) está constituida por una capa fina de peptidoglicano
y una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram (+) poseen una pared
celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa;
así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las
bacterias Gram (-) y Gram (+) explica y determina las características tintoriales.

En éste caso los microorganismos de la muestras observada en el microscopio, luego del

proceso de tinción de Gram, se tiñeron de un color violeta perteneciendo a bacterias Gram
(+) además que se logra observar con el lente de mayor aumento (100x) un determinado tipo
morfológico de bacteria como fueron; cocos, formando agrupaciones de diplococos y
estreptococos, los mismos que variaron de muestra a muestra en cada estudiante, además se
lograron observar también bacterias Gram (-) con su característico color rosa.

4. CONCLUSIÓN
Por medio de la práctica se comprende la bioquímica de la tinción diferencial de Gram en las
bacterias, llegando a comprender que el color del que se tiña la batería dependerá
rotundamente de la capa de peptidoglicano ubicada en la pared celular siendo ésta más gruesa
en bacterias Gram (+) y más finas en baterías Gram (-) reteniendo con mayor o menor
cantidad el colorante, del que se distinguió cada una de ellas.

Se distinguieron formas y agrupaciones de las bacterias, esto distinguiéndolas unas de otras

por el color del que se tiñeron siendo en el caso de los microorganismos observados, bacterias
Gram (+) y mediante el contraste que daba la tinción se logra observar cocos, formando
agrupaciones de diplococos y estreptococos.

Las bacterias observadas, empezando por las Gram (+) se tiñeron de un color violeta debido
a la capa de peptidoglicano que en bacterias de esta clase tiene un mayor tamaño reteniendo
éste tipo de tinte. Las Gram (-) se tiñeron de un color rojizo debido a que la capa de
peptidoglicano es más fina reteniendo esta tinción. Concluyendo de esta forma que la
diferencia entre estos dos tipos de baterías dependerá del color del que se tiñan.

5. RECOMENDASIÓN
 La preparación del frotis debe secarse al ambiente sin soplar debido a que se pueden
transmitir microorganismos a la muestra y dañarla.
 En la tinción de Gram se recomienda seguir los pasos al pie de la letra respetando los
tiempos y cantidades de la sustancia a colocar debido a que esto podría alterar el
resultado.
 Al visualizar con el lente de 100x es necesario colocar aceite de inmersión.
  Para la determinación del tipo de bacteria a la que corresponde, tomar en cuenta que
las Gram (+) se teñirán de un color violeta o azul oscuro mientras que las Gram (-)
se teñirán de un color rojizo o rosa.

6. CUESTIONARIO
1. Establezca la diferencia entre bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Gram positivo.- pared celular con grueso peptidoglicano que retiene un colorante
específico. No tienen membrana externa.
Gram negativos.- pared celular compleja, con membrana externa y un espacio entre
membrana interna y externa, el periplasma, que contiene el saco de mureína y abundantes
enzimas. El peptidoglicano es fino, por lo que no retienen el colorante (Sánchez, 2010).

2. Explique la bioquímica de retención del colorante primario en las bacterias Gram

positivas.
Se le denomina bacterias Gram-positivas, son aquellas que se tiñen de azul oscuro o
violeta por la tinción de Gram. Esta característica química está íntimamente ligada a la
estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo natural de organización
bacteriana.

Las bacterias Gram-positivas cuentan con una envoltura celular que comprende la
membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de
peptidoglicano, que rodea a la interior. La pared celular se une a la membrana
citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico, la capa de peptidoglicano
confiere una gran resistencia a estas bacterias y una de las responsables de retener el tinte
durante la tinción de Gram (Núñez 2016).

3. Que otro colorante, aparte de la safranina, se puede utilizar como colorante de

contraste.
RODAMINA-AURAMINA
Los ácidos micólicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad para
los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que
aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El
permanganato de potasio, empleado como contraste, evita la fluorescencia inespecífica.
Todos los microorganismos ácido-alcohol resistentes, incluyendo los esporozoarios
parásitos, se tiñen con estos colorantes (Alché, 2016).

4. Indique 5 bacterias Gram positivas y 5 Gram negativas.

Gram (+): Gram (-):
Staphylococcus aureus. Neisseria meningitidis.
Clostridium botullinum. Escherichia coli.
Streptococcus sanguis. Salmonella enteritidis.
Clostridium tetani Brucella abortus.
Streptococcus pyrogenes. Pasteurella multocida.
 (Enciclopedia de Ejemplos, 2017).

5. Cuál es la función del etanol en la tinción de Gram.

Cuando se añade etanol a una mezcla de células Gram positivas y Gram negativas teñidas
con cristal violeta, las células Gram positivas quedan teñidas de violeta: no puede
atravesar la gruesa capa de mureína (pueden hacerlo si se prolonga excesivamente el
contacto con el alcohol). La pared de las bacterias Gram negativas debe su rigidez a una
capa de mureína más delgada, a través de la cual el alcohol extrae el cristal violeta de
estas células. Su citoplasma queda incoloro y puede teñirse de color rosa con el colorante
de contraste: la safranina (Universidad de Granada, 2015).

7. BIBLIOGRAFÍA.

Alché J. (2016). Técnicas de tinción. Fundamentos [En línea]. Consultado el 26 de noviembre del
2017, en: http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
Atilano V. (2013). Tinción Diferencial [En línea]. Consultado el 26 de noviembre del 2017, en:
https://es.scribd.com/doc/126476446/60304673-Tincion-diferencial-pdf
Enciclopedia de Ejemplos (2017). Bacterias Gram positivas y Gram negativas [En línea].
Consultado el 26 de noviembre del 2017, en: http://www.ejemplos.co/20-ejemplos-de-
bacterias-gram-positivas-y-gram-negativas/
Núñez L. (2016). DIFERENCIAS ENTRE GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS [En línea].
Consultado el 26 de noviembre del 2017, en: https://diferenciasentre.org/diferencias-
entre-gram-positivas-y-gram-negativas/
Sánchez J. (2010). Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas [En línea]. Consultado el 26 de
noviembre del 2017, en: http://biologiamedica.blogspot.com/2010/09/bacterias-gram-
positivas-y-gram.html
Universidad de Granada (2015). Métodos Tinciones Negativas [En línea]. Consultado el 26 de
noviembre del 2017, en: http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm