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2015
I
INDICE DE MATERIAS
Capitulo Página
RESUMEN 1
SUMMARY 2
1 INTRODUCCIÓN 3
2 REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 6
2.2 Antioxidantes 7
2.3 Antocianinas 9
2.4.2 Vitamina E 11
2.5 Polifenoles 11
3 MATERIAL Y MÉTODO 13
4 DISCUSIÓN DE RESULTADOS 20
5 CONCLUSIONES 30
6 BIBLIOGRAFÍA 32
III
INDICE DE CUADROS
Cuadro Página
INDICE DE FIGURAS
Figura Página
ÍNDICE DE IMÁGENES
Imagen Página
1 Imagen de la murta 6
3 Extractor de jugo 15
1
RESUMEN
SUMMARY
In this study the effect of processing time during juice extraction from fresh murtilla (Ugni
molinae Turcz) berries by steam condensation was investigated, using as control
parameters variation in the quality of bioactive compounds, by determining antioxidant
activity by the DPPH radical scavenging method, content of anthocyanin by pH differential
method and content of total polyphenols by the Folin-Ciocalteu method. The assays were
conducted in triplicate for 5 processing time (15, 25, 35, 45, 55 min) and the
corresponding analysis were performed on the same day of processing and after 2
months storage at a temperature of 5 °C.
Prediction models were developed to correlate processing time to concentration of
bioactive compounds. A statistical analysis of the experimental data showed that 34 min
was the optimum extraction time, where the highest antioxidant activity was determined
together with the highest concentration of total polyphenols and total anthocyanin. A
processing time above this value would lead mainly to a dilution of the bioactive
compounds in the juice, while a shorter extraction time would leave a great quantity of
these compounds in the extraction residues. The analysis performed after 2 months
storage at 5 °C showed a decrease of about 9.7% in antioxidant activity, 35% in content
of total polyphenols and 36% in content of total anthocyanins, with consistent results for
all assayed extraction times. The highest concentration of total polyphenols and total
anthocyanins were always determined in the extract at an assayed time of 35 min. Under
storage conditions of the samples, the degradation of bioactive compounds is inevitable,
as can be deduced from experimental results that could serve the industry in the
production of juices with high content of bioactive compounds, and therefore with higher
added value.
3
1 INTRODUCCIÓN
Los berries son frutos muy destacados hoy en día, sus cualidades benéficas para el
organismo humano han generado gran interés por el estudio y uso de éstas, ya que
tienen capacidades antioxidantes muy importantes, además de poseer cualidades
antibacterianas y antinflamatorias. También se aplica mucho en el área de la
cosmetología y en el rubro de los alimentos se destaca una larga variedad de productos
para consumo, mermeladas, jugos, lácteos etc, considerando también la utilización de
sus compuestos bioactivos para diversos fines en la industria. Los berries comprenden
especies de cuatro géneros como fragaria, rubus, ribes y vaccinium. Los frutos berries
que se pueden encontrar dentro de estos géneros son múltiples como por ejemplo
arándanos, frutillas, frambuesas, murtilla, moras, etc.
La murtilla, murta o mutilla (REYES et al., 2010) también conocida como guayaba chilena
(SCHRECKINGER et al., 2010) es un fruto del cual su arbusto pertenece a la familia de
los Myrtaceae (Delporte et al., 2007), su ubicación en Chile comprende desde la Región
del Libertador Bernardo O’Higgins hasta la Región de Aysén (TACON et al., 2006),
comprendiendo su mayor crecimiento en el sur del país en las montañas costeras
(RUBILAR et al., 2006). El fruto ha tomado mucho interés en Chile y hace que sea la
única investigada con fines productivos y domesticación (TACON et al., 2006). La murtilla
silvestre ha sido recolectada a través del tiempo tanto para elaboración de alimentos
para consumo humano, principalmente mermeladas, conservas y licores, como también
para comercialización del fruto a granel y productos artesanales derivados (AGUILA,
2008).
La murtilla es caracterizada por sus buenas propiedades benéficas para la salud, lo cual
la hace un fruto muy atractivo para su estudio; por ejemplo su capacidad antioxidante es
de gran interés tanto en el aspecto biológico como en la industria alimentaria. Un
alimento con buena actividad puede entrar al grupo de los alimentos funcionales debido
su valor benéfico para la salud. Si se habla de aspecto nutricional el fruto como ente
antioxidante es de gran relevancia, contienen antioxidantes naturales que combaten
4
Se han identificado diversos tipos de compuestos bioactivos que están presentes como
por ejemplo flavonoides y glucosidos como epicatequina y campherol en extractos
etanólicos y Ácido Gálico en extractos acuosos de hojas de murtilla. (AGUIRRE et al.,
2006). Análisis realizados arrojaron que la hoja de murtilla posee una gran cantidad de
polifenoles, incluso en mayor proporción que el fruto. (GUTIERREZ et al., 2012).
También encontraron triterpenoides y otros compuestos fenólicos como los ácidos
fenólicos y taninos en el fruto. Estos antioxidantes pueden prevenir la oxidación de
lípidos y por lo tanto mejorar la calidad y prolongar la vida útil de los alimentos sensible
a la oxidación.
Las propiedades benéficas de los polifenoles destacan al ser ingeridos, por ejemplo a
nivel del organismo humano cuando existe un desbalance entre la producción de
radicales libres y antioxidantes se produce lo que se llama el estrés oxidativo. La
concentración ideal de estos compuestos fenólicos en el fruto da relevancia para su
consumo y este puede ayudar a nivelar este desbalance, es por esto que su
cuantificación le puede dar un valor agregado diferente al alimento.
Los antocianos en la murtilla también cumplen un rol muy importante. El estudio de estos
pigmentos y se ha intensificado gracias a sus posibles efectos terapéuticos y benéficos,
dentro de los cuales se encuentran la reducción de la enfermedad coronaria, los efectos
anticancerígenos, antitumorales, antiinflamatoria y antidiabética; además del
mejoramiento de la agudeza visual y del comportamiento cognitivo. Las propiedades
bioactivas de las antocianinas abren una nueva perspectiva para la obtención de
productos coloreados con valor agregado para el consumo humano (GARZON, 2008).
Los efectos antimicrobianos de hojas de murta rara vez han sido investigados. Los
ácidos fenólicos, y también pequeños fragmentos de lignina, que se pueden encontrar
en los extractos de hojas, podrían ser potenciales sustancias antimicrobianas (DAGLIA,
2012).Los mecanismos de la actividad antimicrobiana siguen siendo en su mayoría
desconocidos. Una hipótesis del efecto antimicrobiano es que los polifenoles interactúan
con la membrana plasmática de las bacterias (PASTENE, 2009).
5
Hipótesis de trabajo
El tiempo de proceso influye sobre la calidad y estabilidad de los jugos extraídos a partir
de murtilla fresca (Ugni molinae Turcz) por medio de la condensación de vapor de
agua.
Objetivo general
Objetivos específicos
2 REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
También conocida como murtilla, es una especie nativa de Chile que se encuentra
distribuida principalmente desde la VII a la XI Región y está ampliamente representada
en la X Región. Es un arbusto frutal siempre verde perteneciente a la familia Myrtaceae.
Su fruto es una baya globosa muy aromática y sabrosa, teniendo por ello amplias
posibilidades de mercado interno y probablemente en el mercado externo para productos
con diferentes grados de industrialización (VILLAGRA, 2006). El fruto es utilizado para
el consumo fresco, fabricación artesanal de mermeladas, jarabes, postres y licores. Es
una de las frutas silvestres más populares de Chile y la única investigada con fines
productivos y de domesticación (TACON et al., 2006). Estudios sobre la composición
química de las hojas señalan la presencia de polifenoles (RUBILAR et al., 2006),
compuestos que se caracterizan por tener propiedades antioxidantes y bajas toxicidades
(DEVANY et al., 1997).
2.2 Antioxidantes
2.3 Antocianinas
El color de las antocianinas depende del número y orientación de los grupos hidroxilo y
metoxilo de la molécula. Incrementos en la hidroxilación producen desplazamientos
hacia tonalidades azules mientras que incrementos en las metoxilaciones producen
coloraciones rojas (GARZON, 2008).
2.5 Polifenoles
Son compuestos bio-sintetizados por las plantas (frutos, hojas, tallos, etc.). La principal
característica estructural de los polifenoles es poseer uno o más grupos hidroxilo (-OH)
unidos a uno o más anillos bencénicos. Aunque son primariamente conocidos por sus
propiedades antioxidantes, la mayor parte de los polifenoles exhibe, además, de otras
actividades biológicas potencialmente benéficas para la salud.
Los polifenoles, que generalmente dan cuenta de la mayor parte de la actividad
antioxidante de la frutas y verduras, se clasifican en flavonoides y no flavonoides y estos
generalmente son divididos en taninos hidrolizables que son ésteres del Ácido Gálico de
glucosa y otros azucares, fenilpropanoides como la lignina, flavonoles y taninos
condensados.
Estudios realizados recientemente han demostrado que la murta posee flavonoles,
flavan-3-oles y en general poseen un contenido en polifenoles alrededor de los 32 mg
Ácido Gálico/100g (RUIZ et al., 2010).
12
El Ácido Gálico Es un ácido fenólico natural soluble en agua, se utiliza como estándar
para curvas de calibración para cuantificar polifenoles totales, es decir, es un
equivalente. Su lectura es generalmente en mg de ácido/100 gr o mL de muestra. Este
ácido está presente en plantas frutas y verduras y se le atribuyen varios efectos
biológicos como actividad antiinflamatoria, antioxidante y antibiótica.
La Figura 4, muestra la estructura del Ácido Gálico, tanino hidrolizado por la enzima
tansa (AGUILAR et al., 2007).
3 MATERIAL Y MÉTODO
La materia prima se consiguió entre marzo y mayo del año 2014. Se compró en la feria
fluvial de Valdivia fresca y se llevó inmediatamente al laboratorio para su posterior
análisis. La fruta se conservó a una temperatura de 5 °C y el tiempo de extracción del
jugo fue de (15, 25, 35, 45, 55) minutos para poder determinar el mejor tiempo de
extracción de compuestos bioactivos presentes y su estabilidad en el almacenamiento.
El extracto obtenido por condensación se almacenó en botellas de 50 mL. El análisis se
realizó en el Instituto de Ciencias y Tecnología de los Alimentos (ICYTAL).
Este consiste en accionar una fuente de calor con vapor desde abajo hacia arriba, para
alcanzar los frutos con el vapor caliente, que hará su ablandamiento y destilación de sus
frutos para extraer su jugo, precipitándose caliente y pasteurizado para ser
inmediatamente embotellado. Este proceso se realiza con un equipo de acero inoxidable,
de tres cilindros apilables en forma vertical donde existen 3 operaciones en el proceso.
14
Primera operación: Es realizado por el cilindro inferior, el cual contiene agua y en el fondo
se le aplica una fuente de calor para que el agua hierva, el vapor que se genere subirá
hasta alcanzar el cilindro 2 y 3.
El receptor de jugo está conectado hacia afuera con una “canilla” que extraerá el jugo
listo para embotellar.
Tercera operación: Compuesta por el tercer cilindro, por encima del que está al medio,
contiene una malla en su interior para contener las frutas, llenado el recipiente y tapado,
estará listo para recibir el vapor caliente emergiendo del primer cilindro, que con su malla
adecuada hará que circule el calor y permitir la recepción del vapor arriba.
Una vez ablandada y expandida la fruta por el calor del vapor, precipitará su jugo que
caerá al segundo cilindro con recipiente para ser inmediatamente embotellado y sellado,
directo por la llave de paso.
peso fresco del fruto y posteriormente el peso del extracto residual obteniéndose la masa
inicial y final de cada proceso.
𝐴𝑏𝑠𝑡=0 − 𝐴𝑏𝑠𝑡=𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙
% 𝑑𝑒 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑐𝑖ó𝑛 = × 100 Ec. 1
𝐴𝑏𝑠𝑡=0
Absorbancia 515 nm
0,8
0,6 y = -0,0076x + 0,896
0,4 R² = 0,9983
0,2
0
0 20 40 60 80 100 120
Trolox equivalente (mg/L)
100
80
60
% IRL
40
y = 0,8639x - 1,5873
20 R² = 0,9983
0
0 20 40 60 80 100 120
-20
Trolox equivalente (mg/L)
Se diluyeron las muestra 5 veces, dado que el contenido de antocianinas es alto, una
vez las muestras diluidas deben estar claras, sin turbidez ni sedimento. Cualquier
sedimento debería ser removido centrifugando o filtrando la muestra. Si la muestra está
libre de turbidez, la absorbancia a 700 nm debería ser 0. La turbidez puede ser corregida
midiendo la absorbancia a 700 nm y sustrayendo este valor de la absorbancia a la
longitud de onda de máxima absorción (510-540). La absorbancia total se calculó con la
siguiente (Ec.2).
Una vez diluidas las muestras se midió su absorbancia (pH 4,5 y pH 1,0) a la longitud de
onda de máxima absorción (entre 510 y 540 nm). La determinación del contenido de
antocianinas está basada en la Ley de Lambert-Beer (A=ε·C·L). A; corresponde a la
absorbancia que es medida con un espectrofotómetro, ε; corresponde a la absorbancia
molar, una constante física para especies moleculares en un solvente a una determinada
longitud de onda. Se pueden utilizar los valores de absorbancia molar para pigmentos
purificados tomados de la literatura, haciendo innecesario determinarlos. La absorbancia
molar también se conoce como coeficiente de extinción molar. C es la concentración
molar, L es la longitud de recorrido en cm y la mayoría de las cubetas para
espectrofotómetro tienen una longitud de 1. La concentración en mg/L puede ser
determinada multiplicando por el peso molecular (PM) del pigmento.
𝐴×𝑃𝑀×𝐹𝐷
𝐶= × 1000 Ec.3
𝜀×𝐿
19
1
Absorbancia 765 nm
0,8
0,6
0,4 y = 0,0008x
0,2 R² = 0,9904
0
0 200 400 600 800 1000 1200
ácido galico en ppm
Los datos obtenidos fueron analizados estadísticamente para correlacionar las variables
de respuesta en función del tiempo de proceso y se ajustaron a un modelo de regresión
polinomial en forma de una ecuación cuadrática para todas las variables. La actividad
antioxidante en equivalente Trolox (TE) se correlacionó con el tiempo con un coeficiente
de determinación R2=0,72 (P-Valor: 0,0004) a un nivel de confianza de 95%, arrojando
la máxima concentración de TE a 29 min de extracción.
(MATHIAS, 2014a) determinó que el mejor tiempo de extracción para obtener una
máxima concentración en equivalentes Trolox (TE) fue de 30 minutos en jugo de murtilla
congelada, lo que indica que independientemente si la fruta estuvo fresca o almacenada
no hubo diferencias significativas en el tiempo óptimo de extracción.
4000 98,75
Trolox Equivalente (mg/L) %IRL
98,7
Trolox Equivalente (mg/L)
3000 98,65
98,6
% IRL
2000 98,55
98,5
1000 98,45
98,4
0 98,35
(15´) (15´) (25´) (25´) (35´) (35´) (45´) (45´) (55´) (55´)
Tiempo de Extracción
Compara la media de los valores en el día 1 de extracción versus los valores arrojados
2 meses después.
4000 99
Trolox Equivalente (mg/L) %IRL
Trolox Equivalente (mg/L)
98,8
3000
98,6
% IRL
2000 98,4
98,2
1000
98
0 97,8
Los datos obtenidos fueron analizados estadísticamente para correlacionar las variables
de respuesta en función del tiempo de proceso y se ajustaron a un modelo de regresión
polinomial en forma de una ecuación cuadrática para todas las variables. La
concentración de polifenoles totales en equivalente Ácido Gálico (EAG) se correlacionó
con el tiempo con un coeficiente de determinación R2=0,66 (P-Valor: 0,0016) a un nivel
de confianza de 95%, arrojando la máxima concentración de EAG a 34 min de extracción
Los daños provocados por la migración del agua cuando se produce una congelación en
los espacios intercelulares provoca que las células se deshidraten a causa del flujo
osmótico de agua del interior al exterior, lo puede producir una rotura en las paredes
celulares (CASP Y ABRIL, 1999).
25
La Figura 10, muestra la gráfica del contenido polifenoles totales en función del tiempo
de procesamiento.
6000
5000
Eq. Ácido Gálico (mg/L)
4000
3000
2000
1000
0
15 25 35 45 55
Tiempos de extracción (min)
las cuales se pudieron precipitar debido al pH de la solución, esta unión reduce el número
de grupos hidroxilo que es lo que mide el análisis (AINSWORTH y GILLESPIE, 2007).
Compara la media de los valores en el día 1 de extracción versus los valores arrojados
2 meses después.
La Figura 11, muestra la gráfica del contenido de polifenoles totales en función de los
días que se almacenó el extracto. Los valores entre paréntesis indican el tiempo en
minutos para cada extracto utilizado.
6000
5000
Ácido Gálico (mg/L)
4000
3000
2000
1000
0
1(15´) 60(15´) 1(25´) 60(25´) 1(35´) 60(35´) 1(45´) 60(45´) 1(55´) 60(55´)
Días de Almacenamiento
Las antocianinas son compuestos hidrosolubles pero sensibles a varios factores eso
podría explicar también la baja concentración en la extracción. Uno de los factores fue
el incremento en la exposición a la temperatura. Las antocianinas soportan altas
temperaturas (sobre 60°C), pero por corto tiempo y su degradación es en primer orden.
Por lo tanto las antocianinas altamente hidroxiladas son más sensibles al tratamiento
térmico que las metiladas, glicosidadas y acetiladas (FENMA, 2000). La temperatura es
un factor determinante en la degradación de las antocianinas (MIN-SHENG y PO-JUNG,
2007). Incrementos en la temperatura provocan pérdidas en el azúcar glicosidante en el
posición 3 de la molécula y apertura de anillo, con la inevitable producción de chalconas
incoloras (GARZÓN, 2008). Esto podría explicar también la pérdida de color además de
la dilución. Gorriti Gutierrez et al., (2009) investigaron la extracción de antocianinas de
maíz morado a temperaturas entre 25 y 90ºC. Así, obtuvieron que el mayor rendimiento
28
9
8
[ ] Antocianinas (mg/L)
7
6
5
4
3
2
1
0
15 25 35 45 55
Tiempos de extracción (min)
actuar como nucleofilo y atacar el catión falvilio en el C-2 formando la base carbinol
incolora siempre y cuando la concentración de azucares sea baja y la actividad de agua
no se vea afectada. De acuerdo a lo reportado por (SAUCIER, 2010), la temperatura de
almacenamiento, los tratamientos térmicos y enzimáticos en condiciones anaeróbicas
son factores responsables de la pérdida de antocianinas, desplazando los equilibrios de
éstas hacia las formas de chalconas, las cuales se les atribuyen características como de
los flavonoides, que cuentan con diversas actividades biológicas.
Compara la media de los valores en el día 1 de extracción versus los valores arrojados
2 meses después.
La Figura 13, muestra la gráfica el contenido de antocianinas en función de los días que
se almacenó el extracto. Los valores entre paréntesis indican el tiempo en minutos para
cada extracto utilizado.
9
8
7
[] Antocianinas (mg/L)
6
5
4
3
2
1
0
1(15´) 60(15´) 1(25´) 60(25´) 1(35´) 60(35´) 1(45´) 60(45´) 1(55´) 60(55´)
Días de Almacenamiento
5 CONCLUSIONES
- El factor dilución fue factor de degradación en cada variable para los tiempos de
45 y 55 minutos de extracción dejando como conclusión que tiempos iguales o
superiores a estos declinan el rendimiento de extracción.
32
6 BIBLIOGRAFÍA
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